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酸环境对大鼠髓核细胞自噬及功能的影响

中国脊柱脊髓杂志 2019年第7期29卷 641-649页

作者：江立波王会仁张其琛李熙雷复旦大学附属中山医院骨科

目的:观察酸环境下髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)中卵巢癌g蛋白偶联受体1(ovarian cancer g-protein-coupled receptor 1,OgR1)和自噬相关蛋白LC3的表达水平,探讨自噬激活机制,初步分析其对细胞功能的影响.方法:取SD大鼠正常... 详细信息

目的:观察酸环境下髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)中卵巢癌g蛋白偶联受体1(ovarian cancer g-protein-coupled receptor 1,OgR1)和自噬相关蛋白LC3的表达水平,探讨自噬激活机制,初步分析其对细胞功能的影响.方法:取SD大鼠正常髓核组织,分离培养NPCs,甲苯胺蓝、阿利新染色和Ⅱ型胶原免疫荧光检测鉴定NPCs.扩增培养NPCs,取第2代NPCs,在pH值为6.2、6.4、6.8、7.0、7.2和7.4的培养基中培养24h,免疫荧光观察NPCs中OgR1的表达情况,Western blotting检查细胞中OgR1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平;在pH值为6.4的培养基中培养0、3h、6h、12h、24h、48h后,采用Western blotting检测NPCs中LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达水平.构建3个不同靶点的OgR1干扰序列,检测最合适滴度慢病毒,用最适滴度慢病毒转染NPCs,使用Western blotting和Real-time PCR检测不同干扰序列的沉默效果,选取最适干扰系列构建OgR1-shRNA慢病毒载体.取第2代NPCs,分为4组:正常组(DMEM培养基)、pH值6.4培养基组(空白组)、pH值6.4培养基空载体组(空载体组)、pH值6.4培养基OgR 1-shRNA慢病毒转染组(转染组),培养24h后用Western blot-ting检测LC3-Ⅱ和p62蛋白表达水平;Alcian染色观察NPCs中蛋白多糖的表达情况.结果:(1)分离培养的细胞高表达蛋白多糖和Ⅱ型胶原,符合NPCs表型.(2)OgR1蛋白表达水平与培养基pH值相关,pH值gR1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著性升高(PgR1均有沉默作用,与对照组比较有显著性差异(PgR 1-shRNA1沉默效果最佳.(5)转染组细胞在pH值6.4的培养基中培养24h后,LC3-Ⅱ表达水平显著性低于空载体组(P蛋白多糖的表达低于空载体组(PgR1蛋白表达和自噬水平升高,OgR1介导了细胞自噬的激活,并影响NPCs的生物学功能.

关键词：髓核细胞酸环境卵巢癌g蛋白偶联受体1 自噬细胞功能大鼠

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质子感知受体在骨代谢中的研究进展

中国矫形外科杂志 2023年第22期31卷 2068-2071页

作者：李风波孙晓雷马信龙天津市天津医院骨科天津300211

卵巢癌g蛋白偶联受体1 (ovarian cancer g protein-coupled receptor 1, OgR1)亚家族广泛分布于人体组织中,该受体具有质子敏感特性,可以通过受体组氨酸残基感知细胞外pH值变化,对人体细胞功能进行调节。质子感知受体不仅与肿瘤的发生... 详细信息

卵巢癌g蛋白偶联受体1 (ovarian cancer g protein-coupled receptor 1, OgR1)亚家族广泛分布于人体组织中,该受体具有质子敏感特性,可以通过受体组氨酸残基感知细胞外pH值变化,对人体细胞功能进行调节。质子感知受体不仅与肿瘤的发生、免疫系统、神经系统及血管系统等密切相关,还能调节成骨细胞骨形成和破骨细胞骨吸收来影响骨代谢。当骨形成和骨吸收动态平衡被打破以后,会导致骨量异常以及相关骨病的发生。本文就质子感知受体在骨代谢中的作用进行综述。

关键词：质子感知受体骨代谢卵巢癌g蛋白偶联受体1

气道酸性微环境下OgR1介导黏蛋白5AC表达的研究

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气道酸性微环境下OGR1介导黏蛋白5AC表达的研究

作者：周万重庆医科大学

学位级别：硕士

目的明确酸性微环境诱导下气道上皮细胞OgR1蛋白表达情况，研究OgR1蛋白、ERK蛋白在酸性微环境诱导下气道黏蛋白5AC高表达中的作用，并就酸性微环境与OgR1/ERK之间的关系做初步探讨。方法（1）体外培养人气道上皮细胞（16HBE），以氯化... 详细信息

目的明确酸性微环境诱导下气道上皮细胞OgR1蛋白表达情况，研究OgR1蛋白、ERK蛋白在酸性微环境诱导下气道黏蛋白5AC高表达中的作用，并就酸性微环境与OgR1/ERK之间的关系做初步探讨。方法（1）体外培养人气道上皮细胞（16HBE），以氯化氢创造细胞酸性环境（pH6.4），以细胞外信号调节激酶（ERK）特异性抑制剂PD88059及卵巢癌g蛋白偶联受体1（OgR1） siRNA进行干预，将细胞随机分为8组：①对照组②酸刺激组③酸刺激+转染OgR1siRNA组④pH7.4+OgR1siRNA组⑤酸刺激+阴性siRNA组⑥pH7.4+阴性siRNA组⑦酸刺激+PD98059组⑧pH7.4+PD98059组（2）采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞活性，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定各组细胞黏蛋白(MUC)5AC转录水平，酶联免疫反应(ELISA)法观察细胞黏蛋白5AC裂解液中MUC5AC蛋白水平的改变;（3）Western blot法检测OgR1蛋白及p-ERK蛋白的相对含量。结果（1）酸刺激组内细胞黏蛋白(MUC)5AC转录及蛋白水平显著高于对照组（p值均gR1及p-ERK蛋白含量较对照组亦明显增加。（2）酸刺激+转染OgR1siRNA组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组（p值均gR1siRNA组MUC5AC蛋白含量及mRNA水平较pH7.4对照组无明显差别，其p-ERK含量也变化不大。（3）酸刺激+PD98059组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组（p值均蛋白水平无明显差异。结论（1）在酸性微环境条件下，支气管上皮细胞OgR1表达明显增高，ERK磷酸化水平明显上升。（2）转染OgR1siRNA抑制其功能表达后气道上皮细胞黏蛋白5AC mRNA转录水平及蛋白表达水平明显降低，ERK的磷酸化也明显减弱。（3）本实验提示OgR1可能通过激活ERK信号通路参与气道酸性微环境所致的人气道粘膜上皮细胞黏蛋白5AC表达。

关键词：黏蛋白酸性环境卵巢癌g蛋白偶联受体1 细胞外信号调节激酶

外周血细胞OgR1家族受体表达与低氧性肺动脉高压之间的相关性

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外周血细胞OGR1家族受体表达与低氧性肺动脉高压之间的相关性

作者：郭智敏内蒙古大学

学位级别：硕士

目的：检测人外周血细胞中质子感知受体在低氧性肺动脉高压患者和健康人中的表达变化,并分析其变化与临床病理变化之间的相关性,探讨质子感知受体在低氧性肺动脉高压中的作用。为质子感知受体在肺动脉高压中的功能研究提供理论基础,为... 详细信息

目的：检测人外周血细胞中质子感知受体在低氧性肺动脉高压患者和健康人中的表达变化,并分析其变化与临床病理变化之间的相关性,探讨质子感知受体在低氧性肺动脉高压中的作用。为质子感知受体在肺动脉高压中的功能研究提供理论基础,为临床肺动脉高压的防治提供新的研究思路。方法：收集30例肺动脉高压患者及30例健康体检者临床一般资料,包括性别、年龄、血气分析、肺功能、心脏彩超;同时收集外周血标本,提取总RNA,采用实时荧光定量PCR检测外周血***8和OgR1基因mRNA表达水平。酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清肿瘤坏死因子Ｐ(tumor necrosis factor-Ｐ,TNF-a)和白介素6(interleukin-6,IL-6)水平。结果：①与健康体检组相比低氧性肺动脉高压患者在年龄、性别方面无差异,P>0.05。②低氧性肺动脉高压组血气分析平均PaO2:52.13±6.33 mmHg,平均PaCO2-54.54±20.88 mmHg健康体检组血气分析平均PaO277.82±3.95mmHg,平均PaCO2 39.40±3.39mmHg.两组间PaO2、PaCO比较差异均有统计学意义,P1。低氧性肺动脉高压组肺功能FEV1占预计值%平均值为39.60±12.86,FEVl/FVC平均值为55.59±7.76;健康体检组肺功能FEV1占预计值%平均值为109.00±18.30,FEV1/FVC平均值为82.60±3.66。低氧性肺动脉高压组与健康体检组FEV1占预计值%.FEV1/FVC司比较差异有统计学意义,P1。④低氧性肺动脉高压组肺动脉收缩压平均值为60.03±15.79mmHg,健康体检肺动脉收缩压平均值为24.63±3.23mmHg,2组间差异有统计学意义,P1。⑤与健康体检组相比低氧性肺动脉高压患者外周血中***4和g2A的mRNA表达水平显著提高,差异具有统计学意义,P1。⑥低氧性肺动脉高压组TNF-a平均含量为0.26±0.09 ng/L,IL-6平均含量为43.26±21.07 ng/L,与健康体检组相比具有显著差异,Pg2A在肺动脉高压患者中高表达,表明质子感知受体参与低氧性肺动脉高压的发生,联合检测三者水平可以作为检测肺动脉高压的分子标志物。②低氧性肺动脉高压组肺动脉压力、***-6与部分质子感知受体的表达具有相关性,为进一步寻找治疗肺动脉高压的分子途径提供了理论依据。

关键词：低氧性肺动脉高压质子感知受体卵巢癌g蛋白偶联受体1 g蛋白偶联受体4 细胞因子

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质子敏感性OgR1亚家族及其研究进展

国际病理科学与临床杂志 2007年第4期27卷 354-357页

作者：张海强严奉祥衡阳市南华大学药物药理研究所湖南衡阳421001

卵巢癌g蛋白偶联受体1（OgR1）亚家族是新近发现的一类对质子敏感的g蛋白偶联受体,它包括诱导细胞停滞于g2/M期的g蛋白偶联受体g2A（g2accumulation）、T细胞死亡偶联基因8（T-cell death-associatedgene8,TDAg8）、g蛋白偶联受体4（g p... 详细信息

卵巢癌g蛋白偶联受体1（OgR1）亚家族是新近发现的一类对质子敏感的g蛋白偶联受体,它包括诱导细胞停滞于g2/M期的g蛋白偶联受体g2A（g2accumulation）、T细胞死亡偶联基因8（T-cell death-associatedgene8,TDAg8）、g蛋白偶联受体4（g protein-coupled receptor4,gPR4）及OgR1,它们相互之间具有40%~50%的序列同源性。一些脂质分子目前被认为是该类受体的配体,并且该类受体还能通过组氨酸残基感知胞外质子或pH值的变化。该亚家族可通过几种异源三聚体g蛋白包括gs,gi,gq及g12/13介导细胞内多种信号通路,与肿瘤的发生、细胞骨架重组、免疫系统和血管系统功能等生理病理过程有关。

关键词：质子 g蛋白偶联受体g2A T细胞死亡偶联基因8 g蛋白偶联受体4 卵巢癌g蛋白偶联受体1