检索结果-南通市图书馆

作者：钟智明广东海洋大学

学位级别：硕士

光照强度是水产养殖过程中重要的外部环境因子,直接或间接对养殖物种的生长、免疫反应和代谢活动等产生影响。珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus(?)×Epinephelus lanceolatus(?))和卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)均是东南亚地... 详细信息

光照强度是水产养殖过程中重要的外部环境因子,直接或间接对养殖物种的生长、免疫反应和代谢活动等产生影响。珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus(?)×Epinephelus lanceolatus(?))和卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)均是东南亚地区及中国南方的重要养殖鱼种,抗逆性较强,具有大规模养殖和深远海养殖的潜力。在此之前,探究光强对两种鱼免疫和代谢的影响是十分必要的。本研究使用三种光照强度(10 lx、250 lx和1250 lx)对珍珠龙胆石斑鱼和卵形鲳鲹进行胁迫,从基因水平和代谢物水平两方面进行探究:一是构建转录组文库,挖掘其中显著变化的免疫基因并将其提交至KEGG数据库进行通路的富集,通过荧光定量PCR检测目的基因表达水平、比色法测定酪氨酸酶活性以及液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术对黑色素进行定量,以阐明黑色素合成等免疫通路在石斑鱼和卵形鲳鲹应对光照胁迫免疫反应中的重要作用。二是构建代谢组文库,挖掘差异显著的代谢产物,准确鉴定后进行聚类分析和KEGG代谢通路富集,以阐明光照胁迫对石斑鱼和卵形鲳鲹生理代谢的影响。以上研究可总体评估石斑鱼和卵形鲳鲹对不同光强胁迫的免疫反应和生理代谢变化,为深远海及大规模养殖中环境参数的设置提供参考。研究结果如下:1、光照强度对珍珠龙胆石斑鱼免疫反应和代谢的研究。高光强和低光强胁迫对珍珠龙胆石斑鱼生长率和存活率均无显著影响。转录组分析表明,与对照组(250 lx组)相比,1250 lx组中筛得1697个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),包含82个免疫相关基因,其中表达量上调的有9个基因,下降的有73个基因。差异表达的免疫基因主要富集在JAK-STAT信号通路、NF-κB信号通路、TNF信号通路、Toll样受体通路和抗原处理和递呈等通路。这说明高光胁迫可能通过上述信号通路抑制珍珠龙胆石斑鱼的免疫水平,从而避免在长期的高光胁迫下出现强烈应激反应。而10 lx组筛得103个DEGs,包含11个免疫相关基因,其中表达量上调的有9个基因,下降的有2个基因。这表明低光胁迫轻度激活了珍珠龙胆石斑鱼的免疫反应。值得注意的是,在高光组富集的免疫相关通路中,只有黑色素合成通路的大部分基因显著上调,因此我们对珍珠龙胆石斑鱼黑色素合成进行深入探究。结果发现高光胁迫显著提高了皮肤中Mitf,Tyr和Tyrp1的表达量、酪氨酸酶活性以及黑色素合成量,并使其体色明显变深,这说明高光胁迫是通过激活经典的黑色素合成通路(Creb2-Mitf-Tyr-Tyrp1通路)来影响珍珠龙胆石斑鱼黑色素合成,黑色素合成水平的提高可能是其抵御高光强产生的危害的重要手段。低光胁迫显著促进了石斑鱼Creb2和Tyr的表达,但对酪氨酸酶活性和黑色素合成量没有显著影响。代谢组分析表明1250 lx组中筛得59种差异代谢物(differential metabolites,DMs),主要富集在蛋白质合成和氨基酸代谢过程。精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、赖氨酸和苯丙氨酸含量显著上升,说明氨基酸代谢可能受到抑制,进而影响蛋白质合成。低光组筛得44个DMs,富集分析表明低光强对碳水化合物代谢和脂质代谢有一定的抑制作用,扰乱了部分氨基酸的合成与代谢,如精氨酸和苏氨酸。2、光照强度对卵形鲳鲹免疫反应和代谢的研究。对光照胁迫后卵形鲳鲹皮肤黑色素的研究表明,虽然高光强促进了Mc1r的表达,但同时抑制了Creb3和Tyr的表达;低光强则仅抑制了Creb3和Tyr的表达。另外,高光和低光胁迫对卵形鲳鲹黑色素含量和体色均无显著影响。这说明黑色素合成并没有参与卵形鲳鲹应对光照胁迫的免疫反应中。对光照胁迫后肝脏转录组的分析表明,与对照组相比,1250 lx组中筛得23个免疫相关DEGs,主要富集在补体和凝血级联、金黄色葡萄球菌感染、JAK-STAT通路、TNF信号通路、MAPK信号通路和Toll样受体信号通路等,其中20个DEGs显著下调,3个显著上调,且荧光定量PCR也证实转录组测序的准确性。非特异性免疫酶活分析发现,高光强显著抑制了卵形鲳鲹超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性。这说明高光胁迫显著抑制了卵形鲳鲹的免疫反应。另一方面,10 lx组筛得20个免疫相关DEGs,富集到MAPK信号通路、JAK-STAT信号通路和Toll样受体信号通路等,但免疫相关基因变化趋势不一致,有12个基因显著下调,8个基因显著上调。非特异性免疫酶活分析发现,低光强对其SOD和CAT活性无显著影响。以上结果说明高光胁迫通过经典免疫信号通路抑制了卵形鲳鲹的免疫反应,而低光胁迫对免疫反应没有显著影响。代谢组分析显示1250 lx组筛得55种DMs,主要富集在碳水化合物代谢过程,表现为促进葡萄糖生成和抑制丙酮酸代谢和牛磺酸合成。而10 lx组中得到102种DMs,富集分

关键词：珍珠龙胆石斑鱼卵形鲳鲹光照强度免疫反应代谢黑色素

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基于代谢组学分析光强胁迫对卵形鲳鲹代谢的影响

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农业生物技术学报 2022年第4期30卷 751-761页

作者：钟智明陈家宇张静汤保贵于非非赖文琪朱洁雄南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 广东海洋大学水产学院

光照强度是水产养殖的一个重要环境因子，可影响养殖品种的生理行为和新陈代谢。本研究以中等光强(约250 lx)为对照组，用低光强(10 lx)和高光强(1250 lx)对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)进行急性胁迫(36 h)，利用液相色谱-质谱联用(LC/... 详细信息

光照强度是水产养殖的一个重要环境因子，可影响养殖品种的生理行为和新陈代谢。本研究以中等光强(约250 lx)为对照组，用低光强(10 lx)和高光强(1250 lx)对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)进行急性胁迫(36 h)，利用液相色谱-质谱联用(LC/MS)的代谢组学技术，结合主成分分析(principal component analysis, PCA)和正交偏最小二乘判别法(orthogonal projections to latent structures discriminant analysis,OPLS-DA)等统计方法对卵形鲳鲹的肝脏差异代谢物进行筛选和鉴定，并利用MetaboAnalyst数据库进一步分析相关代谢通路。结果显示，与对照组相比，10 lx组有102种代谢产物的含量发生显著变化，富集在39条代谢通路中，主要包括β-丙氨酸代谢(β-alanine metabolism)、酪氨酸代谢(tyrosine metabolism)、L-谷氨酸代谢(L-glutamate metabolism)、不饱和脂肪酸的合成(biosynthesis of unsaturated fatty acids)等。1 250lx组有55种代谢产物的含量发生显著变化，富集在27条代谢通路中，主要包括葡萄糖代谢(glucose metabolism)、生物素代谢(biotin metabolism)、硫铵代谢(thiamine metabolism)、丙酮酸代谢(pyruvate metabolism)、牛磺酸及次牛磺酸代谢(metabolism of taurine and hypotaurine)等。通路分析表明低光胁迫抑制了卵形鲳鲹的氨基酸代谢和脂肪酸合成，鱼体通过降低运动量、增强免疫功能和抗氧化能力等方式适应低光环境；高光胁迫促进了卵形鲳鲹的葡萄糖生成，抑制了丙酮酸代谢和牛磺酸合成，在一定程度上影响了鱼体的营养代谢和免疫功能。本研究为卵形鲳鲹养殖参数的设定提供了参考数据。

关键词：卵形鲳鲹光照强度代谢组代谢产物

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卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B2、维生素B6和叶酸需求量的研究

卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B2、维生素B6和叶酸需求量的研究

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作者：黄倩倩上海海洋大学

学位级别：硕士

本研究通过3个独立的生长试验,分别探讨饲料中维生素B、维生素B和叶酸对卵形鲳鲹生长性能、血清生化,肝脏维生素积蓄量的影响,确定卵形鲳鲹幼鱼对饲料维生素B、维生素B和叶酸的需求量。1.卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B需求量的研究为研... 详细信息

本研究通过3个独立的生长试验,分别探讨饲料中维生素B、维生素B和叶酸对卵形鲳鲹生长性能、血清生化,肝脏维生素积蓄量的影响,确定卵形鲳鲹幼鱼对饲料维生素B、维生素B和叶酸的需求量。1.卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B需求量的研究为研究卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼对饲料中维生素B的最适需要量,配制维生素B水平为0 mg·kg、4.4 mg·kg、6.2 mg·kg、8.0 mg·kg、11.3mg·kg、15.5 mg·kg的6种实验饲料,每种饲料设3个平行,每个平行放25尾初始均质量为(11.63±0.17)g的卵形鲳鲹幼鱼,每日饱食投喂2次,周期8周。结果显示,4.4 mg·kg组幼鱼的增重率、特定生长率均显著高于0 mg·kg组(P0.05);6.2 mg·kg组肝脏D-氨基酸氧化酶(D-AAO)活性显著高于0 mg·kg组(P卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B的需要量分别为4.23mg·kg和6.24 mg·kg。2.卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B需求量的研究本试验旨在研究饲料中维生素B对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼生长性能、饲料利用率、生化指标、肝脏抗氧化能力、肠道酶活性和肠道菌群的影响。选取均质量为(15.31±0.19)g的卵形鲳鲹随机分配6组,每组3个平行,每个平行25尾鱼。配制6种维生素B含量分别为0、3.75、7.47、10.6、13.7和18.5 mg·kg的试验饲料饲喂卵形鲳鲹,每天饲喂2次,周期8周。结果表明,当维生素B水平达到7.47 mg·kg时显著影响试验鱼增重率(WGR)和特定生长率(SGR)、肝脏谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)、丙二醛(MDA)、肝脏维生素B积蓄量、肠道Na,K-ATP酶,γ-谷氨酰转移酶和肌酸激酶均有显著影响(P卵形鲳鲹ALT、AST、GPx和肝脏维生素B积蓄量有最高值,但MDA含量最低;随着饲料中维生素B水平的增加,MDA含量升高,ALT、AST、GPx和肝脏维生素B积蓄量降低;GR和POD分别在10.6 mg·kg和13.7 mg·kg时有最高值。7.47 mg·kg组,WGR和SGR显著高于0 mg·kg组,此时具有最大值。ALT、AST、GPx和肝脏维生素B继续量在3.75 mg·kg组均已显著高于对照组,在7.47 mg·kg组达到最大值,MDA的趋势与此相反。以WGR、肝脏维生素B积蓄量、AST、ALT为评定指标,通过二次回归分析得出卵形鲳鲹幼鱼对维生素B的需求量为8.84.28 mg·kg。无论饲喂何种梯度的饲料,卵形鲳鲹的肠道中均以无壁菌门、变形菌门和厚壁菌门为主。随着饲料中维生素B水平增加至7.47 mg·kg,无壁菌门和拟杆菌门的相对丰度不断降低,变形菌门和厚壁菌门的变化趋势与此相反。总的来说,补充7.47mg·kg会显著改变卵形鲳鲹幼鱼的生长性能、肠道消化酶活性和肠道微生物群,但当维生素B水平持续增加至18.5 mg·kg时,对各指标无显著性影响。另外,本研究首次成功地对卵形鲳鲹生长最佳组(7.47 mg·kg)的肠道细菌多样性进行了表征。3.卵形鲳鲹幼鱼对饲料中叶酸需求量的研究配制叶酸水平依次为0.31、0.94、1.76、2.83、4.20、5.69和6.32 mg·kg的7种试验饲料。每种饲料设3个重复,每个重复放25尾初始均重为(7.77±0.10)g的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼。每天分别在早上6:00和下午17:00饱食投喂,养殖周期为期8周。结果表明:饲料中叶酸水平从0.31 mg·kg增加至4.20 mg·kg时,卵形鲳鲹幼鱼的增重率、特定生长率、补体3、补体4、肝脏抗氧化酶活力以及肝脏叶酸积蓄量显著高于对照组(P卵形鲳鲹幼鱼的补体3和补体4含量最高,但对全鱼和肌肉的粗营养成分无显著影响(P>0.05)。饲料中适量的叶酸水平能显著降低卵形鲳鲹幼鱼饲料系数、血清总胆固醇和甘油三脂(P卵形鲳鲹对饲料中叶酸的需要量分别为4.53 mg·kg和4.94mg·kg。

关键词：卵形鲳鲹维生素B2 维生素B6 叶酸需求量

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卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B1、泛酸和烟酸需求量的研究

卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B1、泛酸和烟酸需求量的研究

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作者：荀鹏伟上海海洋大学

学位级别：硕士

1.卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B的需求量研究本研究旨在研究维生素B对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼生长性能、肠道消化吸收、肠道菌群及免疫应答的影响。配制了6种等氮等脂饲料,维生素B含量分别为0、4.88、8.15、12.00、17.40和20.... 详细信息

1.卵形鲳鲹幼鱼对饲料中维生素B的需求量研究本研究旨在研究维生素B对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼生长性能、肠道消化吸收、肠道菌群及免疫应答的影响。配制了6种等氮等脂饲料,维生素B含量分别为0、4.88、8.15、12.00、17.40和20.40mg/kg。饲喂卵形鲳鲹幼鱼(初始体重:11.20±0.15g)8周。结果表明,维生素B能显著提高卵形鲳鲹的增重率(P卵形鲳鲹肝脏的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽还原酶(GR)、转酮醇酶(TK)活性和肝脏中维生素B积累(P卵形鲳鲹对饲料中维生素B的最适需求量分别为12.94 mg/kg和12.61mg/kg。2.卵形鲳鲹幼鱼对饲料中泛酸的需求量研究挑选体质量为(8.80±0.10)g的卵形鲳鲹幼鱼,分别饲喂泛酸水平为0、16.4、20、26、33.4和37 mg/kg的半纯化饲料8周。结果表明,饲料中添加适量泛酸可以显著提高卵形鲳鲹幼鱼增重率(WGR)、特定生长率(SGR)和成活率(P卵形鲳鲹出现了增生性病变的棒状鳃。饲料中的泛酸也在一定程度上增加了肠道菌群的多样性和丰度,抑制了有害菌的生长。二次回归分析结果表明,以增重率为指标,卵形鲳鲹幼鱼对泛酸的最适需求量为21.03 mg/kg。3.卵形鲳鲹幼鱼对饲料中烟酸的需求量研究配制了6种不同烟酸水平的实验饲料,烟酸含量分别为14.9,22.4,28.6,37.9,42.0 and 77.5 mg/kg,饲喂卵形鲳鲹幼鱼(初始体重:7.79±0.07 g)8周。结果表明,饲料中烟酸水平能显著提高卵形鲳鲹的增重率(P卵形鲳鲹的脂肪代谢。饲料中烟酸水平对血清补体C3、C4含量和溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶活性均有显著影响(P卵形鲳鲹肝脏的过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(ALP)和总抗氧化能力(T-AOC)(P卵形鲳鲹肠道中的谷氨酰转移酶γ-GT活性(P卵形鲳鲹增重率的二次回归分析表明,卵形鲳鲹对饲料中烟酸的最适需求量为29.85mg/kg。

关键词：卵形鲳鲹维生素B1 泛酸烟酸需求量

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卵形鲳鲹肝表达抗菌肽-2和β-防御素抗病原感染免疫研究

卵形鲳鲹肝表达抗菌肽-2和β-防御素抗病原感染免疫研究

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作者：雷阳海南大学

学位级别：硕士

肝表达抗菌肽-2（Liver-expressed antimicrobial peptide 2,LEAP-2）和 β-防御素(（β-defensin）属于抗菌肽家族成员。在哺乳动物中的研究表明,肝表达抗菌肽-2和β-防御素都具有大量的阳离子,且在机体的先天免疫反应中起着重要作用... 详细信息

肝表达抗菌肽-2（Liver-expressed antimicrobial peptide 2,LEAP-2）和 β-防御素(（β-defensin）属于抗菌肽家族成员。在哺乳动物中的研究表明,肝表达抗菌肽-2和β-防御素都具有大量的阳离子,且在机体的先天免疫反应中起着重要作用。本文对卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）肝表达抗菌肽-2（TroLEAP-2）和β-防御素（TroBD）进行了基因克隆,并对其体内外功能进行了分析研究。结果如下:（1）TroLEAP-2 cDNA编码区长321 bp,编码106个氨基酸,相对分子质量为11.65 kDa。TroLEAP-2成熟肽中包含4个保守的半胱氨酸残基,与其他硬骨鱼的LEAP-2同源性在40.57%～83.02%,其中与鮸鱼同源性最高,为83.02%。系统进化树的结果表明,其与鮸鱼和大黄鱼关系紧密,为一个分支,并同属于鲈形目。组织特异性的结果表明,TroLEAP-2在免疫器官肝脏、脾脏和头肾中的表达量最为丰富。在迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）、无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）和神经坏死病毒（VNNV）感染后,TroLEAP-2在肝脏、脾脏、头肾中的表达量显著上调。体外实验表明,重组蛋白（rTroLEAP-2）能显著抑制迟缓爱德华氏菌、无乳链球菌的生长。体内实验结果表明,将TroLEAP-2过量或干扰表达后,可显著减少或增加细菌（E.tarda和S.agalactiae）或病毒（VNNV）的感染数量。此外,我们还发现TroLEAP-2能显著提高机体酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶的活性,并且能显著提高头肾巨噬细胞呼吸爆发活性,这些结果表明TroLEAP-2在机体先天免疫中起重要作用。（2）TroBD的cDNA全长为592 bp,其中编码区长为192 bp,由63个氨基酸组成,相对分子质量为7.217 kDa。TroBD成熟肽内包含6个保守半胱氨酸残基,与其他硬骨鱼的β-防御素具较高同源性（27.27～98.41%）,其中与鳜鱼的相似度最高,为98.41%。系统进化树的结果表明,其与条石鲷聚为一支,并且同属于鲈形目。组织特异性的结果表明,TroBD在免疫器官头肾和脾脏中的表达量最高。在哈氏弧菌（Vibrio harveyi）和神经坏死病毒感染后,TroBD在头肾和脾脏中的表达量显著上调。体外实验结果表明,重组蛋白（rTroBD）能显著抑制harveyi的生长,且进一步试验证明其抗菌活性受盐浓度的影响。体外实验还发现,TroBD对头肾巨噬细胞有趋化作用。体内实验结果表明,在TroBD过量或干扰表达后,可显著减少或增加V.Zharveyi或VNNV的感染数量。综上所述,这些结果表明TroLEAP-2和TroBD在卵形鲳鲹抗细菌和抗病毒免疫中扮演重要的角色,实验结果将为卵形鲳鲹抗病原免疫提供了新的研究思路。

关键词：卵形鲳鲹肝表达抗菌肽-2 β-防御素抗细菌免疫抗病毒免疫

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卵形鲳鲹吸收利用配合饲料中植物油的肠道微生物的筛选

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仲恺农业工程学院学报 2022年第2期35卷 1-7页

作者：游翠红陈宝佳王树启周萌赵丽娟黄燕华洪宇聪孙凯辉林蠡仲恺农业工程学院健康养殖创新研究院广东广州510225 仲恺农业工程学院动物科技学院广东广州510225 汕头大学广东省海洋生物技术重点实验室广东汕头515063 广东越群生物科技股份有限公司广东省水产苗种开口饲料企业重点实验室广东揭阳522000

为了探讨肠道微生物在水产动物脂类代谢中的作用,提高水产动物对配合饲料中植物油的利用能力,本研究收集摄食豆油或亚麻籽油配合饲料的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼的肠道内容物,通过在培养基中添加尼罗红染液及混合脂肪酸底物的方... 详细信息

为了探讨肠道微生物在水产动物脂类代谢中的作用,提高水产动物对配合饲料中植物油的利用能力,本研究收集摄食豆油或亚麻籽油配合饲料的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼的肠道内容物,通过在培养基中添加尼罗红染液及混合脂肪酸底物的方法,从中筛选出一株能吸收亚油酸、亚麻酸的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus TO1);通过观察三丁酸甘油酯(tributyrin)固体培养基中的水解圈及在液体培养基中添加油脂和溴甲酚紫(bromocresol purple)指示剂方法,筛选到一株能高产脂肪酶、降解豆油和亚麻籽油的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi TO1).这些结果表明,鱼类肠道微生物能够响应配合饲料中的脂肪源,当用植物油替代配合饲料中的鱼油时,肠道中吸收、降解、利用植物油的弧菌的丰度增加,进而参与鱼体内的脂类代谢.

关键词：卵形鲳鲹肠道微生物弧菌植物油脂类代谢

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饲料中添加丁酸梭菌对卵形鲳鲹幼鱼生长性能、血清生化指标及肠道菌群和短链脂肪酸含量的影响

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动物营养学报 2023年第9期35卷 5904-5918页

作者：吴杨黄倩倩虞为徐创文洪敏娜蒋魁麦晓勇陈海谊林黑着杨铿中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室广东省渔业生态环境重点实验室广州510300 信阳农林学院信阳464000 中国水产科学研究院南海水产研究所深圳实验基地深圳518121 广州市欣海利生生物科技有限公司广州510300

本试验旨在研究饲料中添加丁酸梭菌对卵形鲳鲹幼鱼生长性能、血清生化指标及肠道菌群和短链脂肪酸含量的影响。挑选活力、大小相似的卵形鲳鲹幼鱼450尾,初始体质量为(9.55±0.13)g,随机分为6组,每组3个重复,每个重复25尾。各组分别投喂... 详细信息

本试验旨在研究饲料中添加丁酸梭菌对卵形鲳鲹幼鱼生长性能、血清生化指标及肠道菌群和短链脂肪酸含量的影响。挑选活力、大小相似的卵形鲳鲹幼鱼450尾,初始体质量为(9.55±0.13)g,随机分为6组,每组3个重复,每个重复25尾。各组分别投喂丁酸梭菌添加量为0(C0组,对照组)、0.25%(C1组)、0.50%(C2组)、1.00%(C3组)、2.00%(C4组)和4.00%(C5组)的试验饲料。试验期60 d。结果表明:1)C4组的末均质量、增重率和特定生长率显著均显著高于C0和C5组(P卵形鲳鲹幼鱼的末均质量、增重率以及特定生长率,提高血清总蛋白和葡萄糖含量,改变门水平上和属水平上的肠道菌群组成,提高肠道短链脂肪酸含量。本试验条件下,饲料中丁酸梭菌适宜添加量为2.00%。

关键词：卵形鲳鲹丁酸梭菌生长性能肠道菌群短链脂肪酸

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卵形鲳鲹巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）参与机体抗菌免疫反应

卵形鲳鲹巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）参与机体抗菌免疫反应

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作者：胡秀聪海南大学

学位级别：硕士

巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是一类具有独特结构的多效性免疫调节细胞因子,具有类似于酶、趋化因子、激素的功能,可参与机体的细胞增殖、分化、细胞的存活与凋亡等多种生物学过程,是连接非特异性免疫和特异性免疫的关键信号分子。鉴于此... 详细信息

巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是一类具有独特结构的多效性免疫调节细胞因子,具有类似于酶、趋化因子、激素的功能,可参与机体的细胞增殖、分化、细胞的存活与凋亡等多种生物学过程,是连接非特异性免疫和特异性免疫的关键信号分子。鉴于此,本研究对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)巨噬细胞迁移抑制因子(TroMIF)进行了克隆鉴定,并对其生物学功能进行了初步研究。研究结果如下:(1)序列分析的结果表明,TroMIF的开放阅读框为345bp,编码115个氨基酸,其相对分子质量为12.3KDa。同源性比对的结果发现,TroMIF与其他硬骨鱼类MIF有很高的同源性为82.61%～95.65%,其中与欧洲舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)的同源性最高,为95.65%。序列分析表明TroMIF类似其他物种MIF一样,具有氧化还原活性位点(CALC)、催化活性位点(K)和异构酶活性位点(P)。系统进化分析的结果显示,TroMIF和大黄鱼(Larimichthys crocea)MIF亲缘关系最近。(2)组织特异性的结果表明:TroMIF在健康卵形鲳鲹的11个组织(血液、肝脏、脾脏、头肾、肠、鳃、心、脑、胃、皮肤、肌肉)中均有表达,在肝脏中的表达量最高、头肾中的表达量次之。在迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染后,TroMIF在脾脏、头肾中的表达量显著上调,头肾在感染后12h达到峰值,而脾脏在感染后24h达到峰值。本研究成功构建了TroMIF的过量表达载体p CNTroMIF,并合成了特异性的si RNA(si TroMIF),我们将其转染至卵形鲳鲹肾细胞系,然后用E.tarda侵染细胞,实验结果表明:TroMIF过量表达可以显著增强肾细胞抵制病菌侵染的能力,菌落计数结果与对照组相比显著减少;与此一致的是,当si TroMIF干扰肾细胞系中TroMIF的表达后,与对照组相比,si TroMIF组感染E.tarda的数量显著增多。以上实验表明,在卵形鲳鲹抗细菌感染免疫中发挥了重要的作用。(3)为了研究TroMIF的功能,我们构建了原核表达载体并诱导和纯化获得了有活性的重组蛋白r TroMIF。体外实验表明:r TroMIF可以显著抑制头肾淋巴细胞(HKL)和头肾单核细胞(HKM)的迁移;当r TroMIF与HKL进行孵育后,可诱导促进HKL的增殖,并且该诱导呈现剂量依赖性。此外,我们在酶活性检测的实验中发现r TroMIF具有显著的氧化还原酶活性,提示TroMIF可能可以通过其特有的酶活性在抗细菌感染免疫应答中发挥作用。综上所述,TroMIF能提高机体的抗菌免疫反应,通过对TroMIF抗菌免疫反应的研究,为卵形鲳鲹的绿色健康高效养殖提供了新的思路。

关键词：卵形鲳鲹 MIF 细胞迁移氧化还原酶活性抗菌免疫

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卵形鲳鲹中白细胞介素IL-17A的克隆、鉴定及免疫应答的研究

卵形鲳鲹中白细胞介素IL-17A的克隆、鉴定及免疫应答的研究

引用

作者：刘肖岑海南大学

学位级别：硕士

白细胞介素17亚家族（intereukin-17,IL-17）是一类重要的促炎细胞因子。本研究中,我们以卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）为研究对象,对白细胞介素IL-17A（TroIL-17A）进行了基因克隆,并对其序列特征、抗菌及蛋白功能进行了研究。结果如... 详细信息

白细胞介素17亚家族（intereukin-17,IL-17）是一类重要的促炎细胞因子。本研究中,我们以卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）为研究对象,对白细胞介素IL-17A（TroIL-17A）进行了基因克隆,并对其序列特征、抗菌及蛋白功能进行了研究。结果如下:（1）TroIL-17A开放阅读框包含426 bp,蛋白质编码包含142个氨基酸残基,其中含有23个氨基酸残基的信号肽。TroIL-17A与人、小鼠等哺乳动物及其它硬骨鱼的IL-17A所编码的氨基酸序列具有19.01%-76.43%的相似性,其中,TroIL-17A与硬骨鱼中鮸鱼（Miichthys miiuy）的IL-17A序列同源性最高,为76.43%,与硬骨鱼中草鱼的同源性最低,为33.33%;而与人类IL-17A序列仅有19.01%的同源性。系统发育树的结果表明TroIL-17A与同属于鲈形目的鮸鱼和欧洲舌齿鲈亲缘关系最近。（2）qRT-PCR的结果表明,TroIL-17A在健康卵形鲳鲹的肝、脾、头肾、皮肤、肌肉、胃、肠、鳃、脑、心脏和血11个器官中均有表达,其中在免疫器官肝、头肾、脾中表达量最高。在哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）、迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）、无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）的感染下,TroIL-17A在肝脏和头肾中的表达量均显著上调;因此,免疫基因TroIL-17A是机体免疫调控的重要免疫因子。（3）在卵形鲳鲹中过表达TroIL-17A可以显著抑制哈维氏弧菌对鱼体的感染;而干扰TroIL-17A表达后,哈维氏弧菌感染量显著性增多。说明过表达TroIL-17A能增强机体免疫力,显著提高卵形鲳鲹抗菌能力,而干扰TroIL-17A的表达后,卵形鲳鲹更易于受细菌等外界病原体感染。（4）亚细胞定位实验表明TroIL-17A在整个细胞中均有表达。利用pET-32a（+）/E.coli BL21（DE3）表达系统对TroIL-17A进行重组表达,经镍离子柱亲和层析纯化,可获得电泳纯的TroIL-17A蛋白,并制备抗体效价高的多克隆抗体。对蛋白功能进行研究,结果表明该蛋白能诱导外周血白细胞（PBL）的迁移和促进头肾淋巴细胞（HKL）的细胞增殖;同时,重组蛋白rTroIL-17A可以显著促进肾细胞中IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α基因的表达。因此TroIL-17A在趋化外周血白细胞、增殖淋巴细胞、调节免疫细胞因子等方面均发挥重要的作用。综上所述,本研究表明卵形鲳鲹白细胞介素IL-17A具有趋化外周血白细胞、增殖淋巴细胞、调节其他细胞因子的功能,可以显著增强卵形鲳鲹抵御细菌感染的能力。本研究为硬骨鱼类免疫因子相关研究奠定了基础,同时为卵形鲳鲹的疾病防控提供了新的思路。

关键词：卵形鲳鲹白细胞介素IL-17A 趋化淋巴增殖抗菌

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卵形鲳鲹TNFSF6的克隆、鉴定及免疫功能研究

卵形鲳鲹TNFSF6的克隆、鉴定及免疫功能研究

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作者：王鹭海南大学

学位级别：硕士

肿瘤坏死因子配体6（TNFSF6）是肿瘤坏死因子配体家族的一员,对于维持机体的免疫稳态至关重要,它能够通过与其受体TNFRSF6结合后致使靶细胞程序性死亡,然而目前对鱼类TNFSF6的研究相对匮乏。为了研究卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）TNF... 详细信息

肿瘤坏死因子配体6（TNFSF6）是肿瘤坏死因子配体家族的一员,对于维持机体的免疫稳态至关重要,它能够通过与其受体TNFRSF6结合后致使靶细胞程序性死亡,然而目前对鱼类TNFSF6的研究相对匮乏。为了研究卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）TNFSF6（Tro TNFSF6）的抗菌免疫相关功能,本研究克隆并鉴定了卵形鲳鲹Tro TNFSF6,并对其抗菌活性进行了初步研究。结果如下:（1）Tro TNFSF6的开放阅读框序列长度为687 bp,编码228个氨基酸,预测的蛋白大小为25.5 k Da。Tro TNFSF6包含一个跨膜区和一个TNF家族特有的结构域,并且含有两个能够形成二硫键的半胱氨酸残基,一个潜在的N-糖基化位点和一个酪氨酸磷酸化位点。序列同源性比对的结果显示,TNFSF6的保守性较低,Tro TNFSF6与其他硬骨鱼TNFSF6的同源性为25.64%～58.79%,其中与棘头梅童鱼（Collichthys lucidus）的TNFSF6的同源性最高,为58.79%,与大西洋鳕（Gadus morhua）TNFSF6的同源性最低,为25.64%。系统进化树显示,Tro TNFSF6与同为鲈形目的棘头梅童鱼、斑马拟丽鱼（Maylandia zebra）和尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）聚为一支,其亲缘关系最近,而与人（Homo sapiens）和鼠（Mus musculus）的亲缘关系最远。（2）组织特异性分析表明,Tro TNFSF6在检测的11个组织中均有表达,且在肝脏中的表达量最高,其次是肠道和鳃,而在肌肉中表达最低。此外,卵形鲳鲹在迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）刺激后,肝脏、脾脏、头肾中Tro TNFSF6的表达量均显著上调,且在感染24 h时,肝脏和头肾中的表达量到达峰值,分别上调了84倍与33.8倍,脾脏中Tro TNFSF6表达量的峰值在感染12 h时出现,表达量最高上调5.5倍。（3）于细胞膜表面表达的TNFSF6能够与其受体TNFRSF6相结合,触发系列生物学功能,细胞定位显示,Tro TNFSF6定位于卵形鲳鲹吻细胞（GPS）的细胞膜上。为分析Tro TNFSF6在鱼体内发挥的功能,本研究构建了Tro TNFSF6的过量表达质粒,并从个体水平进行了分析,结果发现,当Tro TNFSF6在鱼体内过量表达后,其血清中的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性显著性提高。为研究Tro TNFSF6的体外活性,本研究构建了Tro TNFSF6的原核重组表达质粒并获得其蛋白r Tro TNFSF6,研究结果表明r Tro TNFSF6能够显著诱导卵形鲳鲹淋巴细胞的增殖,并且呈现一定的剂量依赖性。为了检测r Tro TNFSF6在癌细胞增殖中的作用,我们向小鼠肝癌细胞Hepa1-6中加入r Tro TNFSF6进行孵育,并用流式细胞仪检测细胞的凋亡水平,结果发现加入r Tro TNFSF6的Hepa1-6细胞,其凋亡率相比对照组显著上升了14.05%;当对Hepa1-6细胞中TNFSF6蛋白进行干扰表达后,相比对照组其凋亡率显著降低了13.44%,结果表明Tro TNFSF6能够促进小鼠肝癌细胞的凋亡。综上所述,Tro TNFSF6在卵形鲳鲹抗细菌免疫过程中扮演重要的角色,并且能够促进Hepa1-6细胞发生凋亡,本实验的研究结果将为今后对TNFSF6的深入研究与对卵形鲳鲹免疫机理的挖掘提供便利。

关键词：卵形鲳鲹 TNFSF6 细胞凋亡非特异性免疫

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