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节律基因Period2在人卵巢上皮性癌组织中表达的意义及在裸鼠移植瘤组织中过度表达对移植瘤生长的作用

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中华妇产科杂志 2015年第6期50卷 446-451页

作者：王朝霞李莉山西医科大学第一医院妇科太原030001

目的探讨节律基因Period2在卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者癌组织中表达的意义，并探讨Period2基因在裸鼠移植瘤组织中过度表达对移植瘤生长的作用及可能机制。方法选择2010年1月至2013年12月山西医科大学第一医院存档的卵巢癌石蜡标本22... 详细信息

目的探讨节律基因Period2在卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者癌组织中表达的意义，并探讨Period2基因在裸鼠移植瘤组织中过度表达对移植瘤生长的作用及可能机制。方法选择2010年1月至2013年12月山西医科大学第一医院存档的卵巢癌石蜡标本22份（卵巢癌组），其中Ⅰ期8份、Ⅱ期8份、Ⅲ期6份，另选取同期卵巢良性上皮性肿瘤石蜡标本6份（良性肿瘤组），采用实时定量PCR技术和蛋白印迹（westernblot）法分别检测两组患者肿瘤组织中Period2mRNA和蛋白的表达。使用卵巢癌细胞株SKOV3细胞构建卵巢癌裸鼠移植瘤模型，实验分为3组，即重组质粒组、空质粒组、对照组，每组8只裸鼠；利用基因转染技术转染Period2基因，采用实时定量PCR技术检测转染后3组裸鼠移植瘤组织中Period2mRNA的表达，监测裸鼠移植瘤的生长情况，并计算其抑瘤率；采用实时定量PCR技术和westernblot法分别检测转染后3组裸鼠移植瘤组织中抗凋亡基因BRE、促凋亡基因TNFR1、抑癌基因NIXmRNA和蛋白的表达。结果（1）患者肿瘤组织中Period2mRNA的表达水平，卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为2．59±0．50、0．47±0．08、0．42±0．08，良性肿瘤组为6．59±1．05；患者肿瘤组织中Period2蛋白的表达水平，卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为0．835±0．087、0．412±0．035、0．199±0．031，良性肿瘤组为0．874±0．094。除良性肿瘤组Period2蛋白与Ⅰ期卵巢癌比较差异无统计学意义（p〉0．05）外，良性肿瘤组Period2mRNA和蛋白的表达水平均明显高于卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期（P〈0．01）；且随着卵巢癌期别的升高，Period2mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P〈0．05）。（2）转染后2周，重组质粒组裸鼠移植瘤组织中Period2mRNA的表达水平为6．11±0．56，明显高于空质粒组、对照组（分别为0．50±0．09、0．44±0．08；P〈0．01）；重组质粒组移植瘤体积为（486±70）mm3，明显小于空质粒组、对照组[分别为（835±106）、（846±110）mm3；P〈0．01]；重组质粒组抑瘤率高达42．9％，明显高于空质粒组、对照组（分别为3．8％和0；P〈0．05）。（3）重组质粒组移植瘤组织中BREmRNA和蛋白的表达水平分别为0．48±0．16、0．432±0．010，均明显低于空质粒组（分别为12．69±0．86、0．730±0．019）、对照组（分别为13．48±0．98、0．703±0．022；P〈0．05），TNFR1、NIXmRNA和蛋白的表达水平均明显高于空质粒组、对照组（P〈0．05）。结论晚期卵巢癌组织中Period2mRNA和蛋白表达缺失。转染并稳定表达Period2基因后可使卵巢癌细胞的生长速度减慢，抑瘤率明显提高。Period2基因可能通过抑制BRE基因，促进TNFR1、NIX基因的表达而促进卵巢癌细胞的凋亡，从而发挥抑瘤作用。

关键词：卵巢肿瘤周期昼夜节律蛋白质类肿瘤移植受体肿瘤坏死因子 I型肿瘤抑制蛋白质类原癌基因蛋白质类膜蛋白质类

Stathmin对肝癌细胞HCCLM3增殖及其肿瘤相关基因表达的影响

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中华肝脏病杂志 2011年第8期19卷 571-576页

作者：甘淋李娟郭坤李岩舒宏王丽宋杰刘银坤州医学院医学基础研究中心 646000 上海复旦大学附属中山医院肝癌研究所

目的探讨人stathmin基因在肝癌发生、发展过程中的作用及其机制。方法化学合成stathmin序列特异性小干扰RNA，用脂质体Lipofectamine^TM2000转染人肝癌细胞株HCCLM3细胞。采用RT-PCR和Western blot技术检测stathmin的RNA干扰效率；用细... 详细信息

目的探讨人stathmin基因在肝癌发生、发展过程中的作用及其机制。方法化学合成stathmin序列特异性小干扰RNA，用脂质体Lipofectamine^TM2000转染人肝癌细胞株HCCLM3细胞。采用RT-PCR和Western blot技术检测stathmin的RNA干扰效率；用细胞计数试剂检测干扰细胞的生长增殖情况；用膜联蛋白V／碘化丙啶双标记流式细胞术检测细胞凋亡；并用荧光定量PCR检测肿瘤增殖凋亡的相关基因。均数两两比较用配对t检验，多样本均数比较采用单因素方差分析。结果RNA干扰HCCLM3细胞后，stathmin的表达被显著抑制（P〈0．05），抑制率达90％；在RNA干扰24、48h和72h时，HCCLM3细胞的增殖抑制率分别为13．04％±0．10％、28．10％±0．41％和37．36％±2．15％（F=4．21，P〈0．05）；RNA干扰后，细胞凋亡比例从9．20％±0．64％上升至25．11％±1．62％（F=44．67，P〈0．01）；且RNA干扰组细胞癌基因c-myc、c-fos和增殖相关基因ki-67的mRNA表达水平明显下降，促凋亡基因caspase-3、bax和p53的mRNA表达水平升高（P值均〈0．05）。结论stathmin可能通过调节肿瘤增殖相关基因的表达水平来促进细胞增殖、抑制细胞凋亡，参与肝癌的发生和发展进程。

关键词：癌肝细胞原癌基因蛋白质类 RNA干扰

新生大鼠缺氧缺血脑损伤后μ^-calpain活化及其他相关因子表达变化的时程及意义

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中华儿科杂志 2004年第6期42卷 441-445页

作者：江克文杨翠微水泉祥夏哲智张瑛浙江大学医学院附属儿童医院神经内科杭州310003

目的　探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后脑内 μ calpain的活化、其他相关因子表达变化的时程及相互关系 ,进一步研究HIBD的发病机制。方法　HIBD模型采用改良的Rice法。应用Westernblot法半定量测定缺氧缺血 (HI)后 0、1、2、4... 详细信息

目的　探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后脑内 μ calpain的活化、其他相关因子表达变化的时程及相互关系 ,进一步研究HIBD的发病机制。方法　HIBD模型采用改良的Rice法。应用Westernblot法半定量测定缺氧缺血 (HI)后 0、1、2、4、12和 2 4h大脑皮层和海马μ calpain、c Fos、c Jun、HSP70和HSP2 7的表达。蛋白浓度测定采用改良的Bradford法。结果　新生大鼠HI后 μ calpain裂解为 76和 80两个片段 ,两者比值在HI后显著提高 ,以海马更为明显 ,其中皮层在 2 4h、海马在 12h达到高峰。c Fos在HI后 2～ 12h海马显著高于皮层 (P <0 0 5 ) ,2 4h海马却低于皮层 (P <0 0 5 ) ;c Jun则 0～ 1h海马高于皮层 (P <0 0 5 ) ,4h以后皮层均高于海马 (P <0 0 5 ) (其中 12h差异无显著意义 )。c Fos和c Jun在HI后呈上升趋势 ,无论皮层或海马均在 2～ 4h达到高峰 ,以后渐下降 ,但 2 4h仍高于正常对照组。与对照组相比 ,c Fos在 1,2 ,4 ,12和 2 4h差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;c Jun在 0 ,1,2 ,4 ,12和 2 4h差异有显著意义 (P <0 0 5 )。HSP70在HI后 0h皮层显著高于海马 (P <0 0 5 ) ,1h海马显著高于皮层 (P <0 0 5 ) ,4h后皮层又均高于海马 (P <0 0 5 ) ;HSP2 7则HI后 1～ 2 4h海马均显著高于皮层 (P

关键词：新生大鼠缺氧缺血脑损伤 μ-calpain活化原癌基因蛋白质类热休克蛋白质

常染色体显性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病的周围神经改变

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中华神经科杂志 2007年第10期40卷 675-678页

作者：张巍吕鹤郑日亮王朝霞牛小媛张茁袁云北京大学第一医院神经内科 100034 山西医科大学第一医院神经内科北京市安贞医院神经内科

目的报道常染色体显性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病(CADASIL)患者的周围神经电生理和病理改变特点。方法 7例经病理和基因检查确诊的 CADASIL 患者,女性5例,男性2例。年龄在33～46岁之间,病程从4个月到3年不等。其中1例出现手... 详细信息

目的报道常染色体显性遗传性脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病(CADASIL)患者的周围神经电生理和病理改变特点。方法 7例经病理和基因检查确诊的 CADASIL 患者,女性5例,男性2例。年龄在33～46岁之间,病程从4个月到3年不等。其中1例出现手套袜套样痛觉减退及四肢腱反射减弱。除1例有长期饮酒史外,所有被检者均无其他导致周围神经损害的危险因素。其中3例进行了周围神经电生理检查。7例患者均进行了腓肠神经活体组织的光镜和电镜检查。结果电生理检查显示1例患者的感觉和运动神经以及另1例患者的运动神经传导速度减慢。腓肠神经病理检查显示7例患者均出现轻到中度的有髓神经纤维脱失,6例出现薄髓鞘有髓神经纤维,4例出现个别小有髓神经纤维变性改变,3例伴随小有髓神经纤维的再生簇结构。1例可见血管周围少量炎细胞浸润,5例患者神经滋养动脉的血管平滑肌细胞出现脱失,2例出现增生改变,5例毛细血管基底膜肥厚。结论 CADASIL 周围神经病多存在亚临床的神经纤维脱失,髓鞘损害比较突出。周围神经的病理改变可能主要与组织缺血有关,不同 Notch3基因突变者周围神经损害程度存在差异。

关键词：痴呆,多发性梗塞性周围神经系统疾病原癌基因蛋白质类受体,细胞表面

RET原癌基因C634R突变合并G691S、R982C多态性致多发内分泌腺瘤病2A型的家系研究并文献复习

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解放军医学杂志 2013年第4期38卷 308-312页

作者：陈平杨国庆谷伟军金楠巴建明母义明窦京涛北京解放军总医院内分泌科 100853

目的对一个多发内分泌腺瘤病2A型(MEN2A)家系患者的临床特点及RET原癌基因突变情况进行分析。方法收集先证者及其家系成员相关临床资料,提取1名先证者及10名家系成员的外周血基因组DNA,对RET基因所有外显子进行PCR扩增,对扩增产物进行... 详细信息

目的对一个多发内分泌腺瘤病2A型(MEN2A)家系患者的临床特点及RET原癌基因突变情况进行分析。方法收集先证者及其家系成员相关临床资料,提取1名先证者及10名家系成员的外周血基因组DNA,对RET基因所有外显子进行PCR扩增,对扩增产物进行测序分析。结果家系中3位已发病患者的临床表现不同,但其RET原癌基因均同时存在3个错义突变,分别是位于11号外显子的C634R、G691S和位于18号外显子的R982C,而家系中其他成员则不存在上述突变。结论当C634R与G691S、R982C多态性同时存在时,临床上主要表现为与单纯C634R突变一致的RET蛋白功能异常激活性疾病。

关键词：多发性内分泌瘤病癌髓样原癌基因蛋白质类突变

FMS样酪氨酸激酶3靶向RNA干扰对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响

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中华儿科杂志 2007年第8期45卷 615-619页

作者：卢洁盛光耀邹湘徐学聚赵晓明白松婷许培荣郑州大学第一附属医院儿科 450052 郑州大学细胞生物工程研究室

目的探讨短发夹状干扰 RNA(shRNA)诱导 FMS 样酪氨酸激酶3(FLT3)的靶向抑制对急性单核细胞白血病(AMOL)细胞株 THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成 FLT3靶向 shRNA(FLT3-shRNA),转染 THP-1细胞。以半定量逆转录 PCR(RT-PCR... 详细信息

目的探讨短发夹状干扰 RNA(shRNA)诱导 FMS 样酪氨酸激酶3(FLT3)的靶向抑制对急性单核细胞白血病(AMOL)细胞株 THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成 FLT3靶向 shRNA(FLT3-shRNA),转染 THP-1细胞。以半定量逆转录 PCR(RT-PCR)、流式细胞法(FCM)检测细胞 FLT3在 mRNA、蛋白水平表达,细胞计数试剂8(CCK-8)检测细胞增殖活力,FCM 法检测细胞周期,DNA 梯度条带(DNA Ladder)和 Annexin V-FITC 染色法分析细胞凋亡。结果合成的 FLT3-shRNA 15 nmol/L 转染48 h 对 FLT3 mRNA 和蛋白的抑制率分别达(72.95±2.07)%、(65.39±5.57)%。shRNA 干扰后细胞增殖活力受到抑制,48 h 抑制率达(36.66±3.67)%,72 h 达(35.56±0.73)%。转染48 h 细胞周期出现 G_0/G_1期到 S 期的阻滞,FLT3-shRNA 组 G_0/G_1期的细胞百分比(65.71±4.47)%明显高于对照组,S 期(25.11±2.70)%低于对照组。FLT3-shRNA 作用48 h 有明显的凋亡条带出现,Annexin V-FITC 检测细胞的早期凋亡率(18.59±2.07)%明显高于对照组。结论由 shRNA 诱导的 FLT3靶向干扰可有效的抑制 THP-1细胞增殖、诱导凋亡,显示其在儿童 AMOL 治疗中具有潜在的价值。

关键词：白血病,单核细胞,急性原癌基因蛋白质类受体蛋白酪氨酸激酶类 RNA干扰细胞分裂细胞凋亡

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的激活作用

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中华妇产科杂志 2004年第7期39卷 469-473页

作者：郭瑞霞魏丽惠王建六孙蓬明孙秀丽北京大学人民医院妇科 100044

目的　探讨 17β 雌二醇 (E2 )对子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶B(PI 3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI 3K抑制剂对其的影响。方法　应用免疫印迹杂交技术 ,检测一定浓度 (1× 10 -6mol/L) 17β E2 作用于... 详细信息

目的　探讨 17β 雌二醇 (E2 )对子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶B(PI 3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI 3K抑制剂对其的影响。方法　应用免疫印迹杂交技术 ,检测一定浓度 (1× 10 -6mol/L) 17β E2 作用于Ishikawa细胞不同时间 (分别为 0、5、15、30、6 0、12 0min)后和不同浓度 (分别为 0、1× 10 -10 、1× 10 -8、1× 10 -6、1× 10 -4mol/L) 17β E2 作用Ishikawa细胞一定时间 (30min)后PKB的活化情况 [以磷酸化PKB和总PKB比值 (p PKB/PKB)表示 ],以及用同法检测PI 3K抑制剂LY2 94 0 0 2对 17β E2 活化PKB的影响。结果　 1× 10 -6mol/L 17β E2 作用于Ishikawa细胞 15min时 ,PKB的活化水平 (0 5 33± 0 0 2 9)已明显高于对照 (0 36 1± 0 0 2 9,P 0 0 5、<0 0 5、<0 0 5、<0 0 0 1)。随着LY2 94 0 0 2作用浓度 (分别为 0 1、10、5 0、10 0 μmol/L)的增加 ,17β E2

关键词：子宫内膜肿瘤雌二醇 1-磷脂酰肌醇3激酶原癌基因蛋白质类信号传导蛋白激酶B

p53 and MDM2： their Yin-Yang intimacy

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Journal of Molecular Cell Biology 2017年第1期9卷 1-2页

作者： Hua Lu Department of Biochemistry & Molecular Biology and Tulane Cancer Center Tulane University School of Medicine New Orleans LA 70112 USA

The phiLosophy of Yin （阴） and Yang （阳） formed in ancient China describes a subtle, complementary, and sometimes intimate relationship between two opposites. This thousands of years old phil- osophy is, however, perfectly suited to describe the relationship between p53 and MDM2, whose genes evolved hundreds of millions of years ago. p53 and MDM2 are found in both （some） invertebrate and （all） vertebrate organisms, and mutually live with and almost always depend on each other in most multi-cellular organisms, including humans.

关键词：癌基因核蛋白质类基因基因 p53 前体细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤胰岛素阴阳原癌基因蛋白质类人类

凋亡抑制基因survivin在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与bcl-2、bax蛋白表达的关系

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中华妇产科杂志 2003年第4期38卷 203-206,i001页

作者：张淑兰赵长清林蓓李妍高红中国医科大学附属第二医院妇产科沈阳110004 卫生部小儿先天畸形重点实验室

目的　探讨凋亡抑制基因survivin在卵巢上皮性癌中的表达 ,及其与bcl 2、bax蛋白表达的相关性。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 35例卵巢上皮性癌组织中survivin基因的表达 ;应用免疫组织化学链霉亲和素生物素过... 详细信息

目的　探讨凋亡抑制基因survivin在卵巢上皮性癌中的表达 ,及其与bcl 2、bax蛋白表达的相关性。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 35例卵巢上皮性癌组织中survivin基因的表达 ;应用免疫组织化学链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物 (SABC)方法 ,检测bcl 2及bax蛋白的表达 ,并与卵巢上皮性交界性肿瘤、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织各 10例进行对照。结果　卵巢上皮性癌、交界性肿瘤组织中 ,survivin基因的表达率分别为 83%及 80 % ,显著高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的表达率 2 0 %及 0 % (P均基因表达与卵巢上皮性癌的临床分期、病理学类型、组织学分级及淋巴结转移无相关性 (P均 >0 .0 5 )。survivin基因表达与bcl 2蛋白表达呈正相关 (P 蛋白表达呈负相关 (P 基因可通过抑制癌细胞凋亡 ,对卵巢上皮性癌的发生和发展起作用 ;survivin基因可能与凋亡相关基因bcl 2、bax ,在卵巢上皮性癌的发展中分别起协同和拮抗作用。

关键词：抑制基因细胞凋亡卵巢肿瘤原癌基因蛋白c-bcl-2 原癌基因蛋白质类