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人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 437-440页

作者：刘彤李洋李丹妮耿楠希李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经... 详细信息

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入*** BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果:EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4个片段。Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。

关键词： P21活化激酶截短区域原核表达质粒 GST融合蛋白

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FUS1基因原核表达质粒构建与诱导表达

南方医科大学学报 2007年第5期27卷 638-640页

作者：张宝霍霞彭琳齐宗利徐锡金李燕丘波郑良楷汕头大学中心实验室汕头大学医学院附属肿瘤医院检验科广东汕头515041

目的构建FUS1基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta(DE3)2plys]中高效表达重组蛋白。方法采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出FUS1基因,并将其接入pET-32a(+),经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2plys细菌,并用IPTG诱导表... 详细信息

目的构建FUS1基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta(DE3)2plys]中高效表达重组蛋白。方法采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出FUS1基因,并将其接入pET-32a(+),经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2plys细菌,并用IPTG诱导表达。结果经过PCR、测序鉴定,克隆了pET32a(+)-FUS1重组子;在低浓度IPTG(25μmol/L)诱导3h,RosettaDE3可以高效地表达重组蛋白,约占细菌总蛋白的40%。结论成功地克隆到FUS1基因,并使其在原核系统中高效表达。

关键词： FUSI基因基因表达原核表达质粒

罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶的克隆及原核表达质粒构建

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华中农业大学学报 2013年第4期32卷 92-99页

作者：李庆勇可小丽卢迈新朱华平高风英中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室广州501380 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

为进一步了解无乳链球菌表面蛋白C5a肽酶scpB基因免疫表位及毒力作用基团的相关信息,通过提取罗非鱼无乳链球菌基因组DNA,利用特异性引物PCR扩增出scpB基因的全长开放阅读框(ORF)。结果表明,该基因包括3 405 bp的ORF,可编码1 134个氨基... 详细信息

为进一步了解无乳链球菌表面蛋白C5a肽酶scpB基因免疫表位及毒力作用基团的相关信息,通过提取罗非鱼无乳链球菌基因组DNA,利用特异性引物PCR扩增出scpB基因的全长开放阅读框(ORF)。结果表明,该基因包括3 405 bp的ORF,可编码1 134个氨基酸,与已报道的人源无乳链球菌ScpB的氨基酸同源性达99.74%。利用生物信息学软件DNAstar、Clustal X 2.0和MEGA 5.05及在线分析工具ExPASy ProtParam、NCBIProten blast及Conserved Domain等对推导的氨基酸序列进行分析,结果显示罗非鱼无乳链球菌scpB基因编码的氨基酸序列含有3个催化三联体(catalytic triad)位点、7个假定活性位点(putative active site)、2个特异位点(spe-cific hits),以及4个超家族结构(2个肽酶超家族结构Peptidases-S8-S53 superfamily、1个类纤连蛋白超家族结构DUF1034 superfamily和1个鞭毛钩蛋白超家族结构FlgD-lg superfamily);并且该氨基酸序列有多个抗原表位,推测ScpB蛋白应具有较强的免疫原性,可作为候选的蛋白疫苗成分。将该片段插入原核表达载体pET32a(+),转入大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆,经PCR、酶切及测序鉴定表明成功构建原核表达载体pET32a(+)/scpB。

关键词：罗非鱼无乳链球菌 C5a肽酶克隆原核表达质粒

人苯丙氨酸羟化酶基因克隆及其原核表达质粒的构建

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第3期28卷 288-291页

作者：张志黄宗青沈琪刘洪涛邓英太李爱东周国强汪华侨何蕴韶广东医学院附属深圳第四人民医院神经内科广东深圳518033 中山大学中山医学院人体解剖学教研室脑研究室中山大学达安基因诊断中心广东广州510080

【目的】克隆健康人苯丙氨酸羟化酶基因全长cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pTrcHisB/PAH。【方法】采用RT-PCR方法从人肝组织中扩增PAH基因全长cDNA,T/A克隆到pMD18-T载体中,双酶切后将cDA亚克隆入pTrcHisB载体,构建pTrcHisB/PAH质... 详细信息

【目的】克隆健康人苯丙氨酸羟化酶基因全长cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pTrcHisB/PAH。【方法】采用RT-PCR方法从人肝组织中扩增PAH基因全长cDNA,T/A克隆到pMD18-T载体中,双酶切后将cDA亚克隆入pTrcHisB载体,构建pTrcHisB/PAH质粒,经限制性内切酶鉴定并测序。【结果】人PAH基因cDNA正确克隆入pTrcHisB表达载体,与Genebank中PAH基因序列一致。【结论】成功构建pTrcHisB/PAH表达质粒,为进一步进行研究PAH蛋白表达和重组蛋白活性鉴定奠定基础。

关键词：苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶克隆原核表达质粒

结核分枝杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与鉴定

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中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 18-19页

作者：李博蔡宏朱玉贤北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京100871 北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京100871 北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京100871

　　根据世界卫生组织的报告,结核病已经成为威胁人类健康的最大杀手,因此,对于结核病的预防和治疗再次成为人们关注的焦点.传统的卡介苗(BacillusCalmette-Guerin,BCG)效果不稳定,对成年人保护作用不佳,并且无法用于免疫缺陷患者.人们... 详细信息

　　根据世界卫生组织的报告,结核病已经成为威胁人类健康的最大杀手,因此,对于结核病的预防和治疗再次成为人们关注的焦点.传统的卡介苗(BacillusCalmette-Guerin,BCG)效果不稳定,对成年人保护作用不佳,并且无法用于免疫缺陷患者.人们致力于开发新型疫苗以代替传统的BCG疫苗,其中DNA疫苗性能稳定,能诱导全面的免疫应答,且制备过程简单,在结核病疫苗研制中占据重要地位.……

关键词：结核分枝杆菌原核表达质粒结核病疫苗研制世界卫生组织预防和治疗制备过程性能稳定人类健康免疫应答免疫缺陷保护作用卡介苗成年人杀手开发焦点患者地位报告

阴道毛滴虫黏附蛋白65-3基因原核表达质粒的构建及表达

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四川动物 2008年第2期27卷 273-276页

作者：朱晓燕王雅静杨树国毕世樑廖琳四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室成都610044 郧阳医学院寄生虫学教研室四川大学华西第二医院妇产科

质粒pMD-18T-ap65-3经XhoI和BamHI双酶切,1.0%凝胶电泳后纯化回收阴道毛滴虫黏附蛋白65-3基因,定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒pET32a-ap65-3。重组质粒转化大肠埃希菌JM109感受态细胞中,筛选阳性克隆,进行PCR、酶... 详细信息

质粒pMD-18T-ap65-3经XhoI和BamHI双酶切,1.0%凝胶电泳后纯化回收阴道毛滴虫黏附蛋白65-3基因,定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒pET32a-ap65-3。重组质粒转化大肠埃希菌JM109感受态细胞中,筛选阳性克隆,进行PCR、酶切及测序鉴定正确后,将重组质粒pET32a-ap65-3转化于大肠埃希菌BL21中,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达后利用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)对重组蛋白进行分析鉴定。本实验为研究阴道毛滴虫病的致病机制及蛋白生物学功能奠定了基础。

关键词：阴道毛滴虫黏附蛋白65-3 原核表达质粒基因表达

犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建

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新疆农业大学学报 2010年第3期33卷 214-218页

作者：陶玉成马素贞陈胜男刘腾飞申卫红简子健新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已... 详细信息

通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。

关键词：犬传染性肝炎 Hexon基因克隆原核表达质粒

广州地区复发尖锐湿疣患者HPVL1基因原核表达质粒的构建及鉴定

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广东医学 2005年第5期26卷 626-627页

作者：胡云峰邓列华李姝赵刚郭秀枝范洪涛暨南大学附属第一医院皮肤科广州510630 广东省广州市育鑫科技有限公司 510730

目的构建广州地区复发尖锐湿疣患者人类乳头瘤病毒晚期基因L1的原核表达质粒,为进一步表达L1蛋白奠定基础。方法应用定向克隆策略,将尖锐湿疣患者病变组织中人类乳头瘤病毒L1晚期基因克隆到原核表达载体PQE40。结果通过酶切及测序鉴定... 详细信息

目的构建广州地区复发尖锐湿疣患者人类乳头瘤病毒晚期基因L1的原核表达质粒,为进一步表达L1蛋白奠定基础。方法应用定向克隆策略,将尖锐湿疣患者病变组织中人类乳头瘤病毒L1晚期基因克隆到原核表达载体PQE40。结果通过酶切及测序鉴定出重组子HPV6bL1-PQE40。结论HPV6bL1的原核表达质粒构建成功。

关键词：原核表达质粒尖锐湿疣广州地区 L1基因患者鉴定复发人类乳头瘤病毒 HPV 晚期基因L1 原核表达载体 L1蛋白定向克隆方法应用基因克隆病变组织质粒构建重组子

猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株gE基因原核表达质粒的构建

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贵州农业科学 2011年第11期39卷 149-152页

作者：曾智勇周莉汤德元刘志杰梁海英李谦肖超能王彬王凤甘振磊贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省动物疫病研究室贵州贵阳550025 贵州大学教学实验场贵州贵阳550025

为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRV GZ-Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表达载体... 详细信息

为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRV GZ-Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经鉴定后测序。结果表明:目的片段为PRV gE基因完整开放阅读框,大小1 734bp,编码577个氨基酸,在pET32a(+)载体中位置正确,表明,pET32a-gE原核表达质粒构建成功。该基因与国内外其他18株PRV的gE基因推导氨基酸序列同源性为94.8%～98.6%;与国外分离株属同一个进化分支,遗传关系相对较近;而与国内Fa、Min、GDSH等毒株亲缘关系较远。

关键词：伪狂犬病病毒 gE基因克隆原核表达质粒