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滋水清肝饮加减方防治尾静脉液压法注射AKT/N-Ras质粒诱发的原发性肝癌的作用与机制研究

滋水清肝饮加减方防治尾静脉液压法注射AKT/N-Ras质粒诱发的原发...

引用

作者：王雅欢华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分原发性肝癌模型的构建目的:尾静脉液压法注射AKT/N-Ras质粒构建原发性肝癌模型。方法:本实验采用尾静脉液压法构建原发性肝癌动物模型,将AKT/N-Ras质粒通过尾静脉快速打入实验动物体内,实验动物选择FVB小鼠、C57BL/6J小鼠和C57B... 详细信息

第一部分原发性肝癌模型的构建目的:尾静脉液压法注射AKT/N-Ras质粒构建原发性肝癌模型。方法:本实验采用尾静脉液压法构建原发性肝癌动物模型,将AKT/N-Ras质粒通过尾静脉快速打入实验动物体内,实验动物选择FVB小鼠、C57BL/6J小鼠和C57BL/6J Ang-1(-/-)小鼠,每种动物各24只,雌雄各半,将动物随机分为正常组和模型组,模型组小鼠尾静脉液压法注射AKT/N-Ras质粒诱导原发性肝癌,造模后,观察小鼠一般情况,观察小鼠肝脏颜色、大小、质地和病变程度等,称量肝脏重量,计算肝器官系数,取病变肝脏组织进行固定、石蜡包埋、切片及HE染色,显微镜观察肝脏组织学情况。免疫组织化学法检测肝脏组织AKT、P-AKT、ANG和CD133的表达情况。结果:1)FVB小鼠模型中:模型组小鼠第三周开始出现腹部隆起,肝脏较正常组明显增大,造模后最长生存时间为五周。正常组肝脏色红,表面光滑,质地软,模型组小鼠第一周时肝脏呈粉红色,表面可见白色病变,第三周时,外观较正常组已发生明显变化,肝脏表面布满大小不等的灰白色颗粒,整体呈红褐色,第四周时,肝脏整体呈黄白色,脂肪性病变明显,质地硬。模型组肝脏系数较正常组大,具有显著性差异(p模型组小鼠肝脏在造模第三周时已产生混合型肝癌,癌变类型以肝细胞癌为主,出现肝脏细胞核变大,深染,核异型等病理变化。FVB小鼠肝脏组织未见CD133表达;与正常组相比,模型组AKT、P-AKT和ANG阳性率均升高,具有显著性差异(p模型组第三周与第一周相比升高,具有显著性差异(p小鼠模型中:模型组小鼠第四周开始出现腹部隆起,造模后小鼠最长生存时间为六周。模型组小鼠肝脏第四周时色黄,质地较软,表面光滑,第六周时,肝脏呈粉红色,质地软,表面较粗糙,呈糜烂状。肝器系数较正常组大,具有显著性差异(p肝癌,第四周时以胆管细胞癌为主,第六周以肝细胞癌为主。与正常组相比,模型组肝脏细胞AKT、P-AKT、ANG和CD133阳性率升高,具有显著性差异(p模型组第六周AKT、P-AKT、ANG和CD133阳性率与第四周相比升高,具有显著性差异(p小鼠模型中:模型组第五周开始出现腹部隆起,增大,造模后小鼠最长生存时间为七周。模型组小鼠五周时,肝脏表面颜色不均一,质地软,第七周时,肝脏呈糜烂状,质地软。肝器官系数正常组相比具有显著性差异(p肝癌,第五周时以胆管细胞癌为主,第七周时以肝细胞癌为主。与正常组相比,模型组AKT、P-AKT、ANG和CD133阳性率升高,具有显著性差异(p模型组第七周AKT、P-AKT、ANG和CD133阳性率与第五周相比升高,具有显著性差异(p小鼠均成功诱导原发性肝癌模型,三种模型均为混合型肝癌。在FVB小鼠混合型肝癌中,肝细胞癌占绝大部分,小鼠生存期较短,大多数在四周左右;C57Bl6/J和C57Bl6/J Ang-1(-/-)小鼠肝癌模型中,第四周时,肝癌类型以胆管细胞癌为主,五周后,以肝细胞癌为主,小鼠生存期稍长,但不超过七周。此外,C57Bl6/J和C57Bl6/J Ang-1(-/-)肝癌模型小鼠在组内癌变情况差异较大,程度不一致,FVB小鼠组内癌变程度较一致,更适于进行药物评价。随着造模时间的延长,癌变程度的加重,肝脏组织中AKT、P-AKT和ANG的表达明显增强,故AKT、P-AKT和ANG的表达可作为衡量癌变程度的指标,根据CD133在FVB小鼠肝癌组织中不表达,但C57Bl6/J和C57Bl6/J Ang-1(-/-)小鼠肝癌组织有表达,提示癌干细胞可能参与C57Bl6/J小鼠肝脏癌变发生和进展机制,导致肿瘤表型变化。第二部分滋水清肝饮加减方防治尾静脉液压法注射AKT/N-Ras质粒诱发的FVB小鼠原发性肝癌的作用与机制研究目的:本部分旨在通过尾静脉液压法注射AKT/N-Ras质粒诱发的FVB小鼠原发性肝癌模型,探讨滋水清肝饮加减方防治原发性肝癌的作用与机制。方法:选取健康FVB小鼠36只,将动物随机分为正常组、模型组、滋水清肝饮***-1.d-1、***-1.d-1、***-1.d-1、***-1.d-1剂量组,每组6只,雌雄各半,除正常组外,所有小鼠采用尾静脉液压法注射AKT/N-Ras质粒诱导原发性肝癌模型,每天观察小鼠一般情况,质粒注射一周后,正常组和模型组给予生理盐水,滋水清肝饮四个剂量组

关键词：尾静脉液压法 AKT/N-Ras 原发性肝癌小鼠模型滋水清肝饮加减方原发性肝癌

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