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大鼠脑室下区神经干细胞的分离培养与分化

解剖学研究 2005年第3期27卷 194-196页

作者：刘平戴冀斌湖北荆门职业技术学院基础医学部解剖学教研室荆门448000 武汉大学医学院解剖学教研室

目的从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞,观察其生长、增殖及分化。方法采取无血清培养和单细胞克隆技术,采用原代贴壁及传代悬浮方法,培养获得细胞克隆。利用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞。结果从新生SD大鼠脑室下区分离的组... 详细信息

目的从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞,观察其生长、增殖及分化。方法采取无血清培养和单细胞克隆技术,采用原代贴壁及传代悬浮方法,培养获得细胞克隆。利用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞。结果从新生SD大鼠脑室下区分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,且具有增殖能力。原代和传代细胞巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗原呈阳性。神经干细胞可分化为神经元。结论用上述方法分离的细胞具有自我更新能力和分化潜能以及很强的增殖能力,属于中枢神经系统的干细胞。

关键词：神经干细胞细胞培养分离分化新生SD大鼠分离培养分化潜能脑室下区神经元特异性烯醇化酶(NSE) 单细胞克隆技术

EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞定向分化的调控

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中华神经医学杂志 2005年第6期4卷 556-559页

作者：姬西团章翔费舟张剑宁刘卫平蒋晓帆林绿标王西玲曹锐峰潘灏第四军医大学西京医院神经外科全军神经外科研究所西安710032

目的观察EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法用无血清培养与单细胞克隆技术对小鼠胚胎脑组织进行分离、培养,随后分别加入EGF、bFGF、NGF、RA等因子观察其对NSCs定向分化的影响。结果EGF培养的小鼠NSC... 详细信息

目的观察EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法用无血清培养与单细胞克隆技术对小鼠胚胎脑组织进行分离、培养,随后分别加入EGF、bFGF、NGF、RA等因子观察其对NSCs定向分化的影响。结果EGF培养的小鼠NSCs,2d后见细胞集落形成(典型克隆球);克隆球中的细胞成圆形,形态规则,未见细胞突起,呈桑椹状聚集;经血清诱导分化后,则主要为星形胶质细胞,仅有个别的神经元。而bFGF培养的NSCs,生长良好,但克隆球数目较EGF组少,克隆球体积略小。3bFGF与EGF共同培养的NSCs,除诱导分化后,分化的细胞性质与EGF组的不同外,其余同EGF组。NGF对神经球的形成无明显的影响。RA组的克隆球数目量很少,形态以球形为主,部分细胞贴壁并出现突起。结论EGF,bFGF对NSCs的增殖及分化种类均有一定的影响。而NGF与RA则主要影响其细胞的分化,且两者的共同点都是促使其向神经元方向分化。

关键词： bFGF EGF NGF 细胞定向分化 RA 小鼠神经干单细胞克隆技术 NSCs 调控细胞集落形成星形胶质细胞诱导分化胚胎脑组织无血清培养克隆球增殖及分化细胞突起共同培养细胞性质细胞贴壁神经元桑椹状神经球形态

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人胚神经干细胞分离培养与鉴定方法

华北国防医药 2004年第2期16卷 80-82,F003页

作者：赵荣山李秀芹郝京生董玉环赵亚朴王本旭北京军区联勤部军事医学研究所微生物检验科石家庄050081 白求恩军医学院病原教研室石家庄050081

目的 :建立神经干细胞 (NSCs)实验室分离、培养方法 ,为NSCs移植提供细胞源。方法 :取 4月龄 (± 15天 )正常孕妇水囊引产胎儿大脑纹状体区组织分离神经干细胞 ,培养于含碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和B2 7的无血清培养基 ;同时利用... 详细信息

目的 :建立神经干细胞 (NSCs)实验室分离、培养方法 ,为NSCs移植提供细胞源。方法 :取 4月龄 (± 15天 )正常孕妇水囊引产胎儿大脑纹状体区组织分离神经干细胞 ,培养于含碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和B2 7的无血清培养基 ;同时利用单细胞克隆技术进行连续传代培养 ;利用形态学观察和免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白Nestin抗原的表达来鉴定神经干细胞。结果 :体外培养的干细胞在bFGF和B2 7培养基中可不断增殖形成细胞球 ,并出现少量细胞分化。单细胞培养 4天即开始分裂 ,同时伴有个别细胞分化 ;出现大量神经球一般为 15天 ;分化的细胞在 3 0天开始分解 ,5 0天左右基本消失。细胞培养 3个月 (每月补液 1次 )仍具有分裂增殖能力。单细胞克隆可连续传代 10次 ,仍具增殖分化能力。液氮冻存 6个月的细胞复苏后仍具增殖分化能力。单细胞克隆传代增殖的细胞球经Nestin免疫荧光鉴定 ,呈阳性结果 ,证实其胚胎源性。结论 :采用bFGF和B2 7的无血清培养基能促进神经干细胞连续稳定增殖 ,并有少量分化 ,细胞体外培养 3个月、克隆连续传代

关键词：神经干细胞细胞分离细胞培养鉴定胚胎单细胞克隆技术

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大鼠脑室下区神经干细胞的分离培养与分化

荆门职业技术学院学报 2004年第6期19卷 68-71页

作者：刘平戴冀斌荆门职业技术学院基础医学部解剖学教研室湖北荆门448000 武汉大学医学院解剖学教研室湖北武汉430071

　目的:从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞,观察其生长、增殖及分化.方法:采取无血清培养和单细胞克隆技术,采用原代贴壁及传代悬浮方法,培养获得细胞克隆.利用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞.结果:从新生SD大鼠脑室下区分离... 详细信息

　目的:从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞,观察其生长、增殖及分化.方法:采取无血清培养和单细胞克隆技术,采用原代贴壁及传代悬浮方法,培养获得细胞克隆.利用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞.结果:从新生SD大鼠脑室下区分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,且具有增殖能力.原代和传代细胞巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(Neuronspecificenolase,NSE)抗原呈阳性.神经干细胞可分化为神经元.结论:用上述方法分离的细胞具有自我更新能力和分化潜能以及很强的增殖能力,属于中枢神经系统的干细胞.

关键词：神经干细胞脑室下区 SD大鼠增殖能力新生分化潜能神经元特异性烯醇化酶单细胞克隆技术传代培养自我更新能力

切割海马伞海马对神经干细胞的存活、迁移和分化的影响

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交通医学 2003年第5期17卷 591-591页

作者：张新化金国华田美玲黄镇秦建兵徐慧君南通医学院神经生物学研究室江苏省神经再生重点实验室江苏226001

目的 :观察成鼠神经干细胞 (NSCs)移植入切割海马伞侧和正常侧海马后存活、迁移和分化的情况 ,以及切割海马伞提取液对神经干细胞分化为神经元的促进作用。方法 :用无血清培养和单细胞克隆技术获得成年SD大鼠前脑室下区NSCs ,BrdU标记... 详细信息

目的 :观察成鼠神经干细胞 (NSCs)移植入切割海马伞侧和正常侧海马后存活、迁移和分化的情况 ,以及切割海马伞提取液对神经干细胞分化为神经元的促进作用。方法 :用无血清培养和单细胞克隆技术获得成年SD大鼠前脑室下区NSCs ,BrdU标记扩增。切割SD大鼠右侧海马伞 ,术后 2周将标有BrdU的NSCs植入双侧海马齿状回。术后不同时期行Nissl染色、BrdU免疫荧光、β -tubulin -Ⅲ /BrdU免疫组化双重染色和AChE组化染色。同时在体外将NSCs种植于 2 4孔培养板中 ,分成三组 :切割组和正常组分别加入切割海马伞侧和正常侧海马提取液。结果 :各时期移植区中均有大量BrdU阳性细胞 ;BrdU阳性细胞沿海马齿状回颗粒下层迁移 ,并在颗粒下层内形成迁移条带 ;各时期切割侧齿状回中BrdU阳性细胞密度大于正常侧 ;切割侧齿状回中较正常侧有较多Nissl深染大胞体神经元样细胞 ,而正常侧多为小胞体胶质样细胞 ;切割侧海马齿状回见数个 β -tubulin -Ⅲ /BrdU双标神经元和AChE阳性神经元。与正常组相比 ,切割组MAP -2和AChE阳性神经元数量多、分化好。结论 :移植到海马中的NSCs能存活、迁移并分化为神经元。

关键词：海马伞海马神经干细胞细胞迁移细胞分化无血清培养单细胞克隆技术神经元

人胎脑组织神经干细胞的分离培养、克隆和分化

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交通医学 2003年第5期17卷 592-592页

作者：田美玲金国华谭雪锋秦建兵徐慧君南通医学院神经生物学研究室江苏省神经再生重点实验室江苏226001

目的 :从人胚胎脑组织中分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞 ,并在体外大量扩增。方法 :利用无血清培养技术和单细胞克隆技术从 4月龄人胚脑皮层和中脑中分离培养出神经干细胞 ,加入BrdU让其扩增 ,待形成大量神经干细胞球后 ,... 详细信息

目的 :从人胚胎脑组织中分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞 ,并在体外大量扩增。方法 :利用无血清培养技术和单细胞克隆技术从 4月龄人胚脑皮层和中脑中分离培养出神经干细胞 ,加入BrdU让其扩增 ,待形成大量神经干细胞球后 ,部分克隆球进行Nestin和BrdU的免疫荧光标记 ,另一部分神经干细胞球接种于含血清的培养基中让其贴壁分化 ,2周后分别行MAP -2、GFAP和CNP免疫荧光检测。结果 :神经干细胞球Nestin和BrdU免疫荧光检测均呈阳性。神经干细胞球分化后的细胞呈MAP-2、GFAP和CNP阳性。结论 :人胚脑组织中分离得到的神经干细胞具有自我更新和增殖能力 ,并具有分化为神经元。

关键词：胎脑组织神经干细胞细胞分离细胞培养克隆细胞分化无血清培养技术单细胞克隆技术

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人神经干细胞向多巴胺神经元的定向分化

交通医学 2003年第5期17卷 590-590页

作者：谭雪锋金国华田美玲秦建兵徐慧君南通医学院神经生物学研究室江苏省神经再生重点实验室江苏226001

目的 :将体外扩增的神经干细胞在体外诱导向多巴胺能神经元分化 ,为帕金森氏病的细胞移植治疗奠定基础。方法 :利用无血清培养和单细胞克隆技术从 4月龄胚胎中脑组织获得神经干细胞 ,用 10 %胎牛血清 (FBS)、IL -1α以及IL -1α +IL -11... 详细信息

目的 :将体外扩增的神经干细胞在体外诱导向多巴胺能神经元分化 ,为帕金森氏病的细胞移植治疗奠定基础。方法 :利用无血清培养和单细胞克隆技术从 4月龄胚胎中脑组织获得神经干细胞 ,用 10 %胎牛血清 (FBS)、IL -1α以及IL -1α +IL -11+LIF+GDNF的组合诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化 ,用酪氨酸羟化酶 (TH)免疫检测分化为多巴胺神经元的情况。结果 :10 %FBS只能使极少数神经干细胞分化为TH阳性的多巴胺神经元 ;IL -1α可以诱导神经干细胞较多地分化为TH阳性多巴胺神经元 ,但细胞形态上不成熟 ;联合应用IL -1α、IL -11、LIF、GDNF后 ,分化的多巴胺神经元数量上和单用IL -1α相似 ,但细胞形态上比较成熟。结论 :联合应用IL -1α、IL -11、LIF、GDNF等细胞因子诱导人神经干细胞分化得到的TH阳性多巴胺神经元不但数量较多。

关键词：神经干细胞多巴胺神经元定向分化 IL-lα 细胞形态细胞因子无血清培养单细胞克隆技术