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南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒的研制

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植物保护学报 2013年第2期40卷 189-190页

作者：陈先锋张吉红崔俊霞张慧丽郭立新余澍琼宁波出入境检验检疫局宁波315012

南芥菜花叶病毒（Arabis mosaic virus,ArMV）是我国对外公布的检疫性有害生物,其寄主广泛,极易传播、蔓延[1],因此,加强对该病毒的检测具有重要的意义。目前,针对ArMV的检测方法主要有DAS-ELISA和RT-PCR技术[2]。这两种方法在检测周期... 详细信息

南芥菜花叶病毒（Arabis mosaic virus,ArMV）是我国对外公布的检疫性有害生物,其寄主广泛,极易传播、蔓延[1],因此,加强对该病毒的检测具有重要的意义。目前,针对ArMV的检测方法主要有DAS-ELISA和RT-PCR技术[2]。这两种方法在检测周期方面具有明显的优势,且操作简单,但对仪器的依赖性较强。

关键词：南芥菜花叶病毒检测试剂盒 DAS-ELISA RT-PCR技术检疫性有害生物 mosaic virus ArMV

南芥菜花叶病毒外壳蛋白的克隆表达及抗血清的制备

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西北农业学报 2006年第6期15卷 217-220页

作者：薛杨安德荣全鑫李明福西北农林科技大学植保学院与陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京朝阳100029

依据报道的ArMV外壳蛋白基因(coat protein,cp)序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到长约990bp的ArMV cp基因亲水基团部分片段,将目的片断克隆到原核表达载体pEGX-6p-1中,构建ArMV cp基因与GST蛋白融合表达载体pEGX-cp,重组载体化大肠杆菌BL... 详细信息

依据报道的ArMV外壳蛋白基因(coat protein,cp)序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到长约990bp的ArMV cp基因亲水基团部分片段,将目的片断克隆到原核表达载体pEGX-6p-1中,构建ArMV cp基因与GST蛋白融合表达载体pEGX-cp,重组载体化大肠杆菌BL21,经IPITG诱导后,融合蛋白GST-cp得到了特异表达。用12%的SDS-PAGE分析结果表明,表达产物大小为63.2 kDa主要以包含体的形式存在。用冰冷的KCl显色,分离表达的蛋白质特异条带制备抗体,免疫家兔后得到特异性较强的抗血清,经酶联免疫法检测效价为1∶100 000。

关键词：南芥菜花叶病毒外壳蛋白融合蛋白抗血清

南芥菜花叶病毒高灵敏度检测方法的建立及应用

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上海农业学报 2013年第5期29卷 74-78页

作者：吴东妮陈舜胜杨翠云于翠上海出入境检验检疫局上海200135 上海海洋大学上海201306

以感染ArMV的百合种球制备粗提液,分别用聚乙二醇(PEG-6000)和免疫磁珠(Immuno-magnetic beads,IMB)进行富集处理,以富集处理后的样品进行ELISA、RT-PCR和SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测。结果表明:富集处理能显著提高这些方法从百合... 详细信息

以感染ArMV的百合种球制备粗提液,分别用聚乙二醇(PEG-6000)和免疫磁珠(Immuno-magnetic beads,IMB)进行富集处理,以富集处理后的样品进行ELISA、RT-PCR和SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测。结果表明:富集处理能显著提高这些方法从百合种球样品中检测ArMV的灵敏度。PEG-RT-PCR可检测稀释至10^(-5)的样品,IMB-RT-PCR可检测稀释至10^(-3)的样品。实时荧光RT-PCR检测也表明,PEG对百合种球中ArMV的富集效果优于IMB处理。对19批进境百合种球进行ArMV的RT-PCR检测,发现PEG或IMB富集处理提高了阳性样品的检出率。

关键词：南芥菜花叶病毒检测 RT—PCR 聚乙二醇免疫磁珠敏感度

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南芥菜花叶病毒单克隆抗体的研制及检测应用

植物检疫 2011年第6期25卷 18-20页

作者：李桂芬马洁朱水芳魏梅生梁新苗于翠中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京100121 北京出入境检验检疫局上海出入境检验检疫局

将纯化的南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)制剂免疫Balb/c小鼠,末次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了2株稳定分泌ArMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株并... 详细信息

将纯化的南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)制剂免疫Balb/c小鼠,末次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了2株稳定分泌ArMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为3F7,4G10。用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定分别为IgA(3F7)、IgG1(4G10)。间接ELISA效价测定结果:3F7为1:106,4G10为1:108。以单克隆抗体为包被抗体、多克隆抗体为检测抗体的TAS-ELISA检测试剂盒能检测感染ArMV的昆诺藜病汁液的灵敏度为1:1600。

关键词：南芥菜花叶病毒单克隆抗体

南芥菜花叶病毒RT-PCR扩增产物胶体金层析和酶联检测方法的建立

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植物检疫 2011年第5期25卷 33-36页

作者：曹成魏梅生张永江李桂芬吴兴泉河南工业大学生物工程学院河南郑州450001 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所

南芥菜花叶病毒是我国进境植物检疫性有害生物,为建立快速灵敏的检疫检测方法,本研究用生物素标记一条引物,用荧光素(或地高辛)标记另一条引物,经RT-PCR扩增产生双标记的扩增产物,建立了PCR扩增产物的胶体金层析检测和ELISA检测方法。... 详细信息

南芥菜花叶病毒是我国进境植物检疫性有害生物,为建立快速灵敏的检疫检测方法,本研究用生物素标记一条引物,用荧光素(或地高辛)标记另一条引物,经RT-PCR扩增产生双标记的扩增产物,建立了PCR扩增产物的胶体金层析检测和ELISA检测方法。胶体金层析检测方法在15min即可获得检测结果,ELISA方法需20h,后者检测的灵敏度可比前者分别提高100倍和5000倍。所建立的2种方法都免去了普通PCR检测的溴化乙锭染色和电泳的过程。

关键词：南芥菜花叶病毒胶体金试纸条 ELISA 核酸检测

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进境唐菖蒲种球南芥菜花叶病毒分子鉴定

植物病理学报 2008年第2期38卷 215-218页

作者：秦绍钊丁元明王云月寸东义刘忠善李春燕云南省出入境检验检疫局昆明650228 云南农业大学植物保护学院昆明650201

Arabis mosaic virus(ArMV)had been found in the Gladiolus hybridus imported from the Netherlands by *** pairs of primers were designed according to the conserved region of the coat protein(CP) gene sequence of Arabis mosaic virus(ArMV),and two amplified bands with expected sizes of 750 bp and 250 bp were obtained by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR).The sensitivity of nested PCR was higher than that of single *** of the partial sequenced CP gene showed that the isolate was closed to ArMV with similarity of 99.0%-100%.All the results demonstrated that the isolated virus was ArMV.

关键词：南芥菜花叶病毒进境检疫分子鉴定检疫性有害生物唐菖蒲种球 mosaic virus

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从荷兰进口植物中检出南芥菜花叶病毒

植物保护学报 2007年第2期34卷 217-218页

作者：马新颖汪琳任鲁风高文娜周琦浙江林学院临安311300 北京出入境检验检疫局北京100026 本元正阳基因技术有限公司北京100176

南芥菜花叶病毒Arabis mosaic virus（ArMV）是豇豆花叶病毒科Comoviridae线虫传多面体病毒属Nepovirus成员，主要分布在荷兰、比利时等欧洲国家和美国、加拿大、澳大利亚、新西兰、南非、日本，我国尚未有报道。该病毒通常采用血清学... 详细信息

南芥菜花叶病毒Arabis mosaic virus（ArMV）是豇豆花叶病毒科Comoviridae线虫传多面体病毒属Nepovirus成员，主要分布在荷兰、比利时等欧洲国家和美国、加拿大、澳大利亚、新西兰、南非、日本，我国尚未有报道。该病毒通常采用血清学和鉴别寄主方法进行检测，但该方法较易出现假阳性，存在检测时间长，准确性和灵敏度较低等问题。近几年发展起来的基因芯片技术已经广泛用于人类病毒如乙肝病毒、人类免疫缺陷病毒、严重急性呼吸系统综合征病毒等医学诊断和动物病毒如口蹄疫、禽流感的检测和检疫，而应用基因芯片检测植物病毒实例的报道很少，目前仅用于百合病毒的检测，在南芥菜花叶病毒的检测中还没有尝试。

关键词：南芥菜花叶病毒植物病毒荷兰人类免疫缺陷病毒基因芯片技术呼吸系统综合征芯片检测进口

逆转录环介导等温扩增技术检测南芥菜花叶病毒

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植物保护 2013年第2期39卷 91-95,95页

作者：郭立新谭毅刘永丰邓丛良段维军许邹亮北仑出入境检验检疫局宁波315800 北京出入境检验检疫局北京101312 宁波出入境检验检疫局宁波315012 北京蓝谱生物科技有限公司北京100086

根据南芥菜花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了2组RT-LAMP引物,通过筛选试验,最终确定Ar4组引物为最佳引物,建立了南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测方法。同时,通过实时浊度仪和钙黄绿素分别对检测结果进行了判断。特异性和灵敏度试验结... 详细信息

根据南芥菜花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了2组RT-LAMP引物,通过筛选试验,最终确定Ar4组引物为最佳引物,建立了南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测方法。同时,通过实时浊度仪和钙黄绿素分别对检测结果进行了判断。特异性和灵敏度试验结果显示,RT-LAMP方法快速、特异且灵敏,其灵敏度与普通RT-PCR法一致。

关键词：南芥菜花叶病毒逆转录环介导等温扩增检测

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进境唐菖蒲种球携带南芥菜花叶病毒的检测

华中农业大学学报 2008年第1期27卷 46-48页

作者：丁元明秦绍钊王云月曹云华杜宇云南省出入境检验检疫局昆明650228

利用DAS-ELISA对荷兰进境的唐菖蒲培育叶片进行南芥菜花叶病毒检疫,再对血清呈阳性的种球进行培育,以长出的叶片作为检测材料,采用RT-PCR方法进行南芥菜花叶病毒的检测,并对PCR产物进行克隆与测序。结果表明,从唐菖蒲种球上发现了我国... 详细信息

利用DAS-ELISA对荷兰进境的唐菖蒲培育叶片进行南芥菜花叶病毒检疫,再对血清呈阳性的种球进行培育,以长出的叶片作为检测材料,采用RT-PCR方法进行南芥菜花叶病毒的检测,并对PCR产物进行克隆与测序。结果表明,从唐菖蒲种球上发现了我国进境植物检疫二类危险性有害生物南芥菜花叶病毒(Arabismosaic virus,ArMV)。

关键词：唐菖蒲 DAS-ELISA RT-PCR 南芥菜花叶病毒