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同济医科大学学报 1992年第1期21卷 13-16页

作者：王进堂张祜曾王健本同济医科大学基础医学部解剖学教研室

用酶组化、免疫组化和辣根过氧化物酶(HRP)追踪法探讨大鼠脊神经节内硫胺素单磷酸酶(TMPase)和P物质(SP)的定位关系,胃幽门部是否接受TMPase阳性神经支配.在C5～8脊神经节内,一些小型神经元有TMPase活性,SP阳性神经元主要为小型,绝大多... 详细信息

用酶组化、免疫组化和辣根过氧化物酶(HRP)追踪法探讨大鼠脊神经节内硫胺素单磷酸酶(TMPase)和P物质(SP)的定位关系,胃幽门部是否接受TMPase阳性神经支配.在C5～8脊神经节内,一些小型神经元有TMPase活性,SP阳性神经元主要为小型,绝大多数TMPase阳性神经元不具有SP-IR;另有一部分小型神经元既无TMPase活性,又无SP-IR。将CB-HRP注于幽门部,在双侧T_6～L_1脊神经节见少量HRP标记细胞,约4％HRP标记细胞为TMPase阳性。

关键词：硫胺素单磷酸酶 P物质脊神经节

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大鼠皮肤的硫胺素单磷酸酶阳性神经支配

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广东解剖学通报 1992年第2期14卷 113-116页

作者：王进堂高秀来李楠首都医学院人体解剖学教研室

本实验用酶组织化学和辣根过氧化物酶(HRP)追踪技术证实:1.硫胺素单磷酸酶(TMPase)阳性神经未梢见于鼠爪掌皮肤,多位于真皮深部,成束地或单个游离地散在于汗腺之间的结缔组织。它们纤细、呈棕黑色,其表面串珠样膨体清晰可辩,与无髓C类... 详细信息

本实验用酶组织化学和辣根过氧化物酶(HRP)追踪技术证实:1.硫胺素单磷酸酶(TMPase)阳性神经未梢见于鼠爪掌皮肤,多位于真皮深部,成束地或单个游离地散在于汗腺之间的结缔组织。它们纤细、呈棕黑色,其表面串珠样膨体清晰可辩,与无髓C类纤维相似。另有部分纤维无TMPase活性。在表皮未见到阳性未梢。***肋间神经注射后,在后根节有散在的HRP标记细胞,以中小型细胞为主,大型细胞少见。仅有少数中小型标记细胞具有TMPase活性,有的小于20μ。结果表明:爪掌皮肤含TMPase阳性纤维,胸部皮肤具有TMPase阳性神经支配,提示TMPase可能是皮肤神经内一种新的化学成分,与皮肤的某一感觉形式有关。

关键词：硫胺素单磷酸酶肋间神经皮肤

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酶法由葡萄糖合成肌醇技术的研究

酶法由葡萄糖合成肌醇技术的研究

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作者：鹿依萍大连理工大学

学位级别：硕士

肌醇又称环己六醇,具有多元羟基结构,广泛分布在植物、动物及微生物中,是多种细胞生命活动必需的物质,参与人体的新陈代谢,因此肌醇的高效生产对其在医药、食品、化妆品以及饲料等领域具有重要意义。目前肌醇的生产方法有水解法、酶法... 详细信息

肌醇又称环己六醇,具有多元羟基结构,广泛分布在植物、动物及微生物中,是多种细胞生命活动必需的物质,参与人体的新陈代谢,因此肌醇的高效生产对其在医药、食品、化妆品以及饲料等领域具有重要意义。目前肌醇的生产方法有水解法、酶法、化学合成法以及离子交换法等。其中水解法是肌醇最主要的生产方法,主要是以米糠、玉米糠等为原材料,从中提取。但是该法步骤繁琐,原料利用率低,对设备要求严格等,导致肌醇的成本一直居高不下。而酶法合成肌醇具有高效,环保和节约资源等优点,越来越受到广泛关注。因此,本研究构建了一套通过酶法高效廉价生产肌醇的方法。首先,在大肠杆菌中克隆表达了三种不同来源的多聚磷酸葡萄糖激酶(polyphosphste glucokinase,PPGK)、五种不同来源的磷酸-1-肌醇合成酶(inositol-1-phosphate synthase,IPS)和两种不同来源的肌醇单磷酸酶(inositol monophosphatase,IMP),通过酶表达条件优化以及高密度发酵等方法建立了大肠杆菌的高效表达系统,快速的获得相关酶。同时利用实验室已有的大肠杆菌高效表达平台的质粒筛选系统,筛选有利于蛋白表达的质粒,实现了多聚磷酸葡萄糖激酶,磷酸-1-肌醇合成酶和肌醇单磷酸酶的高效表达。然后,通过对酶的纯化以及酶活检测,得到活性最高的酶,并且对酶的性质进行检测,从而确立了肌醇的生产条件,即pH为7.0,温度为37℃,并对AspPPGK酶,TbIPS酶与EcIMP酶的用量进行了摸索,确定了酶的最佳反应用量及比例,即当葡萄糖底物浓度为100 m M时,AspPPGK的酶量在5-10 U/mL,TbIPS的酶量为60-75 U/mL,EcIMP酶的用量为100 U/mL。并在此优化条件下进行了肌醇的生产,提高了肌醇的转化率,缩短了生产时间。但是在最优条件下进行反应,却发现随着底物浓度的增加,肌醇的转化率降低。通过对两种底物(葡萄糖与聚磷酸钠)的抑制作用进行实验探究,发现葡萄糖对肌醇的生成没有影响,而聚磷酸钠由于具有特殊的结构,对磷酸-1-肌醇合成酶具有抑制作用,从而降低了肌醇的转化率。为了消除聚磷酸钠的抑制影响,本研究采用两步法合成肌醇,最终通过反应条件优化,实现了由葡萄糖到肌醇90%的转化率,从而建立了高效酶法转化生产肌醇的技术。因此,本研究通过三种酶的催化作用,优化了酶反应条件及酶用量,以葡萄糖为底物,高效的转化成肌醇,为酶法生产肌醇提供了新的思路及研究依据。

关键词：肌醇多聚磷酸葡萄糖激酶单磷酸酶三酶级联反应磷酸-1-肌醇合成酶

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