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去整合素Echistatin对糖尿病兔早期后发性白内障的抑制作用及眼内安全性

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中华实验眼科杂志 2014年第11期32卷 975-979页

作者：钱光霞谭少健梁皓陈迎迎广西医科大学第一附属医院眼科南宁530021

背景后囊膜混浊（PCO）是影响白内障术后视力的主要原因,糖尿病患者白内障术后更容易发生PCO.研究证实,去整合素Echistatin（Ecs）能抑制体外晶状体上皮细胞（LECs）的增生,从而抑制PCO的形成,但其机制和安全剂量有待证实.目的研究不... 详细信息

背景后囊膜混浊（PCO）是影响白内障术后视力的主要原因,糖尿病患者白内障术后更容易发生PCO.研究证实,去整合素Echistatin（Ecs）能抑制体外晶状体上皮细胞（LECs）的增生,从而抑制PCO的形成,但其机制和安全剂量有待证实.目的研究不同质量浓度Ecs对糖尿病兔早期PCO发生过程中LECs增生的抑制作用及Ecs在眼内应用的安全剂量.方法用随机数字表法将15只新西兰大白兔分为5个组,用四氧嘧啶兔耳缘静脉注射法建立兔糖尿病模型,然后兔右眼行常规晶状体囊外摘出术,术后单纯糖尿病兔前房注入蒸馏水0.2 ml作为对照组,术后按照分组前房内分别注入5.0、7.5、10.0和15.0 μg/ml的Ecs0.2 ml.术后裂隙灯生物显微镜下观察眼前段炎症反应及PCO形成和分级情况.术后10d取出兔右眼,制备常规石蜡切片,采用免疫组织化学法检测PCO发生过程中LECs中增生细胞核抗原（PCNA）的表达以确定Ecs对PCO抑制的有效剂量;采用常规组织病理学方法检查角膜和视网膜结构的形态学改变,并采用TUNEL法检测角膜内皮细胞及视网膜内核层细胞的凋亡情况,以确定Ecs对眼内组织的安全剂量.结果各组兔实验眼晶状体囊外摘出术后出现不同程度的角膜水肿及前房渗出,对照组和5.0 μg/ml Ecs组术后3～5 d炎症反应消失,≥7.5 μg/ml Ecs组术眼均于术后7d恢复正常.术后对照组和5.0 μg/ml Ecs组PCO均为1～2级,≥7.5 μg/ml Ecs组术眼PCO均为0级.对照组、5.0 μg/ml Ecs组、7.5 μg/ml Ecs组和10.0 μg/ml Ecs组LECs中PCNA阳性细胞表达值（A值）的总体比较差异有统计学意义（F=18.006,P=0.001）,与对照组比较,7.5和10.0 μg/ml Ecs组LECs中PCNA阳性细胞表达值明显下降,差异均有统计学意义（P=0.010、0.001）.各组兔眼角膜内皮细胞排列整齐,视网膜内界膜与各层组织结构完整.TUNEL法检测可见≤10.0 μg/ml Ecs各组与对照组间角膜内皮细胞及视网膜内核层细胞凋亡值（A）的差异均无统计学意义（均P＞0.05）,而15.0 μg/ml Ecs组较≤10.0μg/ml Ecs各组角膜内皮细胞和视网膜内核层细胞的凋亡值均明显增加,与对照组比较差异有统计学意义（P=0.004、0.018）.结论 Ecs对糖尿病兔早期PCO具有抑制作用,其剂量7.5和10 μg/ml时疗效较好且对眼内组织无明显毒性作用,可继续用于其对糖尿病兔PCO抑制的远期效果观察.

关键词：去整合素后发性白内障增生细胞核抗原凋亡糖尿病动物模型

去整合素echistatin对人晶状体上皮细胞增生、黏附、移行的影响

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中华实验眼科杂志 2013年第4期31卷 329-333页

作者：周星谭少健粱皓陈迎迎李霞广西医科大学第一附属医院眼科南宁530021

背景随着白内障手术的广泛开展，后发性白内障（PCO）的发病率逐渐升高，近年来的研究证实，去整合素类药物对PCO有抑制作用。目的探讨去整合素echistatin（Ecs）对人晶状体上皮细胞（LECs）株SRA01／04增生、黏附和移行的影响。方法取... 详细信息

背景随着白内障手术的广泛开展，后发性白内障（PCO）的发病率逐渐升高，近年来的研究证实，去整合素类药物对PCO有抑制作用。目的探讨去整合素echistatin（Ecs）对人晶状体上皮细胞（LECs）株SRA01／04增生、黏附和移行的影响。方法取对数生长期的SRAOI／04细胞，培养液中加入不同质量浓度的去整合素Ecs（0、2．5、5．0、7．5、10．0、15．0、20．0mg／L）共培养细胞24、48、72h，用MTT法检测药物对细胞增生的影响及药物作用90rain后对细胞黏附的影响；对融合的细胞进行划痕试验，在倒置显微镜下观察并测量划痕宽度，干预培养24h、48h后测量记录划痕愈合情况。结果不同质量浓度去整合素Ecs（2．5、5．0、7．5、10．0、15．0、20．0mg／L）作用24、48、72h后对SRA01／04细胞增生的抑制率分别为2．6％、15．4％、21．2％、34．7％和46．1％、58．2％，6．6％、21．9％、38．2％、50．0％、60．7％、76．9％以及9．8％、29．0％、46．6％、63．4％、69．1％、92．4％。除2．5mg／L组外，各质量浓度组吸光度（A490）值与0mg／L组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），且随Ecs作用时间的延长，细胞的A490值逐渐下降，差异有统计学意义（P〈0．05）；Ecs对各质量浓度组SRA01／04细胞的黏附抑制率分别为2．6％、15．0％、26．1％、35．3％、45．2％、54．5％，除2．5mg／L组外，各质量浓度组A490值与0mg／L组比较差异均有统计学意义（P〈O．05）；Ecs作用24h、48h后各质量浓度组SRA01／04细胞的移行距离与0mg／L组相比有不同程度的缩短，差异有统计学意义（P〈0．05），且随Ecs作用时间的延长，细胞移行距离缩短，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论去整合素Ecs可抑制人LECs的增生、黏附和移行，其作用呈剂量和时间依赖性，Ecs对PCO的防治可起到积极作用。

关键词：后发性白内障去整合素晶状体上皮细胞 Echistatin

去整合素kistrin对兔眼晶状体后囊Ⅳ型胶原表达的影响

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中华实验眼科杂志 2012年第1期30卷 37-40页

作者：胡凤婷谭少健梁皓何剑峰李霞黄敏丽陈金卯陈迎迎广西医科大学第一附属医院眼科南宁530021

背景白内障囊外摘出术后残留的晶状体上皮细胞（LECs）增生是后囊膜胶原产生进而形成后发性白内障的生物学基础，去整合素可与细胞外基质（ECM）竞争结合整合素分子，理论上可以防治后发性白内障的形成，但其具体的作用机制有待进一步... 详细信息

背景白内障囊外摘出术后残留的晶状体上皮细胞（LECs）增生是后囊膜胶原产生进而形成后发性白内障的生物学基础，去整合素可与细胞外基质（ECM）竞争结合整合素分子，理论上可以防治后发性白内障的形成，但其具体的作用机制有待进一步研究。目的研究去整合素kistrin对兔眼晶状体后囊Ⅳ型胶原表达的影响。方法24只新西兰大白兔按照随机数字表法分为kistrin注射组及生理盐水对照组，每组12只。两组兔均行右眼透明晶状体囊外摘出术，建立兔晶状体后囊膜混浊（PCO）模型，术毕kistrin注射组囊袋内注入80mg／Lkistrin0．2ml，生理盐水对照组注入等量生理盐水。术后1、3、5、7、14d，在裂隙灯下观察实验动物晶状体PCO情况，并按照Odrich法进行分级。术后14d及3个月分别处死两组兔各6只，取出晶状体进行常规石蜡切片，行苏木精一伊红染色，光学显微镜下观察晶状体病理改变；行Masson染色观察晶状体囊袋内胶原纤维增生情况，免疫组织化学法检测兔晶状体后囊Ⅳ型胶原的表达。结果术后14d，生理盐水对照组与kistrin注射组各级PCO的眼数差异无统计学意义（P=0．093），术后1、2、3个月，生理盐水对照组形成2～3级PCO的眼数明显多于kistrin注射组，差异均有统计学意义（P=0．041、0．014、0．022）。晶状体组织学检查表明，术后14d生理盐水对照组LECs层数明显多于kistrin注射组，瞳孔区后囊膜可见单层细胞黏附，kistrin注射组后囊则保持光滑，术后3个月可见生理盐水对照组晶状体后囊的LECs转化为纤维细胞，kistrin注射组较少见。Masson染色显示术后3个月生理盐水对照组晶状体前囊膜撕囊口处与后囊膜之间胶原纤维的蓝绿色染色明显多于kistrin注射组。免疫组织化学染色表明，术后14d及30d，生理盐水对照组晶状体后囊膜Ⅳ型胶原的灰度值均明显低于kistrin注射组，差异均有统计学意义（P=0．000、0．001）。结论去整合素kistrin能够抑制兔眼晶状体囊外摘出术术后晶状体后囊LECs和Ⅳ型胶原增生。

关键词：去整合素晶状体/囊外摘出术上皮细胞后囊膜混浊 Ⅳ型胶原

去整合素Kistrin对兔眼LECs增殖的抑制

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中国老年学杂志 2011年第6期31卷 974-977页

作者：陈迎迎梁皓李霞谭少健姬翔广西医科大学第一附属医院眼科广西南宁530021

目的探讨不同浓度的去整合素Kistrin对兔眼后发性白内障(Posterior capsular opacification,PCO)发生过程中晶状体上皮细胞(lensepithelial cells,LECs)增殖的抑制作用,以明确Kistrin的眼内有效浓度。方法制备兔眼PCO模型,行白内障摘除... 详细信息

目的探讨不同浓度的去整合素Kistrin对兔眼后发性白内障(Posterior capsular opacification,PCO)发生过程中晶状体上皮细胞(lensepithelial cells,LECs)增殖的抑制作用,以明确Kistrin的眼内有效浓度。方法制备兔眼PCO模型,行白内障摘除术,术毕3个实验组前房分别注入40μg/L、80μg/L、160μg/L的Kistrin,对照组前房注入林格氏液。术后在裂隙灯显微镜下观察PCO发生情况及形态,于术后14 d及3个月时取材,分别检测晶状体囊膜上LECs增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果术后第14天实验组LECs的PCNA表达均较对照组降低(P0.05)。同一浓度术后第14天与3个月时LECs的PCNA表达比较,仅80μg/L组差异无显著性,余三组比较差异有显著性。结论 80μg/L Kistrin术后早期及3个月均可有效地抑制兔眼PCO的发生,可作为进一步研究去整合素抑制PCO形成研究的较适宜浓度。

关键词：去整合素后发性白内障增殖细胞核抗原晶状体上皮细胞兔

去整合素抑制体外培养的人眼晶状体上皮细胞生长的研究

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广西医科大学学报 2006年第3期23卷 348-351页

作者：谭少健梁皓赵军叶长华胡启平广西医科大学第一附属医院眼科中心南宁530021 山东省临沂市人民医院眼科广西医科大学细胞生物学教研室

目的:研究去整合素Kistrin对体外培养的人眼晶状体上皮细胞(HLECs)生长的抑制作用。方法:MTT法检测不同浓度去整合素Kistrin(5、10、20、40、80μg/L)对HLECs的黏附抑制作用;划线法检测80μg/L的去整合素Kistrin对HLECs作用不同时间后(2... 详细信息

目的:研究去整合素Kistrin对体外培养的人眼晶状体上皮细胞(HLECs)生长的抑制作用。方法:MTT法检测不同浓度去整合素Kistrin(5、10、20、40、80μg/L)对HLECs的黏附抑制作用;划线法检测80μg/L的去整合素Kistrin对HLECs作用不同时间后(24、48、72h)对其移行的抑制作用;MTT法检测不同浓度去整合素Kistrin(20、40、80μg/L)对HLECs增殖的抑制作用。结果:不同浓度的去整合素Kistrin(20、40、80μg/L)对HLECs的黏附和增殖具有抑制作用。80μg/L的去整合素Kistrin可显著抑制HLECs的移行。结论:去整合素Kistrin对体外培养的HLECs的生长具有抑制作用。

关键词：去整合素 Kistrin 晶状体上皮细胞抑制人

去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株凋亡的影响

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眼科新进展 2009年第9期29卷 667-670页

作者：张鸿侃谭少健梁皓李霞陈迎迎广西医科大学第一附属医院眼科中心广西壮族自治区南宁市530021

目的探讨去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04的细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04用于实验。分别用含有不同浓度(80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1)kistrin的完全培养基孵育8h、16h、32h,然后... 详细信息

目的探讨去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04的细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04用于实验。分别用含有不同浓度(80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1)kistrin的完全培养基孵育8h、16h、32h,然后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并与阴性对照组(kistrin浓度为0μg.L-1)比较。用含kistrin的终浓度为160μg.L-1的培养基孵育细胞,于24h、32h后进行吖啶橙染色,倒置相差荧光显微镜观察细胞凋亡形态学变化,并与对照组(kistrin浓度为0μg.L-1)比较。结果kistrin作用8h时,阴性对照组与80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1kistrin孵育细胞组细胞凋亡率分别为(1.29±0.43)%、(5.48±0.66)%、(11.23±1.16)%、(20.77±1.46)%,kistrin作用16h时不同组别细胞凋亡率分别为(3.04±0.12)%、(7.68±0.23)%、(19.76±2.22)%、(32.36±3.29)%,kistrin作用32h时不同组别细胞凋亡率分别为(4.75±0.08)%、(72.15±7.04)%、(54.09±3.77)%、(43.27±3.32)%;在每个时间点各浓度的细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04有诱导凋亡的作用,为药物防治后发性白内障提供了新思路。

关键词：去整合素人晶状体上皮细胞株凋亡流式细胞仪吖啶橙染色

去整合素kistrin对兔晶状体上皮细胞凋亡及连接蛋白43表达的影响

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眼科新进展 2010年第3期30卷 207-209,221页

作者：胡凤婷谭少健梁皓何剑峰李霞黄敏丽陈金卯陈迎迎广西医科大学一附院眼科中心广西壮族自治区南宁市530021

目的研究去整合素kistrin对兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)的诱导凋亡作用,初步探讨这种凋亡作用与细胞连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达变化的联系。方法取12只新西兰大白兔,随机分为实验组与对照组,每组6只,行右眼透明... 详细信息

目的研究去整合素kistrin对兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)的诱导凋亡作用,初步探讨这种凋亡作用与细胞连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达变化的联系。方法取12只新西兰大白兔,随机分为实验组与对照组,每组6只,行右眼透明晶状体囊外摘除术,建立兔后囊膜混浊模型。术毕实验组囊袋内注入浓度为80μg.L-1的kistrin0.2mL,对照组注入等量生理盐水。术后1d、3d、5d、7d、14d在裂隙灯下观察实验动物眼部情况。术后14d处死动物,摘取眼球,进行常规石蜡切片,HE染色;TUNEL法检测LEC凋亡情况,计算出凋亡指数;间接免疫荧光法检测LEC中Cx43表达情况。结果术后实验组与对照组角膜眼前段情况无明显差异。HE染色显示对照组瞳孔区后囊单层细胞黏附,而实验组后囊则保持光滑。TUNEL法检测发现实验组LEC凋亡指数为(48.82±9.99)%,明显高于对照组的(12.36±7.53)%,2组比较差异有统计学意义(P去整合素kistrin在兔活体内可引起LEC间连接发生变化且可诱导LEC凋亡。

关键词：去整合素晶状体上皮细胞凋亡连接蛋白43

去整合素Echistatin抑制糖尿病兔远期后发性白内障

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眼科新进展 2014年第6期34卷 506-509页

作者：钱光霞谭少健梁皓陈迎迎广西医科大学第一附属医院眼科广西壮族自治区南宁市530021

目的观察并探讨不同浓度去整合素(Echistatin,Ecs)对糖尿病兔远期后发性白内障(posterior capsular opacification,PCO)发生过程中晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)增殖的抑制作用,以及其在眼内的安全性。方法建立糖尿病兔模... 详细信息

目的观察并探讨不同浓度去整合素(Echistatin,Ecs)对糖尿病兔远期后发性白内障(posterior capsular opacification,PCO)发生过程中晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)增殖的抑制作用,以及其在眼内的安全性。方法建立糖尿病兔模型,随机分为对照组(A组,术毕前房注入蒸馏水0.2 mL);实验组:B组、C组、D组(术毕前房分别注入5.0×10-3μg·L-1、7.5×10-3μg·L-1、10.0×10-3μg·L-1Ecs),术后裂隙灯下观察角膜、前房及PCO情况。术后6周取材,常规石蜡切片,HE染色。用免疫组织化学法检测PCO发生过程中LEC增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,TUNEL法检测角膜内皮细胞、视网膜神经节细胞层及内核层细胞的凋亡情况。结果 HE染色结果显示,术后6周各组角膜内皮细胞排列整齐、未见水肿,视网膜内界膜与各层组织结构完整,未见药物引起明显的组织损伤反应。各组间PCO分级差异有统计学意义(P=0.011)。免疫组织化学法检测各组后囊膜PCNA表达结果显示,A组、B组、C组、D组的平均光密度值分别为0.499±0.043、0.484±0.055、0.422±0.012、0.340±0.031,B组后囊膜上PCNA表达与A组差异无统计学意义(P>0.05),余组间两两比较差异均有统计学意义(均为P0.05)。结论 10.0×10-3μg·L-1Ecs对糖尿病兔远期PCO具有明显抑制作用,且对眼内相邻及重要组织无明显毒性作用,因此可选用此浓度进行后续研究。

关键词：去整合素后发性白内障增殖细胞核抗原凋亡糖尿病兔

去整合素Echistatin对糖尿病兔后发性白内障模型中晶状体上皮细胞间质转分化及胶原合成的影响

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眼科新进展 2014年第4期34卷 306-309页

作者：陈迎迎谭少健梁皓钱光霞广西医科大学第一附属医院眼科广西南宁市530021

目的观察去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)的影响,探讨Echistatin对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)间质转分化及胶原合成的抑制作用。方法应用四氧嘧啶耳缘静... 详细信息

目的观察去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)的影响,探讨Echistatin对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)间质转分化及胶原合成的抑制作用。方法应用四氧嘧啶耳缘静脉注射建立糖尿病兔模型,随机分组并行晶状体摘出术,术毕前房分别注入0.2 mL高压灭菌蒸馏水(对照组),7.5 mg·L-1Echistatin(7.5 mg·L-1组)、10.0 mg·L-1Echistatin(10.0 mg·L-1组),每组又分为10 d和6周2个时间点(n=4)。裂隙灯显微镜观察各组糖尿病兔术后10 d和6周PCO分级情况,同时摘取术眼应用RT-PCR法检测晶状体后囊膜上α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅳ型胶原mRNA表达情况。结果术后10 d,各组间α-SMA mRNA和IV型胶原mRNA表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。术后6周,Echistatin干预组PCO分级均明显低于对照组(P=0.024);7.5 mg·L-1Echistation组α-SMA mRNA表达为3.97±0.76,对照组为9.06±3.40,10.0 mg·L-1组为6.80±3.15,7.5 mg·L-1组明显低于其余两组(P=0.002、0.024);Ⅳ型胶原mRNA表达对照组为30.88±20.13,7.5 mg·L-1组为8.62±6.99,10.0 mg·L-1组为5.76±6.73,Echistatin干预组Ⅳ型胶原mRNA表达均低于对照组(P=0.005、0.002)。结论去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后PCO的发生和发展有一定的抑制作用,可能与其抑制晶状体后囊膜上α-SMA和Ⅳ型胶原的mRNA表达有关。

关键词：后囊膜混浊糖尿病去整合素上皮-间质转分化胶原合成