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中国番茄黄化曲叶病毒卫星dnaβ在心叶烟中的遗传结构及种群变异

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植物保护学报 2010年第1期37卷 31-36页

作者：任芳青玲熊艳谭万忠西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室重庆400716

为明确中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)伴随的卫星dnaβ分子在寄主体内的遗传结构特点及种群变异水平,将TYLCCNV分离物Y10(Y10)和伴随的dnaβ(Y10β)的全长侵染性克隆经农杆菌介导共同接种心叶烟,从... 详细信息

为明确中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)伴随的卫星dnaβ分子在寄主体内的遗传结构特点及种群变异水平,将TYLCCNV分离物Y10(Y10)和伴随的dnaβ(Y10β)的全长侵染性克隆经农杆菌介导共同接种心叶烟,从Y10β的分子克隆出发,对心叶烟中Y10β的种群结构、变异水平、突变分布及碱基变异类型进行分析。结果表明,Y10β种群具有丰富的遗传多样性及较高的变异水平,所获得的43个Y10β全长克隆在核苷酸水平均发生不同程度的变异,接种后60天的Y10β种群60-1和种群60-2的突变频率分别为2.7×10-3和3.0×10-3,另一个接种后120天的种群120-1的突变频率为3.0×10-3;此卫星dnaβ的变异位点在整个基因组内均有分布,但在A-rich区碱基变异位点数最多,且主要为碱基A的缺失和插入,特别是在889～901核苷酸位点,所得43个克隆中有19个克隆在这一区段发生碱基A的缺失或插入;此外,Y10β的碱基替换突变类型以A突变为G及T突变为C的比例较高。

关键词：中国番茄黄化曲叶病毒卫星dnaβ 遗传结构种群变并

伴随中国番茄黄化曲叶病毒的卫星dnaβ在本氏烟中的种群变异

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西南师范大学学报（自然科学版） 2010年第5期35卷 110-115页

作者：任芳青玲熊艳孙现超西南大学植物保护学院重庆400715

采用根癌土壤杆菌介导接种和分子克隆技术,分析中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellowleaf curl China virus,TYLCCNV)Y10分离物(Y10)的伴随卫星dnaβ(Y10β)在本氏烟中的种群变异.结果显示表明:本氏烟中Y10β种群所有克隆均发生不同程度... 详细信息

采用根癌土壤杆菌介导接种和分子克隆技术,分析中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellowleaf curl China virus,TYLCCNV)Y10分离物(Y10)的伴随卫星dnaβ(Y10β)在本氏烟中的种群变异.结果显示表明:本氏烟中Y10β种群所有克隆均发生不同程度的变异,在接种60 d及120 d后其种群突变频率分别为2.48×10-3和2.54×10-3,表明该卫星dnaβ在同一寄主体内的侵染时间对其种群变异水平没有明显影响;Y10β种群的碱基突变位点主要分布于dnaβ的富A(A-rich)区,在卫星共同区(SCR)内碱基突变位点最少;其碱基突变类型以A→G,G→A,T→C突变及碱基G缺失等突变类型的比例较高,并且在A-rich区内出现多个克隆在同一核苷酸位点发生相同突变的现象.

关键词：中国番茄黄化曲叶病毒卫星dnaβ 种群变异碱基突变

MYVYNV卫星dnaβ在3种寄主中的种群变异

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MYVYNV卫星DNAβ在3种寄主中的种群变异

侵染朱槿的木尔坦棉花曲叶病毒及其卫星dna全基因组结构特征

中国植物保护学会第十一次全国会员代表大会暨2013年学...

作者：李茵赵婧王春艳青玲西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室

:云南赛葵黄脉病毒(Malvastrum ycllow vcin Yunnan virus,MYVYNV)是从云南表现黄脉症状的赛葵上分离到的双生病毒科菜豆金色花叶病毒属的一个新种。该病毒伴随卫星分子,即云南赛葵黄脉病毒伴随卫星(Malvastrum yellow vein Yunnan viru... 详细信息

:云南赛葵黄脉病毒(Malvastrum ycllow vcin Yunnan virus,MYVYNV)是从云南表现黄脉症状的赛葵上分离到的双生病毒科菜豆金色花叶病毒属的一个新种。该病毒伴随卫星分子,即云南赛葵黄脉病毒伴随卫星(Malvastrum yellow vein Yunnan virus satellitedna beta,MYVYNB)。本研究对采自云南的辣椒YN65、四川的赛葵SC95和锦葵YN382样品,利用卫星通用引物beta01(5′-GGTACCACTACGCTACGCAGCAGCC-3′)和beta02(5′-GGTACCTAC-CCTCCCAGGGGTACAC-3′)对这3种寄主中存在的卫星dnaβ进行PCR扩增,通过分子克隆技术分别建立其卫星dna种群,并随机筛选若干个克隆进行序列测定。序列分析表明,从3种寄主中获得的卫星dnaβ均为MYVYNV伴随卫星MYVYNB。进一步对这3种寄主中MYVYNB种群的遗传结构和突变水平进行分析,结果表明:辣椒YN65种群的突变克隆百分率最高,达84.2%,种群突变频率为1.5×10;锦葵YN382种群的突变克隆百分率最低,为35.0%,所得20个克隆中仅有7个克隆发生突变,突变频率为2.6×10;赛葵SC95种群的突变克隆百分率为76.2%,突变频率均为9.9×10。对比MYVYNB在3种寄主植物中的种群变异水平发现,无论是突变克隆百分率还是突变频率,寄主辣椒均高于杂草赛葵和锦葵。寄主辣椒上伴随卫星种群的突变类型有碱基的替换与碱基的缺失和增加,而锦葵和赛葵上伴随卫星种群的突变类型仅有碱基的替换。与已报道的卫星实验种群研究结果进行比较发现,实验种群突变位点多发生在卫星A-rich区;而田间自然种群在βC1区、A-rich区、SCR区均有突变位点,A-rich区突变位点反而较少。这些研究结果表明寄主对双生病毒伴随卫星的遗传变异有一定影响。

关键词：寄主云南赛葵黄脉病毒卫星dnaβ 种群变异

来源： cnki会议评论

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病毒学报 2008年第1期24卷 64-68页

作者：毛明杰何自福虞皓李华平广东省农业科学院植物保护研究所广州510640 华南农业大学植物病毒研究室广州510642

从广州朱槿上分离到病毒分离物G6,全序列测定结果表明,G6dna-A全长为2737个核苷酸。序列比较显示,G6dna-A与木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)各分离物的同源率均大于89%,其中与CLCuMV-[62]的同源率最高(96.1%),与拉贾斯坦棉花曲叶病毒(CLCuRV... 详细信息

从广州朱槿上分离到病毒分离物G6,全序列测定结果表明,G6dna-A全长为2737个核苷酸。序列比较显示,G6dna-A与木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)各分离物的同源率均大于89%,其中与CLCuMV-[62]的同源率最高(96.1%),与拉贾斯坦棉花曲叶病毒(CLCuRV)的同源率87.1%～89.8%,而与其他菜豆金色花叶病毒属病毒同源率均在87%以下。dna-A系统进化关系分析显示,G6与CLCuMV各分离物的亲缘关系最近,聚在一起形成一个分支,而与其他几种双生病毒的亲缘关系相对较远。利用dnaβ特异引物β01和β02,从G6中扩增到卫星dna分子(dnaβ)。序列分析结果表明,G6dnaβ全长1346个核苷酸,推导其互补链上编码一个ORF(C1)。序列比较结果表明,G6dnaβ与CLCuMV dnaβ的同源率最高(92.1%),与CLCuRV dnaβ的同源率为88.7%,而与其他已报道的dnaβ的同源率均在80%以下。dnaβ系统进化关系分析显示,G6dnaβ与CLCuMV dnaβ形成一个独立的分支,再与CLCuRV及MYVV-[Y47]的dnaβ形成一个较大分支。从上述研究结果可以得出,侵染广东朱槿的病毒分离物G6应该是CLCuMV一个分离物。

关键词：木尔坦棉花曲叶病毒朱槿卫星dnaβ Begomovirus

侵染云南白肋烟的中国番茄黄化曲叶病毒及伴随卫星dna分子的基因组特征

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农业生物技术学报 2003年第5期11卷 525-530页

作者：李桂新范三微李正和谢艳周雪平浙江大学生物技术研究所杭州310029 浙江大学生物技术研究所

从中国云南省大理地区表现曲叶症状的白肋烟(Nicotinatabacum WhiteBurley)上分离到病毒分离物Y43,该病毒可经烟粉虱(Bemisiatabaci)及嫁接传播。用15种粉虱传双生病毒的单抗对病样进行TAS-ELISA检测,结果表明,该病毒属菜豆金色花叶病毒... 详细信息

从中国云南省大理地区表现曲叶症状的白肋烟(Nicotinatabacum WhiteBurley)上分离到病毒分离物Y43,该病毒可经烟粉虱(Bemisiatabaci)及嫁接传播。用15种粉虱传双生病毒的单抗对病样进行TAS-ELISA检测,结果表明,该病毒属菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)病毒。对dna-A1.7kb基因组序列测定和分析表明,Y43与中国广西报道的中国番茄黄化曲叶病毒(TomatoyellowleafcurlChinavirus,TYLCCNV)同源性达89%,其中外壳蛋白(CP)氨基酸同源性达96%,因此Y43应为TYLCCNV的一个新分离物。进一步研究发现,Y43还伴随着一个长1349nt的卫星dna分子(dnaβ)。Y43dnaβ与AYVVdnaβ、BYVMVdnaβ和CLCuVdnaβ的同源性较低,而与中国分离的烟草曲叶病毒Y5dnaβ和Y8dnaβ的亲缘关系较近。dnaβ可能编码7个分子量超过3.5kD的ORF,其中C1推测为有功能的ORF。

关键词：中国番茄黄花曲叶病毒卫星dnaβ Begomovirus 粉虱传双生病毒

侵染番茄的两种双生病毒及其伴随卫星dna的检测、鉴定与多重PCR检测技术体系的建立

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侵染番茄的两种双生病毒及其伴随卫星DNA的检测、鉴定与多重PCR检...

作者：刘灵芝山东农业大学

学位级别：硕士

双生病毒(Geminivirus)是一类具备孪生颗粒的单链环状dna病毒,在世界范围内普遍发生,而且已经在许多国家的经济作物上造成毁灭性的危害。自20世纪90年代起,多种双生病毒已经在中国的云南、广东、广西、海南和福建等地的番茄、烟草、番... 详细信息

双生病毒(Geminivirus)是一类具备孪生颗粒的单链环状dna病毒,在世界范围内普遍发生,而且已经在许多国家的经济作物上造成毁灭性的危害。自20世纪90年代起,多种双生病毒已经在中国的云南、广东、广西、海南和福建等地的番茄、烟草、番木瓜等作物上相继发现。本研究主要以番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)及其伴随卫星和中国番木瓜曲叶病毒(Papaya leaf curl China virus, PaLCuCNV)为主要研究对象,对山东省、河南省番茄主产区展开系统调查,明确了TYLCV与PaLCuCNV的分布情况,以及确定了伴随TYLCV的卫星分子。通过提取典型症状样品总dna利用粉虱传双生病毒简并引物PA/PB,进行PCR扩增得到535 bp的特异条带。然后利用TYLCV的全长引物(TY1-F/R、TY2-F/R和TY3-F/R)对阳性样本进行扩增。研究结果表明,在河南省安阳市、郑州市、焦作市以及山东省的潍坊市、临沂市、聊城市、烟台市和日照市通过PCR共得到16条TYLCV的全长核苷酸序列。通过测序和核苷酸序列比对表明这些序列与山东潍坊的TYLCV (SDWF-TYLCV)序列一致性最高为99.1%。根据已构建的系统进化树分析得到河南、山东的TYLCV分离物与番茄黄化曲叶病毒以色列(TYCV-IL)株系的分离物聚类在同一分支上,说明河南、山东TYLCV分离物属于TYLCV-IL株系。对感染TYLCV的阳性样品利用PaLCuCNV全长特异引物Fxyw-F/Fxyw-R进行检测得到2749 bp的核苷酸序列。在河南省郑州市、焦作市、安阳市筛选出7株TYLCV和PaLCuCNV复合侵染的阳性样品。同时利用双生病毒卫星分子dnaP特异引物β01／p02对TYLCV阳性样品进行dnaP检测,结果发现河南焦作市可以扩增出约1.3 kb的特异性条带。经序列比对,本研究发现此卫星与越南番茄黄化曲叶病毒卫星dnaβ (Tomato yellow leaf curl Vietnam betasatellite, TYLCVNB)分子的一致率最高,为89.7%,表明河南省TYLCV分离物中含有这种新型的dnaβ分子。建立了特异性检测PaLCuCNV、TYLCV和TYLCVNB的单一、双重PCR检测体系并对各体系的灵敏度进行了研究。进行单一PCR体系灵敏度实验表明可检测PaLCuCNV质粒和p质粒的最低浓度均为1 ng/mL。可检测TYLCV质粒的最低浓度为1 Lg/mL。双重PCR检测灵敏度与单一PCR一致。

关键词：番茄黄化曲叶病毒卫星dnaβ 中国番木瓜曲叶病毒多重PCR

赛葵黄脉病毒卫星dna在不同寄主中的分子变异比较

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赛葵黄脉病毒卫星DNA在不同寄主中的分子变异比较

烟草曲茎病毒Y128分离物及伴随卫星的分子鉴定

2014年中国植物保护学会学术年会

作者：曹刘素青玲西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室

为了明确寄主对赛葵黄脉病毒(Malvastrum yello vein virus,MYVV)伴随卫星dna的遗传结构特点及种群变异水平的影响,将采自云南自然侵染赛葵黄脉病毒的辣椒YN57和赛葵黄脉病毒及伴随卫星的全长侵染性克隆通过农杆菌接种侵染本氏烟和心叶... 详细信息

为了明确寄主对赛葵黄脉病毒(Malvastrum yello vein virus,MYVV)伴随卫星dna的遗传结构特点及种群变异水平的影响,将采自云南自然侵染赛葵黄脉病毒的辣椒YN57和赛葵黄脉病毒及伴随卫星的全长侵染性克隆通过农杆菌接种侵染本氏烟和心叶烟,通过分子克隆技术得到3种寄主的克隆种群,分析赛葵黄脉病毒伴随卫星(Malvastrum yellow vein virus satellite dna beta,MYVB)在3种寄主中的变异水平、突变分布及碱基变异类型。结果表明,自然感染MYVB的寄主YN57中种群突变克隆百分率为55.6%,突变频率为1.4×10;在本氏烟中MYVB种群突变克隆百分率为100%,突变频率为2.4×10;在心叶烟中MYVB种群突变克隆百分率为100%,突变频率为1.8×10,表明MYVB自然种群突变水平略低于实验种群。对MYVB种群变异类型及分布特点分析表明,自然寄主中不仅检测到碱基的突变而且检测到碱基的缺失和增加,在实验寄主中只检测碱基的突变和碱基的增加,且多为碱基A的增加和突变;自然种群突变主要发生在SCR区,实验种群突变主要发生在A-rich区。

关键词：寄主赛葵黄脉病毒卫星dnaβ 种群变异

来源： cnki会议评论

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微生物学通报 2005年第5期32卷 82-86页

作者：青玲牛颜冰西南大学植保学院重庆400716 山西农业大学生命科学学院太谷030801

从云南保山田间表现曲叶症状的烟草植株上分离到病毒分离物Y128,病株在实验室可经烟粉虱(Bemisiatabaci)传播到健康烟草上。分别用针对烟草曲茎病毒(TbCSV)、云南烟草曲叶病毒(TLCYNV)、中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)及泰国番茄黄化曲... 详细信息

从云南保山田间表现曲叶症状的烟草植株上分离到病毒分离物Y128,病株在实验室可经烟粉虱(Bemisiatabaci)传播到健康烟草上。分别用针对烟草曲茎病毒(TbCSV)、云南烟草曲叶病毒(TLCYNV)、中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)及泰国番茄黄化曲叶病毒(TYLCTHV)等田间常复合侵染的云南粉虱传双生病毒的特异性引物对Y128dna-A进行PCR扩增,结果表明Y128是烟草曲茎病毒(TbCSV)的1个分离物。利用dnaβ的特异性引物β01和β02,在Y128中扩增到卫星dna分子(Y128β)。对Y128进行dnaβ全序列测定及分析表明,Y128β全长1350个核苷酸,其互补链上编码1个有功能的ORF(βC1)。Y128β的全序列与TbCSV各个分离物的卫星分子(Y2β、Y35β和Y115β)的同源性最高,分别为85·2%、94·3%和88%;与其它已报道的卫星dnaβ的同源性均低于56·1%。

关键词：烟草曲茎病毒卫星dnaβ 菜豆金色花叶病毒属粉虱传双生病毒

侵染茄科蔬菜的三种病毒以及番茄黄化曲叶病毒伴随卫星的检测与分子鉴定

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侵染茄科蔬菜的三种病毒以及番茄黄化曲叶病毒伴随卫星的检测与分...

作者：孙国珍山东农业大学

学位级别：硕士

植物病毒病是蔬菜种植业的重要限制因素,目前已经成为制约我国蔬菜产业可持续发展的重要因素。番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLC V),属于双生病毒科菜豆金黄花叶病毒属,引起番茄黄化曲叶病,是通过媒介昆虫-烟粉虱... 详细信息

植物病毒病是蔬菜种植业的重要限制因素,目前已经成为制约我国蔬菜产业可持续发展的重要因素。番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLC V),属于双生病毒科菜豆金黄花叶病毒属,引起番茄黄化曲叶病,是通过媒介昆虫-烟粉虱传播的蔬菜生产上的一种毁灭性病害。蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus, BB WV),为世界性流行的病毒,它的寄主范围极广,造成严重的危害,在各产区均有分布。番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus, ToCV)病是从国外传入我国的一种烟粉虱传播的新型病毒病,可以侵染多种植物。本研究主要以TYLCV及其卫星、BBWV口ToCV为主要对象,以PCR技术为基础,对山东省、河南省、河北省和辽宁省蔬菜主产区展开系统调查,目的是摸清蚕豆萎蔫病毒与番茄褪绿病毒的发生分布情况和寄主范围,以及伴随番茄黄化曲叶病毒的卫星分子。研究结果表明,在对山东省、河南省、河北省和辽宁省TYLCV样品的检测过程中,同时利用双生病毒卫星dna的通用引物beta01/beta02,对TYLCV阳性样品进行了dnaβ的检测,结果发现,山东昌邑县、河南焦作市感病样品可以扩增出约1.3Kb的特异性条带,经序列比对,发现与越南黄化曲叶病毒卫星分子(Tomato yellow leaf curl Vietnam betasatellite(TYLCVNB)一致性为88%,均为越南黄化曲叶病毒卫星dnaβ分子,表明山东省、河南省TYLCV分离物中含有这种新型的dnaβ分子,这是国内首次发现T YLCV病毒dna-A与越南黄化曲叶病毒卫星dnaβ以病害复合体形式存在。通过检测和序列分析,基本确定了TYLCV病毒伴随卫星分子的主流种类和其发生蔓延、分子变异及流行趋势等;基本摸清了BBWV病毒在山东省辣椒主产区的发生分布情况。从山东省共采集到55份辣椒样品,采用蚕豆病毒属的引物BBWV-R1F/R1R, R2F-1F/R2F-1R,及包含有LCP与SCP的引物,对供试辣椒病株进行BBWV的RT-PCR扩增,分别扩增到大小约为57Obp、1.3Kb、600bp、1.4Kb的特异性条带,筛选出3株阳性样品,与预期结果一致,获得2条BBWV2-RNA2包含SCP及部分LCP序列,证实了采集的山东昌邑、青州辣椒样品被蚕豆萎蔫病毒病毒侵染。其中,BBWV2-RNA1序列与韩国分离物RP4具有较高的序列同源性,为94.61%,BBWV2-RNA2与韩国分离物AF104335一致性可达96.03%,首次报道采用了RT-PCR法从山东辣椒上检测到BBWV2,并将该分离物的核酸序列与国内发现的其他BBWV2分离物进行分析;通过对河北多个县市的番茄种植区调查,基本摸清了ToCV病毒在河北省的发生分布情况。从9个地区共采集到290份番茄样品、48份杂草样品,以ToCV外壳蛋白和热激蛋白共3对特异引物对ToCV疑似样品进行检测,分别扩增到约1032bp、943bp和911bp的特异条带,其中132份番茄样品带有ToCV,而在杂草上并未检测到阳性样品。同时对疑似病样进行另一种严重发生的番茄黄化曲叶病毒复合侵染情况的检测,从部分样品中扩增得到约833bp的核苷酸序列,确定田间存在ToCV和TYLCV复合侵染。序列比对发现,河北地区番茄样品的ToCV分离物之间序列一致性最高达99.7%,与日本、北京分离物最高分别达到99.5%与99.7%,获得了ToCV番茄分离物CP、HSP70全序列,这是国内首次明确河北地区番茄受到番茄褪绿病毒的侵染。

关键词：双生病毒番茄黄化曲叶病毒卫星dnaβ 蚕豆萎蔫病毒番茄褪绿病毒系统发育分析