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原头蚴体外形成棘球蚴的优化培养体系研究

第三军医大学学报 2019年第5期41卷 415-423页

作者：吴宏烨李锴王芬刘许诺范俊杰叶彬重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的建立适合细粒棘球绦虫原头蚴在体外形成棘球蚴的培养体系。方法以RPMI1640或DMEM培养基为基质,胎牛血清或绵羊血清为营养成分,人肝细胞株L02为饲养细胞设计配伍2大类、6个组培养体系;培养细粒棘球绦虫原头蚴45 d,根据各组原头蚴的... 详细信息

目的建立适合细粒棘球绦虫原头蚴在体外形成棘球蚴的培养体系。方法以RPMI1640或DMEM培养基为基质,胎牛血清或绵羊血清为营养成分,人肝细胞株L02为饲养细胞设计配伍2大类、6个组培养体系;培养细粒棘球绦虫原头蚴45 d,根据各组原头蚴的头节外翻率、成囊率和囊泡大小情况,寻找适合原头蚴形成棘球蚴的体外培养体系最佳配伍;在最佳配伍的培养体系继续培养棘球蚴囊泡至180 d。结果在起初的45 d期间,DMEM体系的E组(DMEM+胎牛血清+人肝细胞株L02)培养的棘球蚴生长最快,20 d起原头蚴成囊率高于其他各组(P蚴囊泡大于其他各组(P原头蚴成囊率达到100%;在其后的46～180 d内,棘球蚴囊泡持续增大,至80 d时肉眼可见透明囊泡,至180 d时最大囊泡直径达2.2 mm。结论添加胎牛血清及人肝细胞株L02的DMEM培养基有利于体外培养的原头蚴发育为棘球蚴囊泡。

关键词：细粒棘球绦虫原头蚴成囊棘球蚴培养体系

原头蚴对体外培养小鼠脾细胞中Th细胞亚群的影响

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中国免疫学杂志 2016年第2期32卷 174-177,183页

作者：方海瑞蒋红群徐芳洁侯隽董丹陈聪哲吴向未陈雪玲石河子大学医学院免疫学教研室石河子832002 石河子大学第一附属医院肝胆外科石河子832002

目的:观察原头蚴对体外培养小鼠脾细胞中Th细胞亚群及相关细胞因子表达的影响。方法:BALB/c小鼠脾细胞与原头蚴共培养,用ELISA检测上清液IL-4、IFN-γ、TGF-β含量;同时收集细胞用FCM检测Th细胞亚群。结果:ELISA检测不同感染时间原头蚴... 详细信息

目的:观察原头蚴对体外培养小鼠脾细胞中Th细胞亚群及相关细胞因子表达的影响。方法:BALB/c小鼠脾细胞与原头蚴共培养,用ELISA检测上清液IL-4、IFN-γ、TGF-β含量;同时收集细胞用FCM检测Th细胞亚群。结果:ELISA检测不同感染时间原头蚴组IL-4、TGF-β分泌均增加,与对照组相比差异有统计学意义(P原头蚴组不同时间点Th2、Treg细胞的比例,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:原头蚴能刺激体外培养的小鼠脾细胞向Th2、Treg细胞分化且上调相应细胞因子的分泌,提示这些亚群细胞可能在包虫病感染的免疫逃逸中发挥一定作用。

关键词：原头蚴脾细胞 Th细胞

阿苯达唑亚砜及其对映体体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第6期26卷 459-461,465页

作者：包根书张虹景涛乔华王静兰州大学基础医学院病原生物学研究所兰州730000 兰州大学第一医院药剂科兰州730000

目的观察阿苯达唑亚砜消旋体(ASOX)、左旋体(L-ASOX)和右旋体(D-ASOX)体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用。方法将细粒棘球绦虫原头蚴随机分为8组(每组约6000个),分别置含6mlDMEM培养液(含15%胎牛血清,青霉素和链霉素各500U/ml)的培养瓶中,A... 详细信息

目的观察阿苯达唑亚砜消旋体(ASOX)、左旋体(L-ASOX)和右旋体(D-ASOX)体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用。方法将细粒棘球绦虫原头蚴随机分为8组(每组约6000个),分别置含6mlDMEM培养液(含15%胎牛血清,青霉素和链霉素各500U/ml)的培养瓶中,ASOX、L-ASOX和D-ASOX的各50μg/ml和100μg/ml组分别加入各药液150μl和300μl(配制液含0.1%二甲基亚砜和0.1%吐温-80的蒸馏水),DMSO组中加入等量配制液,并设空白对照组,每组设2个平行组。每隔1d观察1次,取样滴于玻片,用0.03%美蓝染色,显微镜下计数原头蚴约400个,计算死亡率。直至其中一组的原头蚴全部死亡为止。结果ASOX、L-ASOX和D-ASOX两个浓度(50μg/ml和100μg/ml)组不同作用时间原头蚴的死亡率分别与空白对照组和溶剂组相比,差异均有统计学意义(P0.05),而与L-ASOX组相比,差异有统计学意义(P原头蚴死亡率分别为(93.6±3.7)%、(56.2±3.9)%和(99.0±1.9)%,各药的100μg/ml组死亡率分别为100%、(74.5±3.7)%和100%,对照组为(19.1±1.3)%,溶剂组为(22.5±1.9)%。结论ASOX、L-ASOX和D-ASOX在体外均有抗细粒棘球绦虫原头蚴作用,D-ASOX抗原头蚴作用较L-ASOX强。

关键词：细粒棘球绦虫原头蚴阿苯达唑亚砜单一对映体体外实验

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原头蚴及囊液促进小鼠脾细胞产生IL-2

免疫学杂志 2016年第3期32卷 215-219页

作者：蒋红群方海瑞陈聪哲董丹陈雪玲石河子大学医学院免疫学教研室 832000

目的观察细粒棘球绦虫幼虫原头蚴及囊液对体外培养小鼠脾细胞产生IL-22的影响。方法取Balb/c小鼠脾细胞,分别加入不同浓度原头蚴或囊液共培养48 h,检测上清液IL-22表达量及细胞IL-22 m RNA的相对表达量。同浓度原头蚴或囊液分别在0、12... 详细信息

目的观察细粒棘球绦虫幼虫原头蚴及囊液对体外培养小鼠脾细胞产生IL-22的影响。方法取Balb/c小鼠脾细胞,分别加入不同浓度原头蚴或囊液共培养48 h,检测上清液IL-22表达量及细胞IL-22 m RNA的相对表达量。同浓度原头蚴或囊液分别在0、12、24、36和48 h收集细胞,流式细胞术检测CD4+IL-22+T细胞比例变化。RPMI 1640培养基与脾细胞共培养设为对照组。结果与对照组相比,ELISA和q RT-PCR检测显示在原头蚴为1 000/ml和囊液蛋白质量浓度为2.05 mg/ml时脾细胞产生IL-22增加;流式细胞术检测原头蚴组及囊液组CD4+IL-22+T细胞比例逐渐增加。结论原头蚴及囊液均可促进小鼠脾细胞产生IL-22增加,提示IL-22可能参与宿主防御细粒棘球蚴感染。

关键词：原头蚴囊液脾细胞 IL-22

原头蚴通过刺激巨噬细胞分泌KLF4促使其向M2分化

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免疫学杂志 2016年第12期32卷 1029-1033页

作者：董丹陈聪哲方海瑞蒋红群侯隽郭峰陈雪玲石河子大学医学院免疫学教研室 832000

目的探讨原头蚴可能通过刺激巨噬细胞分泌KLF4而促使其向M2分化。方法原头蚴与RAW264.7细胞共培养,分别在12、36、48、84 h收集细胞和培养上清液,q RT-PCR检测KLF4、M1(Arg-1,Fizz-1,MR)、M2(TNF-α、IL-6、MCP-1)巨噬细胞因子的表达;EL... 详细信息

目的探讨原头蚴可能通过刺激巨噬细胞分泌KLF4而促使其向M2分化。方法原头蚴与RAW264.7细胞共培养,分别在12、36、48、84 h收集细胞和培养上清液,q RT-PCR检测KLF4、M1(Arg-1,Fizz-1,MR)、M2(TNF-α、IL-6、MCP-1)巨噬细胞因子的表达;ELISA检测相关因子分泌的含量。结果实验组(84 h)的KLF4 m RNA水平较对照组明显升高。随着感染时间延长,M2巨噬细胞的m RNA表达量及分泌含量呈上升趋势,M1巨噬细胞的m RNA表达量及分泌含量呈先升后降趋势。结论原头蚴刺激RAW264.7细胞,可能通过分泌某些抗原、蛋白,诱导巨噬细胞KLF4高表达而促使其向M2分化,抑制巨噬细胞的功能,从而逃逸宿主的免疫杀伤。

关键词：原头蚴 KLF4 巨噬细胞

原头蚴体外刺激巨噬细胞高表达PPARα/γ并调节其极化

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中国免疫学杂志 2017年第1期33卷 16-19,24页

作者：陈聪哲董丹方海瑞蒋红群侯隽杨琨郭峰陈雪玲石河子大学医学院免疫学教研室石河子832000

目的:探讨原头蚴与RAW264.7共培养后PPARα/γ的表达水平以及对巨噬细胞极化的作用。方法:原头蚴与RAW264.7共培养12、24、36、48、72 h取细胞。用qRT-PCR的方法检测RAW264.7细胞PPARα/γ的表达水平,用qRTPCR的方法检测巨噬细胞M1型相... 详细信息

目的:探讨原头蚴与RAW264.7共培养后PPARα/γ的表达水平以及对巨噬细胞极化的作用。方法:原头蚴与RAW264.7共培养12、24、36、48、72 h取细胞。用qRT-PCR的方法检测RAW264.7细胞PPARα/γ的表达水平,用qRTPCR的方法检测巨噬细胞M1型相关因子TNF-α、MCP-1、IL-1β和M2型相关因子Arg-1、TGF-β、Fizz-1的水平,ELISA的方法检测Arg-1和MR的表达量。结果:RAW264.7细胞PPARα/γ的表达水平和M2型相关因子Arg-1、TGF-β、Fizz-1和MR均逐渐升高,72 h表达最高(P原头蚴与RAW264.7共培养后PPARα/γ的表达逐渐升高,可能促进巨噬细胞由M1型向M2型极化,从而在虫体免疫逃逸中发挥一定作用。

关键词：原头蚴巨噬细胞 PPARα/γ 极化

细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫circRNA差异表达分析

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畜牧兽医学报 2023年第8期54卷 3474-3489页

作者：王正荣马勋张艳艳孙艳孟季蒙薄新文省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832000 石河子大学动物科技学院石河子832000

旨在解析circRNA在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫的表达谱特性,为进一步阐明circRNA分子在细粒棘球绦虫生长发育中的作用提供理论依据。采集细粒棘球绦虫的原头蚴、包囊壁和成虫,提取总RNA,构建circRNA、miRNA以及mRNA文库,采用全... 详细信息

旨在解析circRNA在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫的表达谱特性,为进一步阐明circRNA分子在细粒棘球绦虫生长发育中的作用提供理论依据。采集细粒棘球绦虫的原头蚴、包囊壁和成虫,提取总RNA,构建circRNA、miRNA以及mRNA文库,采用全转录组测序方法进行测序分析。通过生物信息学分析和功能预测筛选出差异表达的circRNA,并进行GO、KEGG以及ceRNA调控网络分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对其进行验证。结果在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫共鉴定得到636个circRNA分子,其中差异表达的circRNA分子有140个,在原头蚴、包囊壁和成虫特异性表达的circRNA分子分别为44、2和0个。GO分析结果显示,成虫和原头蚴以及包囊壁相比,差异表达的circRNA分子主要富集于生物学过程的有性生殖、精子发生、雄性配子产生、轴系发生以及神经生成、分化等。KEGG分析结果显示,原头蚴和成虫相比,差异表达的circRNA的显著富集于Notch、三羧酸循环、磷脂酰肌醇、核黄素代谢通路以及脂肪酸合成和降解等信号通路。原头蚴和包囊壁相比,差异表达的circRNA显著富集于背腹轴形成、Notch、wnt以及FoxO信号通路等。成虫和包囊壁相比,差异表达的circRNA的显著富集于Notch、碳代谢、三羧酸循环以及糖酵解/糖异生通路。靶向预测circRNA-miRNA-mRNA调控网络结果显示,有24个差异表达circRNAs与14个miRNAs和54个mRNAs形成164个up-down-up的circRNA-miRNA-mRNA调控网路,有13个差异表达的circRNAs与7个miRNAs以及16个mRNAs构成36个down-up-down的circRNA-miRNA-mRNA调控网络。对部分circRNA分子的qRT-PCR验证结果表明,其mRNA转录水平与测序结果一致。综上所述,本研究首次系统解析了circRNA分子在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫的差异表达谱特性,筛选了在原头蚴、包囊壁和成虫各阶段高表达及特异表达的circRNA分子,预测了差异表达circRNA潜在的circRNA-miRNA-mRNA调控网络,为进一步研究circRNA分子在细粒棘球绦虫生长发育中的作用于调控机制奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 circRNA 原头蚴成虫包囊壁表达谱

细粒棘球绦虫囊化原头蚴AQP基因转录动态及异源表达实验研究

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第三军医大学学报 2020年第21期42卷 2081-2092页

作者：谭青青吴宏烨高剑李锴范俊杰李想廖鹏曹纹侨叶彬重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 新疆医科大学寄生虫学教研室乌鲁木齐830011 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探索细粒棘球蚴水通道蛋白(Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs)在棘球蚴液形成过程中的作用。方法收集体外培养不同时期的棘球蚴标本和BALB/c小鼠体内接种的继发棘球蚴标本,RT-qPCR方法检测12个EgAQPs基因在体内、体外培... 详细信息

目的探索细粒棘球蚴水通道蛋白(Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs)在棘球蚴液形成过程中的作用。方法收集体外培养不同时期的棘球蚴标本和BALB/c小鼠体内接种的继发棘球蚴标本,RT-qPCR方法检测12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时期的转录表达。以细粒棘球蚴cDNA为模板,扩增EgAQP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-1、EgAQP4-4和EgAQP9-16个基因编码区片段,同时,通过化学合成方法扩增另外6个EgAQPs(EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP4-2、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-2)基因编码区片段,并在非洲爪蟾卵母细胞中检测这12个EgAQPs基因的透水功能,Western blot检测EgAQPs在卵母细胞膜上的表达。结果体外培养的原头蚴及感染小鼠的继发棘球蚴体积均随培养时间的延长而逐渐增大,棘球蚴囊内透明液体增多。RT-qPCR结果显示12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时间的转录表达水平均较低。注射EgAQPs基因的非洲爪蟾卵母细胞的体积变化率和透水系数与阴性对照组差异无统计学意义,这12个EgAQPs基因在卵母细胞中未表现出水通道功能。Western blot检测12个EgAQPs基因在卵母细胞总蛋白、胞质蛋白与胞膜蛋白上的表达,结果均未观察到蛋白在预期的水通道蛋白理论分子量处表达。结论12个EgAQPs基因在原头蚴囊化形成棘球蚴过程中转录表达水平均较低,这些基因在爪蟾卵母细胞的异源表达均未表现出通透水的功能。

关键词：细粒棘球绦虫水通道蛋白原头蚴棘球蚴转录谱异源表达

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细粒棘球绦虫原头蚴lncRNA表达谱分析

畜牧兽医学报 2019年第9期50卷 1666-1675页

作者：王正荣张艳艳马勋刘乙徐梦飞孟季蒙薄新文新疆农垦科学院畜牧兽医研究所省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 石河子大学动物科技学院石河子832000

本研究旨在解析lncRNA在细粒棘球绦虫原头蚴中的表达谱特性,为进一步揭示lncRNA在细粒棘球绦虫原头蚴发育中的作用及调控机制提供理论依据。从患病绵羊肝无菌采集细粒棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,构建原头蚴lncRNA文库,利用RNA sequencin... 详细信息

本研究旨在解析lncRNA在细粒棘球绦虫原头蚴中的表达谱特性,为进一步揭示lncRNA在细粒棘球绦虫原头蚴发育中的作用及调控机制提供理论依据。从患病绵羊肝无菌采集细粒棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,构建原头蚴lncRNA文库,利用RNA sequencing技术进行测序分析。结果表明,首次从细粒棘球绦虫原头蚴中鉴定出609个新的lncRNA分子。其中intergenic lncRNA有431个,intronic lncRNA有11个,anti-sense lncRNA有68个,sence lncRNA有99个。GO分析表明,其表达量前200的lncRNA分子主要与MAP激酶的负调控、SMC结合复合物、IMP的生物合成以及乙酰转移酶激活剂活性相关。KEGG分析结果表明,其表达量前200的lncRNA分子主要与细胞凋亡、萜类骨架生物合成、碳代谢以及背腹轴形成相关。cis分析结果表明,在这609个新的lncRNA分子中,与虫体Wnt信号通路、Hedgehog信号通路、NF-κB信号通路、cAMP信号通路、Notch信号通路、胆酸盐信号通路以及背腹轴信号通路相关的lncRNA分子分别有79、31、10、128、43、84和73个。qRT-PCR的验证结果表明,表达量前10的lncRNA分子与测序结果一致。RNA荧光探针原位杂交结果表明,高表达的lncRNA分子在细粒棘球绦虫原头蚴吸盘以及表皮均有表达。综上所述,本研究首次解析了细粒棘球绦虫原头蚴中lncRNA的表达谱特性,丰富了细粒棘球绦虫lncRNA的数据,为进一步解析lncRNA在细粒棘球绦虫原头蚴发育中的作用奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 lncRNA 原头蚴表达谱