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补肾法对控制性超促排卵小鼠卵母细胞成熟过程中卵丘扩展的影响及MAPKs信号通路调控的机制研究

补肾法对控制性超促排卵小鼠卵母细胞成熟过程中卵丘扩展的影响及...

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作者：梁潇河北中医学院

学位级别：硕士

目的:本研究旨在通过观察分析序贯使用补肾调经Ⅱ号方、Ⅲ号方对卵丘扩展分级情况、卵丘扩展相关因子、FSH及MAPKs信号通路的影响,揭示补肾法改善卵丘细胞外基质、促进卵丘扩展、卵母细胞发育成熟的作用及其机制,丰富中医“肾主生殖”... 详细信息

目的:本研究旨在通过观察分析序贯使用补肾调经Ⅱ号方、Ⅲ号方对卵丘扩展分级情况、卵丘扩展相关因子、FSH及MAPKs信号通路的影响,揭示补肾法改善卵丘细胞外基质、促进卵丘扩展、卵母细胞发育成熟的作用及其机制,丰富中医“肾主生殖”的理论。方法:将360只动情周期正常的雌性昆明小鼠采用随机数表法随机分为正常组、对照组、补肾组,每组各120只。对照组与补肾组第1-9天腹腔注射Gn RHa,第9天同时注射PMSG,48 h后注射h CG,正常组注射等体积生理盐水,补肾组第1-9天灌胃补肾调经Ⅱ号方,第10-11天灌胃补肾调经Ⅲ号方,正常组与对照组灌胃等体积蒸馏水,连续11天。各组小鼠分别于注射生理盐水或h CG后6 h、9 h、12 h时,断头取血,离心,取血清;在显微镜下观察COCs的卵丘扩展分级并计数,然后收集COCs。放射免疫法检测小鼠血清FSH含量;实时荧光定量PCR法检测小鼠COCs中卵丘扩展相关因子HAS2、TNFAIP6、PTX3、PTGS2 m RNA的表达水平;免疫荧光染色法检测小鼠COCs中卵丘扩展相关因子HAS2、TNFAIP6、PTX3、PTGS2蛋白的表达;Western blot法检测检测小鼠COCs中卵丘扩展相关因子HAS2、TNFAIP6、PTX3、PTGS2蛋白的表达水平;Western blot法检测检测小鼠COCs中MAPK14、MAPK3/1的蛋白表达及其磷酸化水平。结果:1卵丘扩展分级不同级别COCs的形态与结构0级:不能看到卵丘扩展,但卵母细胞开始贴附在培养板上并开始形成单层。1级:可以观察到最小程度的卵丘扩展,此时COCs的外形呈放射状。2级:COCs的外层卵丘细胞开始扩展。3级:除了紧贴卵母细胞的放射冠层卵丘细胞外,其余卵丘细胞都已扩展。4级:所有的卵丘细胞均已扩展,达到最大程度的卵丘扩展。2各组小鼠不同时间点COCs卵丘扩展分级情况的比较注射h CG 6 h、9 h、12 h,与正常组比较,对照组COCs各扩展级别的比率差异无统计学意义(P>0.05);与正常组比较,补肾组COCs在6 h的1级、9 h和12 h的1级、2级所占比率降低(P0.05);与对照组相比,补肾组小鼠血清FSH含量升高(P0.05);与正常组相比,补肾组HAS2的m RNA表达差异无统计学意义(P>0.05),TNFAIP6、PTX3、PTGS2的m RNA表达升高(P0.05),TNFAIP6、PTX3的m RNA表达升高(P0.05);与正常组相比,补肾组PTGS2的m RNA表达差异无统计学意义(P>0.05),HAS2、TNFAIP6、PTX3的m RNA表达升高(P0.05);与正常组相比,补肾组HAS2、TNFAIP6、PTX3、PTGS2的m RNA表达差异升高(P0.05),TNFAIP6、PTX3、PTGS2的m RNA表达升高(P卵丘细胞与卵母细胞中均存在表达。5.2 Wester

关键词：补肾法卵丘卵母细胞复合物卵丘扩展卵丘扩展相关因子 MAPK14 MAPK3/1

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