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栽培羊肚菌培养菌丝生长的形态特征

青海草业 2024年第1期33卷 15-22页

作者：田瀚吉高晓杰余建平余梅陈群陈辉杜军华云南师范大学云南昆明650500 青海师范大学青海西宁810016 安徽农业大学安徽合肥230036 合肥学院安徽合肥230601 农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海农业科学院食用菌研究所上海奉贤201403

选取从西宁及周边地区栽培种植户采集的来源不同的10个羊肚菌栽培菌株(其中5个六妹羊肚菌Morchella sextelata、3个梯棱羊肚菌M.importuna和2个七妹羊肚菌M.eximia)进行18℃避光马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato Dextrose Agar Medium)培... 详细信息

选取从西宁及周边地区栽培种植户采集的来源不同的10个羊肚菌栽培菌株(其中5个六妹羊肚菌Morchella sextelata、3个梯棱羊肚菌M.importuna和2个七妹羊肚菌M.eximia)进行18℃避光马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato Dextrose Agar Medium)培养,并于长3 d、8 d、14 d分别进行拍照观察和统计分析。通过3D合成图像观察,将菌核(sclerotium)生长划分为五个阶段,分别为:(1)少量菌丝聚集缠绕;(2)大量菌丝聚集成菌丝团;(3)菌核边缘明显;(4)菌核密结生长;(5)菌核发育成熟。观察到菌丝融合,主要表现为:菌丝间相互接触并融合成网状、棒状;观察到厚垣孢子(Chlamydospore):前期为无色或棕黄色,后期变为红棕色覆于菌核上;孢子囊果形态:黄色肉质光滑球状体。实验表明,不同菌种在菌丝生长、菌丝融合、菌核发育以及厚垣孢子发育、生长时间上有差异,实验观察到的:3D成像图片和测量的数据,为羊肚菌全态性(Holomorph)认识提供资料积累。

关键词：羊肚菌菌核菌丝融合厚垣孢子 3D合成影像超微结构

稻田土壤中稻曲病菌厚垣孢子的持续监测及稻曲病菌的药剂筛选

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稻田土壤中稻曲病菌厚垣孢子的持续监测及稻曲病菌的药剂筛选

作者：吕秋实浙江大学

学位级别：硕士

近年来,稻曲病已由次要病害上升为水稻三大主要真菌病害之一。明确稻曲病的主要初侵染源,筛选有效的稻曲病杀菌药剂对稻曲病的防治具有重要意义。为获得准确且灵敏的稻曲病菌检测技术,本研究对稻曲病菌巢式PCR反应条件进行优化。稻曲病... 详细信息

近年来,稻曲病已由次要病害上升为水稻三大主要真菌病害之一。明确稻曲病的主要初侵染源,筛选有效的稻曲病杀菌药剂对稻曲病的防治具有重要意义。为获得准确且灵敏的稻曲病菌检测技术,本研究对稻曲病菌巢式PCR反应条件进行优化。稻曲病菌巢式PCR优化后第一轮反应最佳退火温度为58℃,引物添加量为1.0μL,退火时间30 s,反应循环数为35个循环;第二轮反应最佳退火温度为56℃,引物添加量为1.6μL,退火时间30 s,反应循环数为30个循环。以稻曲病菌DNA为模板,利用V.virens的两对特异性引物US1-5/US3-3和US2-5/US4-3在该条件下进行巢式PCR反应,能特异性地扩增出一条大小为232 bp的明亮条带。优化条件后的巢式PCR最低可检测到质量浓度为1 fg/μL的稻曲病菌DNA,其灵敏性至少为普通PCR的1000倍。利用优化后的巢式PCR检测技术结合显微镜观察,对2021年10月至2022年11月一年内不同时期样地稻田土壤中的厚垣孢子进行检测,并检测稻曲球厚垣孢子和土壤中厚垣孢子在模拟越冬条件下的萌发能力,以明确稻曲病菌厚垣孢子在自然条件和人工条件下的越冬情况,从而确定实验样地稻曲病的主要初侵染源。巢式PCR检测结果显示,在一年采样周期内样地稻田土壤中始终能检测到稻曲病菌。除2022年1月和5月采集的田埂土壤样品中未能通过显微镜观察到厚垣孢子外,其余采样所得的部分土样中均能观察到厚垣孢子。室温23℃干燥条件下保存的稻曲球厚垣孢子存活期约为7个月,而在4℃且干燥的环境条件下保存的稻曲球厚垣孢子13个月后仍有一定的萌发能力。在4℃模拟越冬条件下,保存6个月后土样中的厚垣孢子仍有萌发能力。本试验样地2021年稻曲病发病情况严重,一年后田块内水稻依然发病,且2021年10月至2022年10月期间采样时均未在田间和样品中发现菌核,从2022年11月9日采集的稻曲球样品上检查到菌核,但菌核携带率极低,仅为3.14%。因此,判断本试验样地中稻曲病菌能以厚垣孢子的形式在土壤中越冬,并成为次年稻曲病的主要初侵染源。选择目前市场主推的六种杀菌药剂,利用菌丝直径法进行稻曲病菌的药剂筛选。结果表明,六种杀菌药剂的抑菌效果良好,其中75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂和40%戊唑·咪鲜胺水乳剂的抑菌效果最强,其EC值分别为0.24 mg/L和0.12μL/L,可为稻曲病化学防治提供用药参考。

关键词：稻曲病菌厚垣孢子巢式PCR 越冬药剂筛选

稻曲病菌休眠与非休眠厚垣孢子的MSAP分析

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植物保护 2019年第1期45卷 129-134页

作者：李小娟李杰周瑚任佐华刘二明湖南农业大学植物保护学院长沙410128 湖南省植物保护研究所长沙410125 植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室长沙410128 南方粮油作物协同创新中心长沙410128

本研究以稻曲病菌Ustilaginoidea virens黄色(非休眠)厚垣孢子、黑色(休眠)厚垣孢子、厚垣孢子萌发后产生的分生孢子(非休眠)3种孢子为材料,采用DNA甲基化敏感扩增多态性技术对供试材料基因组DNA进行甲基化分析,探究稻曲病菌休眠与非休... 详细信息

本研究以稻曲病菌Ustilaginoidea virens黄色(非休眠)厚垣孢子、黑色(休眠)厚垣孢子、厚垣孢子萌发后产生的分生孢子(非休眠)3种孢子为材料,采用DNA甲基化敏感扩增多态性技术对供试材料基因组DNA进行甲基化分析,探究稻曲病菌休眠与非休眠厚垣孢子DNA甲基化的水平和模式。结果显示,3种形态孢子的基因组DNA甲基化水平差异明显,分生孢子基因组DNA中CCGG序列的总甲基化率为20.56%,黑色休眠厚垣孢子为25.63%,黄色非休眠厚垣孢子为33.52%。黄色和黑色的厚垣孢子主要是全甲基化模式,其全甲基化率高于半甲基化率,其中黄色厚垣孢子全甲基化率高达17.68%;分生孢子则是以半甲基化模式为主。结果对揭示稻曲病菌厚垣孢子休眠的分子机制,探究真核生物孢子的分子休眠机制有普遍意义。

关键词：稻曲病菌厚垣孢子分生孢子 DNA甲基化甲基化敏感扩增多态性

氧化胁迫对粉红螺旋聚孢霉生长和产厚垣孢子的影响

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生物技术通报 2018年第4期34卷 168-173页

作者：王琦冯静红孙占斌姜维治李世东孙漫红马桂珍淮海工学院连云港222005 中国农业科学院植物保护研究所北京100193

通过改变液体发酵通气量和添加不同种类活性氧(O2-,H_2O_2,OH·),研究氧化胁迫对粉红螺旋聚孢霉67-1菌丝生长和产厚垣孢子的影响。结果表明,氧化胁迫对真菌菌丝和孢子的影响不同。低氧胁迫下,67-1菌丝生长状态发生改变,培养液装量越多,... 详细信息

通过改变液体发酵通气量和添加不同种类活性氧(O2-,H_2O_2,OH·),研究氧化胁迫对粉红螺旋聚孢霉67-1菌丝生长和产厚垣孢子的影响。结果表明,氧化胁迫对真菌菌丝和孢子的影响不同。低氧胁迫下,67-1菌丝生长状态发生改变,培养液装量越多,菌丝分枝越少,并且厚垣孢子产量越低。发酵过程中添加一定量的活性氧可以调控粉红螺旋聚孢霉厚垣孢子的形成。接种前添加5-6 mmol/L H_2O_2,菌株产厚垣孢子水平显著提高,浓度达到9 mmol/L时,67-1生长和产孢完全受到抑制。培养16 h后添加,67-1对H_2O_2的耐受力增强。培养基中添加甲萘醌能够抑制厚垣孢子的形成,培养16 h后添加350μmol/L甲萘醌则可以提高67-1厚垣孢子的产量。在Fe2+-H_2O_2体系中,不同添加时间高氧胁迫均能够显著促进厚垣孢子的生成(P<0.05)。

关键词：粉红螺旋聚孢霉氧化胁迫活性氧厚垣孢子真菌生长

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稻曲病菌厚垣孢子壁多糖的提取方法优选

微生物学通报 2011年第9期38卷 1412-1417页

作者：王娜任佐华邓林伟毛莹陈娟芳刘二明湖南农业大学生物安全科学技术学院湖南长沙410128 湖南农业大学生物科学技术学院湖南长沙410128 湖南农业大学东方科技学院湖南长沙410128

探究稻曲病菌Ustiloginoidea virens(Cooke)Takahashi厚垣孢子壁多糖的最佳提取方法,为孢壁多糖含量和组成的研究提供基础。采用5种方法提取该病菌黑色厚垣孢子壁多糖,用苯酚-硫酸法测定多糖含量。经研究比较,最佳提取方法为复合酶-热... 详细信息

探究稻曲病菌Ustiloginoidea virens(Cooke)Takahashi厚垣孢子壁多糖的最佳提取方法,为孢壁多糖含量和组成的研究提供基础。采用5种方法提取该病菌黑色厚垣孢子壁多糖,用苯酚-硫酸法测定多糖含量。经研究比较,最佳提取方法为复合酶-热水浸提-sevag法,最佳提取条件是复合酶量4%,pH 4,浸提温度70°C,浸提时间120 min,物料比1:75(V/V);在优选的方法和条件下,测定稻曲病菌黑色厚垣孢子壁粗多糖相对得率21.2%,多糖含量72.3%;黄色厚垣孢子壁粗多糖相对得率17.5%,多糖含量66.7%,前者明显高于后者。研究表明复合酶-热水浸提-sevag法的工艺简单、可行,适宜稻曲病菌厚垣孢子壁多糖的测定。

关键词：水稻稻曲病菌厚垣孢子多糖

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木霉厚垣孢子可湿性粉剂的研制

植物保护 2016年第5期42卷 103-109,117页

作者：张晶晶黄亚丽马宏贾振华刘昆昂史延茂河北省科学院生物研究所河北省主要农作物病害微生物控制工程技术研究中心石家庄050081 河北工业大学化工学院天津300130

通过测定不同载体、润湿剂、分散剂、紫外保护剂对木霉厚垣孢子萌发率和菌丝生长以及不同含量助剂对可湿性粉剂性能的影响,确定了木霉厚垣孢子可湿性粉剂的组成成分和比例,其中厚垣孢子粉为25%(厚垣孢子粉由硅藻土吸附木霉发酵液制备而... 详细信息

通过测定不同载体、润湿剂、分散剂、紫外保护剂对木霉厚垣孢子萌发率和菌丝生长以及不同含量助剂对可湿性粉剂性能的影响,确定了木霉厚垣孢子可湿性粉剂的组成成分和比例,其中厚垣孢子粉为25%(厚垣孢子粉由硅藻土吸附木霉发酵液制备而成),润湿剂十二烷基硫酸钠为4%,分散剂CMC为5%,紫外保护剂糊精为1%,以硅藻土补齐100%。该厚垣孢子可湿性粉剂的活孢子数为2.5×109 cfu/g,润湿时间为58s,总悬浮率为78%,孢子悬浮率为85.27%,pH为6.92,含水量为2.16%,98%通过200目标准筛,该制剂的各项指标均符合可湿性粉剂及微生物制剂的相关标准。该研究的进行为农业生产提供一种新型的木霉制剂,对稳定木霉制剂的田间防效具有重要的意义。

关键词：木霉厚垣孢子可湿性粉剂生物相容性

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有害疣孢霉厚垣孢子萌发特性研究

福建农业学报 2020年第1期35卷 67-73页

作者：杜宜新石妞妞阮宏椿甘林时春喜陈福如福建省农业科学院植物保护研究所福建福州 350013 西北农林科技大学农业农村部西北黄土高原作物有害生物综合治理重点实验室陕西杨凌 712000

【目的】研究影响有害疣孢霉厚垣孢子萌发的因素,为进一步开展有害疣孢霉生物学特性研究以及筛选可有效抑制其萌发的杀菌剂提供依据。【方法】在-80℃、-20℃、0℃、4℃、10℃、15℃、20℃和25℃处理有害疣孢霉厚垣孢子,然后25℃培养,... 详细信息

【目的】研究影响有害疣孢霉厚垣孢子萌发的因素,为进一步开展有害疣孢霉生物学特性研究以及筛选可有效抑制其萌发的杀菌剂提供依据。【方法】在-80℃、-20℃、0℃、4℃、10℃、15℃、20℃和25℃处理有害疣孢霉厚垣孢子,然后25℃培养,测定温度对破除有害疣孢霉厚垣孢子休眠的影响;测定不同培养基、pH值、碳源和氮源对有害疣孢霉厚垣孢子萌发的影响。【结果】0℃、4℃处理12 h、24 h和48 h可破除有害疣孢霉厚垣孢子休眠,促进萌发;适合有害疣孢霉厚垣孢子萌发的pH值为6、7和8,其萌发率分别为8.66%、9.79%和8.40%;有害疣孢霉厚垣孢子在水琼脂培养基(WA)、双孢蘑菇浸出液培养基(MuEA)、双孢蘑菇煎汁培养基(MuDA)、马铃薯葡萄糖培养基(PDA)和V8培养基上的萌发率分别为0.00%、6.38%、8.43%、1.33%和6.23%,在MuDA培养基上萌发率最好,显著优于其他供试培养基;葡萄糖、蔗糖和山梨糖有利于有害疣孢霉厚垣孢子萌发,其萌发率分别为10.77%、9.96%和9.85%;在MuDA培养基中加入脯氨酸、丝氨酸、丙氨酸和鸟氨酸后有害疣孢霉厚垣孢子的萌发率分别为12.32%、13.45%、13.74%和11.64%,显著优于不加氮源的萌发率。【结论】0℃、4℃处理12 h以上可破除有害疣孢霉厚垣孢子的休眠;适合有害疣孢霉厚垣孢子萌发的pH值为6、7和8;MuDA培养基是适宜有害疣孢霉厚垣孢子萌发的培养基;葡萄糖、蔗糖、D-乳糖、山梨糖和D-棉子糖是适宜有害疣孢霉厚垣孢子萌发的碳源;脯氨酸、丝氨酸、丙氨酸和鸟氨酸是适宜有害疣孢霉厚垣孢子萌发的氮源。

关键词：有害疣孢霉厚垣孢子萌发双孢蘑菇

哈茨木霉Tr-9厚垣孢子形成过程中的转录组分析

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分子植物育种 2020年第20期18卷 6692-6701页

作者：宋东阳闫畅张英杰张婧敏袁敏华北理工大学生命科学学院唐山063210

为了探索哈茨木霉厚垣孢子形成机制,分别在产厚垣孢子与不产厚垣孢子两种不同的培养条件下培养哈茨木霉Tr-9菌株,利用转录组测序寻找可能与厚垣孢子形成有关的差异表达基因。结果共得到15 956个Unigenes,其中11 015个Unigene能注释到Uni... 详细信息

为了探索哈茨木霉厚垣孢子形成机制,分别在产厚垣孢子与不产厚垣孢子两种不同的培养条件下培养哈茨木霉Tr-9菌株,利用转录组测序寻找可能与厚垣孢子形成有关的差异表达基因。结果共得到15 956个Unigenes,其中11 015个Unigene能注释到Unigenes蛋白数据库中。通过比较两个样本,得到1 639个差异表达基因,其中826个基因表达上调,813个基因表达下调。共有845个差异基因被注释到GO (Gene ontology)数据库中,富集最为显著前三个GO条目分别为DNA结合、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录及转录调控,和细胞核。KEGG (Kyoto encyclopedia of genes and genomes)富集分析发现,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢途径与缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解代谢途径为具有显著性富集的两条代谢途径。本研究为哈茨木霉厚垣孢子的研究开发提供一定的基础理论参考。

关键词：哈茨木霉(Trichoderma harzianum) 厚垣孢子转录组测序差异表达基因

木霉Tr-92厚垣孢子可湿性粉剂的储存性能及应用效果

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植物保护学报 2017年第3期44卷 495-500页

作者：张晶晶徐文黄亚丽黄媛媛贾振华河北省科学院生物研究所石家庄050081 河北工业大学化工学院天津300130

为评价木霉Trichoderma spp.厚垣孢子可湿性粉剂的储存性能及应用效果,采用稀释涂平板法测定了保存过程中木霉Tr-92分生孢子和厚垣孢子可湿性粉剂的存活率以及在黄瓜叶片上的定殖能力,并采用盆栽试验法比较了2种木霉制剂对黄瓜灰霉病的... 详细信息

为评价木霉Trichoderma spp.厚垣孢子可湿性粉剂的储存性能及应用效果,采用稀释涂平板法测定了保存过程中木霉Tr-92分生孢子和厚垣孢子可湿性粉剂的存活率以及在黄瓜叶片上的定殖能力,并采用盆栽试验法比较了2种木霉制剂对黄瓜灰霉病的防效。结果表明,木霉厚垣孢子制剂贮存180 d时孢子存活率达到72.8%,显著高于分生孢子制剂的42.2%;喷施后7 d,木霉厚垣孢子制剂和分生孢子制剂在黄瓜叶片上的定殖数量分别为1 580个/cm^2和1 490个/cm^2,二者间存在显著差异,且厚垣孢子制剂定殖时间大于分生孢子制剂;1 000倍稀释的木霉厚垣孢子制剂对黄瓜灰霉病的防效达99.20%,与嘧菌酯的防效无显著差异,在喷施后7 d和12 d的防效均显著高于分生孢子制剂。研究表明,木霉厚垣孢子制剂的储存性能和对黄瓜灰霉病的防效均显著优于木霉分生孢子制剂。

关键词：木霉厚垣孢子分生孢子可湿性粉剂应用