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中国妇幼保健 2014年第28期29卷 4624-4628页

作者：陈原沈薇罗爱月王世宣浙江大学医学院附属妇产科医院浙江杭州310006 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科湖北武汉430030

目的：探索小鼠窦前卵泡与卵泡膜间质细胞体外共培养的最佳模型。方法：分别从14~16日龄和21~25日龄C57BL/6小鼠中分离得到窦前卵泡和卵泡膜间质细胞,采用海藻酸钠凝胶法、Transwell间接、直接接触法体外共培养6天,比较各组卵泡形态、... 详细信息

目的：探索小鼠窦前卵泡与卵泡膜间质细胞体外共培养的最佳模型。方法：分别从14~16日龄和21~25日龄C57BL/6小鼠中分离得到窦前卵泡和卵泡膜间质细胞,采用海藻酸钠凝胶法、Transwell间接、直接接触法体外共培养6天,比较各组卵泡形态、生长发育、激素分泌、存活率、卵母细胞成熟阶段。结果：海藻酸钠凝胶中培养的卵泡能够维持其三维结构,观察更清晰,而Transwell中培养的卵泡更有利于颗粒细胞的增殖,第5天时卵泡直径超过三维培养,雌二醇分泌水平与卵泡的生长模式相一致。第5天时海藻酸钠凝胶法（77.3%）和Transwell直接接触法（76.5%）的卵泡存活率要明显高于Transwell间接接触法（57.4%）,P〈0.05。3种方法的卵母细胞减数分裂恢复能力间无明显差异。结论：短期（5天内）的体外共培养可以选择Transwell直接接触法,而更长时间的共培养则推荐海藻酸钠凝胶法。

关键词：卵泡卵泡膜间质细胞共培养海藻酸盐 Transwell

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氧化应激通过P38sapk途径上调P16基因表达引起卵泡膜间质细胞的衰老

氧化应激通过P38sapk途径上调P16基因表达引起卵泡膜间质细胞的衰...

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作者：田勇华中科技大学

学位级别：硕士

目的：建立一种简单易行的分离未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞的方法，并对分离细胞进行培养和功能鉴定。方法：选取未成年C57BL/6小鼠（21-25d）的卵巢组织，在体式显微镜下分离干净周围组织并去包膜，用机械法去除颗粒细胞，将残余组织... 详细信息

目的：建立一种简单易行的分离未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞的方法，并对分离细胞进行培养和功能鉴定。方法：选取未成年C57BL/6小鼠（21-25d）的卵巢组织，在体式显微镜下分离干净周围组织并去包膜，用机械法去除颗粒细胞，将残余组织在LSP培养基清洗两次后用胶原酶Ⅳ-DNase（4g/L胶原酶，10g／LDNase和10g/L BSA溶于M199培养液）在37℃,5%CO2培养箱中消化分离卵泡膜间质细胞，用含10%胎牛血清及10ng/ml雄激素的McCoy’s5a培养基进行培养，并用免疫细胞化学技术、蛋白印迹技术、激素检测对培养的卵泡膜间质细胞进行鉴定。通过卵泡膜-间质细胞在不同浓度的FSH和LH条件下激素水平的改变，检测该细胞激素分泌反应性。结果：通过上述分离方法得到的细胞存活率在90%以上，细胞在培养24小时内贴壁生长，细胞贴壁生长成梭形和不规则三角形，且能在含10%胎牛血清及10ng/ml雄激素McCoy’s5a培养基中分裂增殖。免疫细胞化学结果显示贴壁生长细胞AMH蛋白阳性表达95%;贴壁细胞培养24小时之后雄激素浓度为649.22±12.3ng/dl(n=3),雌激素浓度0.05)。FSH组睾酮水平和基础培养基组未见明显统计学差异(p>0.05)，在这三组中均未检测到雌激素水平的改变。结论：通过本实验的分离和培养方法可以得到大量贴壁生长的卵泡膜间质细胞，其中很少有颗粒细胞的混杂，此方法可以快速、高效的进行小鼠卵泡膜间质细胞的分离培养。

关键词：卵泡膜间质细胞颗粒细胞分离培养激素生成

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脐带间充质干细胞通过NR4A1调节原发性功能不全卵巢中卵泡膜间质细胞凋亡的作用研究

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滨州医学院学报 2020年第1期43卷 1-7页

作者：白兰兰骆倩倩刘冉冉张洪芹滨州医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室山东烟台264003 烟台市中心血站滨州医学院基础医学院形态学实验室滨州医学院烟台附属医院生殖医学科

目的探讨脐带间充质干细胞(UCMSCs)对原发性卵巢功能不全(POI)大鼠的治疗作用及卵巢中卵泡膜间质细胞表达的NR4A1在此治疗过程中的机制。方法选用5周龄雌性wistar大鼠,随机分为对照组、POI组、POI+UCMSCs组,POI组腹腔注射顺铂(CP),对照... 详细信息

目的探讨脐带间充质干细胞(UCMSCs)对原发性卵巢功能不全(POI)大鼠的治疗作用及卵巢中卵泡膜间质细胞表达的NR4A1在此治疗过程中的机制。方法选用5周龄雌性wistar大鼠,随机分为对照组、POI组、POI+UCMSCs组,POI组腹腔注射顺铂(CP),对照组腹腔注射等量的0.9%生理盐水,注射7 d。POI+UCMSCs组待注射顺铂后,观察1周,尾静脉注射UCMSCs悬液。注射1周后,酶联免疫吸附法检测3组大鼠血清中E2、FSH水平,HE染色观察卵巢的形态学改变,TUNEL检测大鼠卵巢中颗粒细胞的凋亡情况。体外培养大鼠卵泡膜间质细胞(TICs),并进行鉴定及检测NR4A1的表达,随机分组给予顺铂及UCMSCs处理,western blot检测NR4A1的表达变化,Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,POI组大鼠卵巢中各级卵泡的数目明显减少(P卵泡的数目明显增加(P细胞数目明显增多。POI+UCMSCs组颗粒细胞凋亡的数目明显减少(P细胞凋亡的调节作用,改善POI卵巢的功能,这为临床上应用UCMSCs治疗POI提供一定的理论和实验依据。

关键词：脐带间充质干细胞卵巢功能不全卵泡膜间质细胞孤儿核受体

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未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞分离培养与鉴定

未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞分离培养与鉴定

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中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内分泌会场（妇科内分泌学组、绝经学组、计划生育学组）

作者：田勇石良艳赖志文沈薇杨书红罗爱月丁婷王世宣华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的建立一种简单有效的分离未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞的新方法 ,并对分离细胞进行培养和鉴定。方法选取未成年C57BL/6小鼠(21-25d)的卵巢组织,在体式显微镜下分离干净周围组织并去包膜,用机械法去除颗粒细胞,将残余组织在LSP培养... 详细信息

目的建立一种简单有效的分离未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞的新方法 ,并对分离细胞进行培养和鉴定。方法选取未成年C57BL/6小鼠(21-25d)的卵巢组织,在体式显微镜下分离干净周围组织并去包膜,用机械法去除颗粒细胞,将残余组织在LSP培养基清洗两次后用胶原酶Ⅳ-DNase(4g/L胶原酶,10g/L DNase和10g/L BSA溶于M199培养液)在37℃,5%CO2培养箱中消化分离卵泡膜间质细

关键词：卵巢组织卵泡膜间质细胞分离培养鉴定指标

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