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南移养殖的刺参(Apostichopus japonicus)cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的研究

海洋与湖沼 2010年第6期41卷 850-856页

作者：崔静李太武苏秀榕李晔徐静周君应琪王中华李松伟宁波大学生命科学与生物工程学院宁波315211 宁波城市职业技术学院宁波315100 温州职业技术学院温州325035

以南移养殖的刺参为实验材料,采用非均一化的Oliga-dT引物定向克隆技术构建了南移刺参混合组织的cDNA文库。对文库质量的分析结果表明,cDNA文库的库容量为2.2×107cfu,重组率达95.8%,平均插入片段长度750bp左右。挑取cDNA克隆进行5’端... 详细信息

以南移养殖的刺参为实验材料,采用非均一化的Oliga-dT引物定向克隆技术构建了南移刺参混合组织的cDNA文库。对文库质量的分析结果表明,cDNA文库的库容量为2.2×107cfu,重组率达95.8%,平均插入片段长度750bp左右。挑取cDNA克隆进行5’端测序,成功测序185个反应,分析得到136个单基因簇(Unigene),其中包括40个重叠群(Contigs)、96个单拷贝EST(Singletons)。结果表明,克隆南移养殖的刺参原肌球蛋白(tropomyosin,Trp)cDNA全长序列为1112bp,ORF编码284个氨基酸,其预测蛋白的分子量为33.27kDa,等电点为4.56。该氨基酸序列与紫石海胆、南极大磷虾、锯缘青蟹、文昌鱼、河蟹、家蚕同源性分别为62%、51%、46%、49%、47%、46%。

关键词：刺参 cDNA文库基因克隆原肌球蛋白基因

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土耳其东毕吸虫原肌球蛋白基因的克隆

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 518-521页

作者：王春仁何国声石星明仇建华邢继兰许腊梅于万才黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨15001 黑龙江省兽医科学研究所黑龙江富裕161200

根据日本血吸虫原肌球蛋白cDNA序列和曼氏血吸虫的原肌球蛋白cDNA序列M27512的保守区设计引物,采用RT-PCR方法,成功克隆了土耳其东毕吸虫的原肌球蛋白全长cDNA序列。测序结果表明,TM序列全长1125bp,5'非翻译区为1bp～124bp,3'非翻译区为... 详细信息

根据日本血吸虫原肌球蛋白cDNA序列和曼氏血吸虫的原肌球蛋白cDNA序列M27512的保守区设计引物,采用RT-PCR方法,成功克隆了土耳其东毕吸虫的原肌球蛋白全长cDNA序列。测序结果表明,TM序列全长1125bp,5'非翻译区为1bp～124bp,3'非翻译区为980bp～1125bp,开放阅读框为125bp～979bp,编码284个氨基酸。将该序列与其他血吸虫的序列进行同源性比较,结果与埃及血吸虫的TM同源性为90%,与曼氏血吸虫、日本血吸虫的TM同源性均为88%,该基因已经提交GenBank,序列号为AY560898。

关键词：土耳其斯坦东毕吸虫 cDNA文库原肌球蛋白基因克隆

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土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因的原核表达

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中国兽医科学 2006年第3期36卷 212-215页

作者：王春仁仇建华何国声周庆民邢继兰许腊梅黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江省兽医科学研究所黑龙江富裕161200 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232

将pGEM-TM质粒上的土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白(TM)基因片段亚克隆至原核表达载体pET28a(+),重组的pET28-TM在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中经1 mmol/L IPTG诱导表达出一37.5 ku的融合蛋白。该蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测,出... 详细信息

将pGEM-TM质粒上的土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白(TM)基因片段亚克隆至原核表达载体pET28a(+),重组的pET28-TM在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中经1 mmol/L IPTG诱导表达出一37.5 ku的融合蛋白。该蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测,出现与目的蛋白大小一致的单一条带。Western-blotting检测结果表明,纯化的蛋白可被自然感染东毕吸虫的山羊血清识别,这为进一步研究东毕吸虫基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因原核表达

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土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达

土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达

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作者：邢继兰中国农业科学院

学位级别：硕士

东毕吸虫病(orientobilharziasis)是由东毕属吸虫寄生于牛、羊等多种动物的门静脉和肠系膜静脉内引起的一种血吸虫病，其尾蚴也可感染人类引起尾蚴性皮炎(cercarial dermatitis)，是一种重要的人兽共患寄生虫病。我国以土耳其斯坦东毕... 详细信息

东毕吸虫病(orientobilharziasis)是由东毕属吸虫寄生于牛、羊等多种动物的门静脉和肠系膜静脉内引起的一种血吸虫病，其尾蚴也可感染人类引起尾蚴性皮炎(cercarial dermatitis)，是一种重要的人兽共患寄生虫病。我国以土耳其斯坦东毕吸虫为主，该病在我国分布广泛，常呈地方和季节性流行，严重危害人们的健康并给畜牧业带来巨大经济损失。由于东毕吸虫感染人后特殊的发育过程，从而引起了人们广泛关注。目前东毕吸虫研究相对滞后于曼氏、日本血吸虫，因此深入研究东毕吸虫就显得尤为重要。本文利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了土耳其斯坦东毕吸虫成虫cDNA文库。采用RT-PCR结合RACE和已构建的cDNA文库克隆了土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白(tropomyosin，TM)基因，提交GenBank，登录号为AY560898。TM部分编码序列亚克隆至原核表达载体pET28a(+)，重组质粒pET28-TM在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达出可溶性融合蛋白，其分子量为37.5KDa左右，利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以识别自然感染东毕吸虫的山羊血清;将纯化蛋白与法国Montanide ISA 206佐剂等体积混合免疫家兔，并收集血清到免疫后第10周。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以被特异性免疫后血清识别，表明纯化蛋白可以刺激实验兔产生抗TM抗体。ELISA结果表明抗体在第5周时达到峰值，从第7周到第10周抗体一直保持较高水平。原肌球蛋白较好的免疫原性表明其在疫苗和诊断试剂研制方面有重要的应用前景。上述结果为进一步研究东毕吸虫病的免疫提供重要的基础。

关键词：土耳其斯坦东毕吸虫 cDNA文库原肌球蛋白基因克隆表达免疫

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土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因的克隆与序列分析

土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会

作者：王春仁何国声仇建华邢继兰许腊梅周庆民黑龙江八一农垦大学动物科技学院中国农科院上海家畜寄生虫病研究所黑龙江省兽医科学研究所

根据日本血吸虫原肌球蛋白(TM)cDNA序列和曼氏血吸虫的原肌球蛋白cDNA序列M27512的保守区设计引物,采用RT-PCR方法,成功克隆了土耳其东毕吸虫的原肌球蛋白全长cDNA序列。测序结果表明,TM序列全长1125 bp,5’非翻译区为1～124 bp,3’非... 详细信息

根据日本血吸虫原肌球蛋白(TM)cDNA序列和曼氏血吸虫的原肌球蛋白cDNA序列M27512的保守区设计引物,采用RT-PCR方法,成功克隆了土耳其东毕吸虫的原肌球蛋白全长cDNA序列。测序结果表明,TM序列全长1125 bp,5’非翻译区为1～124 bp,3’非翻译区为980～1125 bp,开放阅读框为125～979 bp,编码284个氨基酸。将该序列与其他血吸虫的序列进行同源性比较,结果与埃及血吸虫的TM同源性为 90％,与曼氏血吸虫、日本血吸虫的TM同源性均为88％,该基因已经提交GeneBank,序列号为AY560898．

关键词：土耳其斯坦东毕吸虫 cDNA文库原肌球蛋白基因克隆

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土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因的原核表达

土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因的原核表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会

作者：王春仁仇建华何国声邢继兰许腊梅黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江省兽医科学研究所中国农科院上海家畜寄生虫病研究所

将pGEM-TM质粒上的土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白(TM)基因片段亚克隆至原核表达载体 pET28a(+),重组的pET28-TM在大肠杆菌BL21(DE3)中经1 mmol／L的IPTG诱导表达出一大小为37．5 ku的溶合蛋白。该蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAG... 详细信息

将pGEM-TM质粒上的土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白(TM)基因片段亚克隆至原核表达载体 pET28a(+),重组的pET28-TM在大肠杆菌BL21(DE3)中经1 mmol／L的IPTG诱导表达出一大小为37．5 ku的溶合蛋白。该蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE检测为与目的蛋白大小一致的单一条带。 Western-blotting结果表明,纯化的蛋白可以被自然感染东毕吸虫的山羊血清所识别,为进一步研究东毕吸虫基因工程苗奠定了基础。

关键词：土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因原核表达

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猪TPM3基因内含子1的序列分析

猪TPM3基因内含子1的序列分析

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第十次全国畜禽遗传标记研讨会

作者：谢水华李加琪朱良瑞李艳芳梅盈洁华南农业大学动物科学学院

原肌球蛋白3基因(tropomyosin 3,TPM3)是肌肉收缩过程中重要的蛋白调节基因之一,研究TPM3基因的结构有助于进一步了解该基因的功能。本研究根据猪TPM3协基因全长cDNA 序列,并比较人与鼠的TPM3基因DNA序列,在保守区设计引物,通过PCR方法... 详细信息

原肌球蛋白3基因(tropomyosin 3,TPM3)是肌肉收缩过程中重要的蛋白调节基因之一,研究TPM3基因的结构有助于进一步了解该基因的功能。本研究根据猪TPM3协基因全长cDNA 序列,并比较人与鼠的TPM3基因DNA序列,在保守区设计引物,通过PCR方法从蓝塘猪中成功扩增出TPM3基因的内含子1,PCR产物测序获得一条864bp长度的基因片断,相关软件分析发现猪TPM3基因内含子1长度为739bp。在NCBI上进行同源比对分析发现该序列与人TPM3基因的同源性为80％。

关键词：猪 TPM3 原肌球蛋白基因内含子1

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