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抗癌胚抗原单链抗体基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

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生物化学与生物物理学报 1999年第6期31卷 675-679页

作者：李彪朱承谟杨卫东吴祥甫上海第二医科大学附属瑞金医院!上海200025 中国科学院上海生物化学研究所!上海200031

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ，与修饰的家蚕核型多角体病毒ＢｍＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞，经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡＳｃＦｖ ... 详细信息

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ，与修饰的家蚕核型多角体病毒ＢｍＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞，经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡＳｃＦｖ基因的重组病毒ＢｍＢａｃＳｃＦｖ。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫，在两者中均得到了高效表达，产物分子量为２８ｋＤ，前者占细胞总蛋白的６％，后者为０．３ｍｇ／蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ｎｉ２＋ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱纯化，前者纯度可达９０％以上，后者纯度较低；纯化后的融合蛋白具有ＣＥＡ结合活力，其亲和常数分别为５．４×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－１和２．３ ×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－１，略低于其亲本单抗Ｅ７Ｂ１０２．７ ×１０９／ｍｏｌ·Ｌ－１。

关键词：癌胚抗原单链抗体表达家蚕杆状病毒表达系统

呋喃它酮代谢物单链抗体制备和酶联免疫分析方法

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食品科学 2020年第24期41卷 251-258页

作者：杨武英王弘洪艳平王丹徐振林沈玉栋柯法钧陈薪竹孙远明南昌市农产品加工与质量控制重点实验室江西农业大学食品科学与工程学院江西南昌330045 广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院广东广州510642

从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链... 详细信息

从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链抗体基因,pET-22b(+)表达载体进行表达,Ni亲和柱进行纯化,制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体,采用棋盘滴定实验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度,建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价。结果表明:最佳包被抗原质量浓度和单链抗体稀释度分别为0.0625μg/mL和20倍;建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65μg/L,线性范围为2.90~53.28μg/L,检测限为1.48μg/L;除与原药呋喃它酮有交叉反应外,此单链抗体与其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1%,虾肉样品添加回收率为74.3%~86.6%;用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验,两种方法相关性良好(R^2=0.9992),说明建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查。

关键词：呋喃它酮呋喃它酮代谢物单链抗体间接竞争酶联免疫分析

抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合在昆虫细胞中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第6期32卷 669-671页

作者：杨卫东李彪朱承谟贺华君杨冠珍吴祥甫上海第二医科大学瑞金医院!上海200025 中国科学院上海生物化学研究所!上海200031

将抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合插入昆虫杆状病毒供体质粒 pFastBacHTa中 ,在粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞中进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,表达产物分子量为 4 1kD左右 ,Western印迹分析结果表明 ,以HRP标记的生物素进... 详细信息

将抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合插入昆虫杆状病毒供体质粒 pFastBacHTa中 ,在粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞中进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,表达产物分子量为 4 1kD左右 ,Western印迹分析结果表明 ,以HRP标记的生物素进行蛋白质印迹在 4 1kD处可见表达条带 ,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合 ,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达产生的ScFv CS蛋白能特异性结合癌胚抗原

关键词：癌胚抗原单链抗体核心链霉亲和素昆虫杆状病毒表达

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单链抗体技术及其在药用植物研究中的应用

中草药 2006年第7期37卷 I0005-I0007页

作者：马丽玲晁志田中宏幸广州医学院护理学院药检学科组广东广州510182 南方医科大学中医药学院广东广州510515 九州大学大学院药学研究院

抗原刺激动物免疫系统产生抗体,抗体识别抗原的部位在其重链和轻链的可变区(variable region)。如果将抗体的可变区(VH和VL)通过弹性多肽接头(peptide linker)稳定地连接在一起,即为单链抗体(single chain fragments variable,scFv)。s... 详细信息

抗原刺激动物免疫系统产生抗体,抗体识别抗原的部位在其重链和轻链的可变区(variable region)。如果将抗体的可变区(VH和VL)通过弹性多肽接头(peptide linker)稳定地连接在一起,即为单链抗体(single chain fragments variable,scFv)。scFv大小仅为完整抗体的1/6,但其完全保持了抗体的抗原特异性及抗原的结合能力,同时由于为单链,在大肠杆菌或植物体内等容易表达,无须组装即能保持活性。[第一段]

关键词：抗体技术单链抗体物研究药用抗原刺激 chain 抗原特异性免疫系统识别抗原 scFv

人源性抗结核分枝杆菌噬菌体展示单链抗体文库的构建

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中华结核和呼吸杂志 2008年第9期31卷 682-685页

作者：杨华周新刚拾莉冯永红秦莲花郑瑞娟王洁胡忠义同济大学附属上海市肺科医院上海市结核重点实验室 200433

目的构建人源抗结核分枝杆菌噬菌体展示单链抗体文库，为结核特异性单链抗体的筛选奠定基础。方法从抗结核分枝杆菌抗体阳性患者淋巴细胞中提取总RNA，逆转录成cDNA，PCR扩增获得抗体的重、轻链可变区基因，然后拼接装配成单链抗体基因... 详细信息

目的构建人源抗结核分枝杆菌噬菌体展示单链抗体文库，为结核特异性单链抗体的筛选奠定基础。方法从抗结核分枝杆菌抗体阳性患者淋巴细胞中提取总RNA，逆转录成cDNA，PCR扩增获得抗体的重、轻链可变区基因，然后拼接装配成单链抗体基因，重组于噬菌粒载体pCANTAB5S，转化大肠埃希菌*** TG1，以辅助噬菌体拯救后，构建人源性抗结核分枝杆菌噬菌体展示单链抗体库。结果成功构建人源性抗结核分枝杆菌噬菌体展示单链抗体文库，库容量达10^7。结论以结核患者淋巴细胞免疫球蛋白可变区基因片段和噬菌粒展示载体pCANTAB5S为基础，成功构建人源性抗结核分枝杆菌噬菌体展示单链抗体库，并达到建库标准，可进一步从中筛选获得结核特异性单链抗体。

关键词：分枝杆菌,结核噬菌体展示单链抗体文库

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单链抗体制备技术及应用的研究进展

细胞与分子免疫学杂志 2011年第10期27卷 1154-1156页

作者：霍萍萍张聪敏赵宝华河北师范大学生命科学学院河北石家庄050016

抗体是机体在抗原物质刺激下所形成的能与抗原特异性结合的一类血清活性成分,它可以识别和排除抗原性异物,对于维护体内的生理平衡和稳定起着至关重要的作用。随着免疫学技术研究的不断深入,杂交瘤单克隆抗体（mAb）技术于20世纪70年代... 详细信息

抗体是机体在抗原物质刺激下所形成的能与抗原特异性结合的一类血清活性成分,它可以识别和排除抗原性异物,对于维护体内的生理平衡和稳定起着至关重要的作用。随着免疫学技术研究的不断深入,杂交瘤单克隆抗体（mAb）技术于20世纪70年代问世,它的出现使人们大量生产特异性强、纯度高的抗体成为可能,

关键词：单链抗体研究进展应用

抗转铁蛋白受体单链抗体的可溶性表达及其对脑的靶向性研究

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生物工程学报 2004年第3期20卷 342-347页

作者：颜冰朱恒奇黄培堂军事医学科学院生物工程研究所北京100071

分段合成大鼠抗转铁蛋白受体单链抗体基因 (ox2 6_scFv) ,经三轮PCR拼接成 794bp的完整片段。测序后构建pTIG_Trx ox2 6_scFv表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得了可溶性表达 ,经Ni_NTA金属鏊合层析柱纯化 ,在2 9kD处可见单一条带。... 详细信息

分段合成大鼠抗转铁蛋白受体单链抗体基因 (ox2 6_scFv) ,经三轮PCR拼接成 794bp的完整片段。测序后构建pTIG_Trx ox2 6_scFv表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得了可溶性表达 ,经Ni_NTA金属鏊合层析柱纯化 ,在2 9kD处可见单一条带。大鼠GH3细胞免疫组化显示 ,该单链抗体能识别并与转铁蛋白受体结合。将单链抗体尾静脉注射大鼠 ,于鼠脑组织切片上可见阳性染色 ,尤其是脑血管处着色明显 ,说明该单链抗体对脑血管具有较好的靶向作用 ,并在受体的介导下通过了血脑屏障。

关键词：转铁蛋白受体单链抗体血脑屏障可溶性表达药物转运

抗对虾白斑综合症病毒单链抗体P1D3基因在毕赤酵母中的分泌表达

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生物工程学报 2006年第6期22卷 973-978页

作者：杨毅张敏袁丽张晓华戴和平中国科学院水生生物研究所中国科学院研究生院北京100039

为了将可中和对虾白斑综合症病毒(WSSV)的单链抗体P1D3在酵母中实现表达,以原核表达载体M13噬菌粒为模板,设计带有SnaBⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物,通过PCR方法扩增P1D3基因。经过酶切、连接反应将该基因连入大肠杆菌-酵母穿梭质粒p... 详细信息

为了将可中和对虾白斑综合症病毒(WSSV)的单链抗体P1D3在酵母中实现表达,以原核表达载体M13噬菌粒为模板,设计带有SnaBⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物,通过PCR方法扩增P1D3基因。经过酶切、连接反应将该基因连入大肠杆菌-酵母穿梭质粒pPIC9K上。重组质粒pPIC9K-scFvP1D3经BglⅡ线性化后,用电转化的方法转入毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中。通过PCR和DNA测序,挑选和鉴定阳性克隆。经甲醇诱导,P1D3在酵母中获得分泌表达。ELISA实验结果表明,酵母表达上清液中的单链抗体具有较高的WSSV结合活性,而且其活性要高于大肠杆菌所表达抗体的活性。表达条件优化后,单链抗体在酵母中最高表达量可达302mg/L,为开展对虾被动免疫研究提供了新的抗体来源。

关键词：毕赤酵母对虾白斑综合症病毒(wssv) 单链抗体分泌表达

抗人CD28单链抗体基因的构建及在BmN细胞和家蚕中的表达

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生物工程学报 2007年第4期23卷 577-583页

作者：朱艳郑峰丰陈永井邱玉华朱江苏州大学生命科学学院苏州215123 苏州大学医学生物技术研究所苏州215007

采用TP-PCR法,将抗人CD28单链抗体的重、轻链可变区基因和人工设计的昆虫杆状病毒多角体蛋白基因(ph)偏好的连接肽序列,拼接成抗人CD28单链抗体(抗CD28-ScFv)基因,并将其插入昆虫杆状病毒转移载体pBacPAK8的ph启动子,构建成重组转移载体... 详细信息

采用TP-PCR法,将抗人CD28单链抗体的重、轻链可变区基因和人工设计的昆虫杆状病毒多角体蛋白基因(ph)偏好的连接肽序列,拼接成抗人CD28单链抗体(抗CD28-ScFv)基因,并将其插入昆虫杆状病毒转移载体pBacPAK8的ph启动子,构建成重组转移载体pBacPAK8/CD28-ScFv。为便于表达产物的纯化,在CD28-ScFv的C端增加了6×Histag序列。通过脂质体介导法将重组转移载体pBacPAK8/CD28-ScFv和线性化病毒Bm-BacPAK6共转染BmN细胞,经空斑分析和蓝白斑筛选,获得重组杆状病毒Bm-BacPAK6 CD28-ScFv。将重组病毒Bm-BacPAK6 CD28-ScFv感染BmN细胞和5龄家蚕,SDS-PAGE和Western Blotting分析表明,在分子量约为28kD处有一表达带。BmN细胞的表达始于24h,表达峰在72h,96h时表达量开始下降,而5龄家蚕的表达始于48h,表达峰在120h。结果证明,抗人CD28单链抗体基因在BmN细胞和家蚕中得到了特异性表达。上述研究成果为抗人CD28基因工程抗体的研制奠定了基础。

关键词： CD28 单链抗体 BmN细胞家蚕真核表达