检索结果-南通市图书馆

抗呋喃唑酮代谢物单链抗体基因构建及蛋白结构分析和活性鉴定

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食品科学 2021年第24期42卷 67-73页

作者：陈薪竹王玉波王丹洪艳平杜华英戴棚邓炜杰熊建华杨武英江西农业大学食品科学与工程学院南昌市农产品加工与质量控制重点实验室江西南昌330045

从单克隆杂交瘤细胞出发,构建抗3-氨基-2-噁唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)衍生物单链抗体基因,并对其蛋白质进行理化性质分析及结构预测和活性鉴定。首先以呋喃唑酮代谢物AOZ衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞1D2为原料,提取总RNA后克... 详细信息

从单克隆杂交瘤细胞出发,构建抗3-氨基-2-噁唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)衍生物单链抗体基因,并对其蛋白质进行理化性质分析及结构预测和活性鉴定。首先以呋喃唑酮代谢物AOZ衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞1D2为原料,提取总RNA后克隆重链(V_(H))、轻链(V_(L))可变区基因,然后使用重叠延伸聚合酶链式反应技术用连接肽(G_(4)S)_(3)将V_(H)、V_(L)基因连接构建抗AOZ衍生物单链抗体基因,经测序后采用生物信息软件对抗体编码的氨基酸序列进行推导并展开生物信息学分析,再将此基因与Plip6/GN表达载体连接后进行表达并采用直接竞争酶联免疫分析法(direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay,dcELISA)鉴定其活性。结果表明:抗AOZ衍生物单链抗体基因全长750 bp,编码250个氨基酸,相对分子质量为27012.20,理论等电点为9.13,属于碱性氨基酸;其二级结构预测结果显示抗体蛋白含20处α-螺旋、25处β-转角、114处无规卷曲、91处延伸带结构;三级结构预测的正面俯视图显示重、轻链由连接肽相连形成一个“环桶状”结构,侧面显示为“口袋状”,这与常规单链抗体的结构特征一致,dcELISA结果也显示该抗体具有良好的抗原结合活性。本研究为后续AOZ残留检测免疫分析方法的建立及抗AOZ衍生物单链抗体的改造奠定一定基础。

关键词：呋喃唑酮 3-氨基-2-噁唑烷酮单链抗体结构预测和活性鉴定

单链抗体JZC00联合2-脱氧葡萄糖的抗肿瘤活性

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中国药科大学学报 2020年第2期51卷 206-212页

作者：高琪韩月许薇徐静静王旻张娟中国药科大学生命科学与技术学院抗体工程实验室南京211198

探讨单链抗体JZC00和糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)的联合用药对小鼠非小细胞肺癌细胞LLC、小鼠乳腺癌细胞4T1的抗肿瘤作用。利用大肠埃希菌表达并纯化单链抗体,用SDS-PAGE和Western blot法鉴定JZC00;MTT法分析JZC00/2... 详细信息

探讨单链抗体JZC00和糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)的联合用药对小鼠非小细胞肺癌细胞LLC、小鼠乳腺癌细胞4T1的抗肿瘤作用。利用大肠埃希菌表达并纯化单链抗体,用SDS-PAGE和Western blot法鉴定JZC00;MTT法分析JZC00/2-DG联用组对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用;葡萄糖和乳酸测定试剂盒测定培养基中葡萄糖和乳酸浓度,并计算肿瘤细胞葡萄糖摄取抑制率及乳酸释放抑制率;给药周期为15 d,给药同周期内测量肿瘤质量及体积。结果显示:经原核表达的JZC00相对分子质量正确,在体外能够抑制肿瘤细胞的增殖;JZC00及2-DG单独给药均能够抑制肿瘤细胞糖酵解,且JZC00/2-DG联合使用能够协同抑制糖酵解,当在体外模拟缺氧环境时JZC00抑制作用下降,加入2-DG后能够逆转其对糖酵解的抑制作用;两组体内模型显示与JZC00单药组相比,联合用药组抑瘤作用显著提高,2-DG能够提高抗血管生成抗体抑瘤效果,提示其联合在治疗实体瘤方面具有潜在价值。

关键词：单链抗体 2-脱氧葡萄糖糖酵解肿瘤

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单链抗体展示系统研究进展

生物工程学报 2023年第9期39卷 3681-3694页

作者：陈遥舒星富赵钰张博文马忠仁张海霞西北民族大学生物医学研究中心、生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

单链抗体(single chain antibody fragment,scFv)是由抗体重链可变区(variable region of heavy chain,VH)和轻链可变区(variable region of light chain,VL)通过柔性短肽连接组成的小分子,是具有完整抗原结合活性的最小功能片段,包含抗体识别及抗原结合部位。相比于其他抗体,scFv具有分子量小、穿透性强、免疫原性弱、易构建表达等优点。目前,scFv最常用的展示系统主要有噬菌体展示系统、核糖体展示系统、mRNA展示系统、酵母细胞表面展示系统和哺乳动物细胞展示系统等。近年来,随着scFv在医学、生物学、食品安全学等领域的发展,使得其在生物合成和应用研究方面备受关注。本文对近年来scFv展示系统的研究进展作一综述,以期为scFv的筛选及应用提供理论基础。

关键词：单链抗体基因工程抗体噬菌体展示系统核糖体展示系统

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单链抗体的制备及其在肿瘤诊疗中的应用

中国生物工程杂志 2023年第6期43卷 76-86页

作者：林鹏钱菁冯强雷琎江亚杨举伦昆明理工大学医学院昆明650500 中国人民解放军联勤保障部队第920医院病理科昆明650500 昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650032

单链抗体(single-chain fragment variable,scFv)是由可变重链(VH)和可变轻链(VL)通过柔性肽接头连接在一起的小分子重组抗体。从杂交瘤中分离单链抗体的mRNA,逆转录成cDNA作为单链抗体基因扩增的模板,可得到包含大量不同VH和VL片段的... 详细信息

单链抗体(single-chain fragment variable,scFv)是由可变重链(VH)和可变轻链(VL)通过柔性肽接头连接在一起的小分子重组抗体。从杂交瘤中分离单链抗体的mRNA,逆转录成cDNA作为单链抗体基因扩增的模板,可得到包含大量不同VH和VL片段的单链抗体的基因文库。利用展示技术完成单链抗体亲和力和特异性筛选及鉴定,得到的单链抗体可通过各种表达系统成功表达单链抗体的蛋白质。虽然单链抗体分子量小,但已包含了完整抗体的抗原结合域,对抗原具有高特异性、高亲和力及低免疫原性,还具有较好的肿瘤组织穿透和扩散能力。因此,单链抗体已成为肿瘤诊疗方法开发中的研究热点。详细介绍了单链抗体的制备方法和问题,重点阐述了单链抗体在肿瘤诊断和治疗中的研究进展,以期为单链抗体制备及其治疗和诊断肿瘤提供理论依据。

关键词：单链抗体重组抗体肿瘤诊断肿瘤治疗

T7启动子作用下抗人TNF-α单链抗体的表达

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生物化学与生物物理进展 1999年第5期26卷 502-503页

作者：陈萍邓健蓓陈梅红韩骅药立波苏成芝第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

基因工程技术构建的抗人ＴＮＦα单链抗体克隆入表达载体ｐＥＴ１５ｂＥｔａｇ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中获得高效表达，其表达量占菌体总蛋白的３８％... 详细信息

基因工程技术构建的抗人ＴＮＦα单链抗体克隆入表达载体ｐＥＴ１５ｂＥｔａｇ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中获得高效表达，其表达量占菌体总蛋白的３８％．表达产物大部分以包涵体形式存在，而一小部分以有活性的可溶性形式出现于细菌的外周质中．这部分可溶性的表达产物占菌体总蛋白的６％，

关键词：人肿瘤坏死因子_α 单链抗体高效表达

人源性rhG-CSF单链抗体基因的克隆和表达

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浙江大学学报（工学版） 2005年第5期39卷 756-760页

作者：石君帆钱凯先杜润潘浙江大学生命科学学院

从构建的噬菌体表面展示文库中,筛选出全新的人源抗重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)特异单链抗体(ScFv)的噬菌体克隆.ScFv被克隆到pCANTAB5E载体上,以***1为宿主,进行噬菌体表面呈现,以rhGCSF为靶抗原进行免疫亲和富集筛选,经酶联免... 详细信息

从构建的噬菌体表面展示文库中,筛选出全新的人源抗重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)特异单链抗体(ScFv)的噬菌体克隆.ScFv被克隆到pCANTAB5E载体上,以***1为宿主,进行噬菌体表面呈现,以rhGCSF为靶抗原进行免疫亲和富集筛选,经酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定,得到一株高亲和力克隆.DNA序列分析表明,该ScFv基因全长733bp,其中重链可变区(VH)为366bp,轻链可变区(VL)为322bp.抗rhG-CSF的ScFv在***2151中以可溶形式分泌表达,产物主要分布于周质中,占周质总蛋白的质量分数为20%～25%,经免疫印迹试验(Westernblot)分析显示该单链抗体黏均分子量为31kD.

关键词：单链抗体 G-CSF抗原克隆表达

单链抗体(ScFv)表达载体的构建及抗 HBs ScFv 的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 1997年第1期17卷 68-71页

作者：王琰刘群英高荣凯朱迎春化冰王雅明徐建军解放军海军总医院北京市肿瘤防治研究所北京医科大学肿瘤临床学院

通过ＤＮＡ重组技术和ＰＣＲ技术，将Ｆａｂ表达载体改建成了ＳｃＦｖ表达载体。该载体可以表面表达方式产生噬菌体抗体，用于抗体库技术，也可以分泌型表达产生有活性的ＳｃＦｖ。所表达的抗ＨＢｓＳｃＦｖ具有与其亲本Ｆａｂ相同的抗... 详细信息

通过ＤＮＡ重组技术和ＰＣＲ技术，将Ｆａｂ表达载体改建成了ＳｃＦｖ表达载体。该载体可以表面表达方式产生噬菌体抗体，用于抗体库技术，也可以分泌型表达产生有活性的ＳｃＦｖ。所表达的抗ＨＢｓＳｃＦｖ具有与其亲本Ｆａｂ相同的抗体活性。载体上具有聚组氨酸编码序列，使表达的ＳｃＦｖ可经金属螯合层析法进行简便有效的纯化。

关键词：乙型肝炎表面抗原单链抗体基因表达载体构建

二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性

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高等学校化学学报 2012年第10期33卷 2269-2274页

作者：周丽君黄启欣雷红涛王欲晓王强徐振林王弘孙远明解放军海军总医院中心实验科北京100048 广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院广州510640

从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3MH中,构建成噬菌体单链抗体... 详细信息

从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3MH中,构建成噬菌体单链抗体表达载体,转化大肠杆菌表达出噬菌体表面展示scFv,对经过Phage-ELISA鉴定的阳性克隆进行噬菌体外壳蛋白基因geneⅢ的去除,用IPTG诱导其可溶性表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western-Blot及ELISA鉴定,并与亲本MAb进行性能对比.结果表明,可溶性表达的scFv分子量为27000;scFv与DPPs的交叉反应率比其亲本MAb提高了1.3～3.5倍,表明其广谱特异性有所提高.由于scFv与MAb相比具有诸多优点,因此本研究为有机磷农药多残留检测方法的建立提供了一种更广谱、更灵敏的新型识别分子.

关键词：二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体噬菌体展示广谱特异性

基于定点突变的抗克百威单链抗体的亲和力成熟

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高等学校化学学报 2012年第11期33卷 2486-2491页

作者：邓龙肖治理董洁娴王弘杨武英谢曦杨金易沈玉栋孙远明广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品质量与安全研究所广州510642

为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv),从抗CBF scFv氨基酸序列出发,通过同源模建获得抗体模型,找出抗体中的活性口袋区域,进而将小分子药物与抗体进行分子对接,发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用.进一步对口袋... 详细信息

为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv),从抗CBF scFv氨基酸序列出发,通过同源模建获得抗体模型,找出抗体中的活性口袋区域,进而将小分子药物与抗体进行分子对接,发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用.进一步对口袋内亲水氨基酸残基HArg40和LHis38进行模拟替换,再进行分子对接分析,发现当以亮氨酸为突变氨基酸时,对接评分最高.在此基础上,通过构建突变scFv基因及可溶性表达,采用ELISA法对进化后的单链抗体(evoscFv)进行了鉴定.结果表明,evoscFv对CBF的IC50值为18.11μg/L,低于野生型抗体的27.25μg/L,亲和解离常数Kd为4.06×10-8mol/L,相对亲和力比野生型scFv提高了2.23倍,说明通过分子对接分析及对抗体活性口袋中氨基酸残基进行替换,获得了一个亲和力更高的突变体抗体.

关键词：克百威单链抗体分子对接定点突变亲和力成熟