检索结果-南通市图书馆

作者：江翊国苏州大学

学位级别：硕士

目的： 1、本文通过对PD-L110个基因多态性位点的研究，探讨PD-L1基因多态性与中国汉族人群再生障碍性贫血的易感相关性以及寻求PD-L1的可能功能性位点。 2、通过对再障患者外周血清中sPD-L1水平的测定，初步探讨sPD-L1在再障中的表达... 详细信息

目的： 1、本文通过对PD-L110个基因多态性位点的研究，探讨PD-L1基因多态性与中国汉族人群再生障碍性贫血的易感相关性以及寻求PD-L1的可能功能性位点。 2、通过对再障患者外周血清中sPD-L1水平的测定，初步探讨sPD-L1在再障中的表达意义。方法： 1、应用RFLP-PCR方法和AS-PCR方法对PD-L1主要10个基因多态性位点在200例再障患者和200例健康人中的基因型分布及等位基因频率进行检测。 2、应用特异性检测人sPD-L1的ELISA试剂盒测定了不同再障患者及健康人血清中sPD-L1的表达水平。比较了rs822336多态性位点不同基因型患者sPD-L1表达水平的差异情况;同时应用人sPD-1的ELISA试剂盒测定了再障患者sPD-1水平，并比较了sPD-L1和sPD-1表达水平的相关性。结果： 1、PD-L110个基因多态性位点中，位于启动子区的rs822336位点的三种基因型CC/CG/GG在再障病例组和健康对照组中分布分别为9.05%,47.74%,43.22%和9.28%,34.02%,56.7%。C型、G型等位基因频率在再障病例组和健康对照组中分别为32.91%,67.09%和26.29%,73.71%。其基因型分布及等位基因频率在再障患者组和健康对照组中呈显著性差异（P0.05）。其他9个多态性位点基因型分布及等位基因频率在病例组和对照组之间未见显著性差异。 2、慢性再障(CAA)患者外周血清中的sPD-L1水平(45.9044±5.8506pg/ml)要明显高于健康对照组的水平(34.9054±1.3432)，重症再障(SAA)的表达水平(49.1030±8.2572pg/ml)较之慢性再障(CAA)更高。无论健康对照组还是再障患者组，rs822336多态性位点的三种基因型个体间sPD-L1水平并无显著差异。再障患者外周血清的sPD-L1水平和sPD-1水平表达呈显著正相关。结论： 1、本研究首次发现了PD-L1基因多态性与再障的相关性。再障患者存在遗传学背景，即先天的免疫缺陷。PD-L1rs822336为再障易感基因位点之一，携带C等位基因的个体再障的患病风险加大。位于启动区的rs822336多态变化可能会影响PD-L1的转录水平，进而影响再障患者中PD-L1正常的免疫调控作用。 2、对再障患者血清sPD-L1测定国内外未见报道，本研究发现了再障患者外周血清的sPD-L1呈高水平表达。提示：PD-L1可能参与了再障免疫异常的发生、发展过程。sPD-L1水平可能是各种不同型再障疾病的免疫异常指标，一定程度能反应再障疾病的严重程度。sPD-L1是来自基因多态性造成的选择性剪切，还是由蛋白水解酶裂解产生有待进一步研究。本研究表明再障患者外周血清sPD-L1水平和sPD-1水平呈显著正相关，表明这些可溶性共刺激分子在自身免疫性疾病的免疫应答中的作用可能更为复杂。 3、再障是一种具有遗传性的，在T细胞免疫多个环节存在先天基因缺陷因素的一种自身免疫性疾病。负性共刺激分子PD-L1可能通过其膜性和可溶性分子形式之间的水平变化在再障免疫异常发病过程中起到重要的作用。

关键词：再障(AA) PD-L1 单核苷酸多态性（snp） sPD-L1

连接—滚环扩增反应结合RNA FRET探针检测单核苷酸多态性

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连接—滚环扩增反应结合RNA FRET探针检测单核苷酸多态性

作者：周浩贤陕西师范大学

学位级别：硕士

DNA单核苷酸多态性（snp）是基因突变最常见的形式,snp的高灵敏度、高选择性分析方法对基因研究、遗传性疾病诊断和个体化用药等方面有着至关重要的作用。snp的分析要求分析方法能高特异性识别DNA序列中单个碱基的差别,基于锁式探针（pa... 详细信息

DNA单核苷酸多态性（snp）是基因突变最常见的形式,snp的高灵敏度、高选择性分析方法对基因研究、遗传性疾病诊断和个体化用药等方面有着至关重要的作用。snp的分析要求分析方法能高特异性识别DNA序列中单个碱基的差别,基于锁式探针（padlock probe）连接成环的滚环扩增（RCA）技术,由于其对单碱基差别的特异性识别能力及普遍适用性,被广泛用于snp分析。但基于RCA的分析方法,缺乏简便、灵敏的检测技术;此外,锁式探针的连接成环需要单链DNA作为模板,从双链基因组DNA制备单链DNA模板需要复杂的实验过程,因此限制了基于RCA分析方法的广泛应用。在本论文中,我们发明了一种基于荧光共振能量转移的RNA探针（RNA FRET探针）,能够实时、简便地在均相溶液中高灵敏检测RCA产物;同时我们基于热循环的连接反应,实现了应用双链DNA为模板直接连接锁式探针成环。设计的RNA FRET探针由14个核糖核苷酸组成,其5’末端标记荧光基团FAM,3’末端标记猝灭基团BHQ1,在完整的情况下,RNA FRET探针荧光基团的荧光会被猝灭基团猝灭。RNA FRET探针的序列与锁式探针上其中一段碱基序列一致,因此它能与RCA的扩增产物互补杂交。RNA FRET探针和RCA扩增产物杂交所形成的RNA/DNA杂合体,能激活RNase H来水解杂合体中的RNA FRET探针。被水解了的RNA FRET探针由于荧光基团远离猝灭基团而使荧光恢复,并且由于热不稳定性其破碎片段将离开RCA产物,在RCA产物相同位置上将有新的RNA FRET探针继续与之杂交,接着RNA FRET探针再被RNase H水解,如此反复进行使得荧光信号极大增强。基于酶催化反应的信号放大机制,使我们的检测限能达到fM浓度水平。另一方面,我们将热稳定性的DNA连接酶应用于以热循环连接的模式进行锁式探针连接反应,双链的DNA分子即可直接作为连接锁式探针成环的模板。而且,锁式探针的环化连接可以随着循环数的增加而增加,提高了检测灵敏度。最后,我们将连接酶链式反应（LCR）与RCA相结合,首先对DNA目标分子进行LCR指数扩增,利用LCR产物作为连接锁式探针的模板,用RNA FRET探针实时检测RCA产物。该方法能检测浓度低至10 aM的DNA目标分子,对检测snp具有很好的选择性。我们发展的RNA FRET探针及基于热循环连接锁式探针成环的方法,简化了RCA的检测步骤,大大提高了基于RCA分析方法的灵敏度。由于RCA广泛应用于各类基因标志物的分析,如microRNA, mRNA,DNA甲基化等,因此我们所发展的分析方法为各类基因标志物的简便、高灵敏度分析提供了一种新思路。

关键词：滚环扩增反应（RCA）单核苷酸多态性（snp） RNase H 荧光共振能量转移（FRET）

PD-L1基因3’-UTR内miRNA结合位点上的单核苷酸多态性与非小细胞肺癌相关性研究

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PD-L1基因3’-UTR内miRNA结合位点上的单核苷酸多态性与非小细胞...

作者：杜雯雯苏州大学

学位级别：硕士

目的:肺癌是全世界范围内严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。其中,非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）约占85%。肺癌的发生发展涉及到多种因素包括大气污染、吸烟等环境暴露因素和基因遗传变异等。除了环境暴露因素外,基... 详细信息

目的:肺癌是全世界范围内严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。其中,非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）约占85%。肺癌的发生发展涉及到多种因素包括大气污染、吸烟等环境暴露因素和基因遗传变异等。除了环境暴露因素外,基因多态性也是引起个体对肺癌的遗传易感性差异的重要原因。在肿瘤的发生和清除过程中,T细胞介导的免疫应答起着关键作用。PD-L1（programmed death-1 ligand,PD-L1）,是T细胞表面最具代表性的负性协同信号分子。可以通过抑制T细胞的增值,诱导T细胞的凋亡等多种途径介导肿瘤的免疫逃逸。本研究探讨PD-L1基因3’-非编码区（3’-untranslated regions,3’-UTR）内的三个单核苷酸多态性位点（single necleiotide polymorphisms,snp）与NSCLC发生风险的相关性,为NSCLC的早期诊断和治疗提供新的生物学标志物。方法:采用病例-对照法,收集了苏州大学附属第一医院320例肺癌患者和199例健康对照者外周血样本。运用生物信息学方法筛选出PD-L1基因3’-UTR上在microRNA结合位点内,且较小等位基因频率（Minor Allele Frequency,MAF）大于10%的snp位点进行研究。采用等位基因特异性扩增法（Allele-specific oligonucleotide polymerase chain reaction,ASA-PCR）检测样本中PD-L1基因3’-UTR内的单核苷酸多态性基因型分布,并统计分析基因型与NSCLC发生及患者病理参数的相关性。在筛选出与NSCLC发生有明显相关性的snp位点后,采用双荧光素酶报告系统分析snp位点对microRNA作用的影响。结果:（1）PD-L1基因3’-UTR上存在三个snp rs2297136、rs4143815、rs4742098位于miRNA的结合位点上。统计分析发现rs2297136位点肺癌病例组中AA、GG、AG基因型频率分别为25.9%、70.6%、3.5%,在对照组中分别为42.2%、50.2%、7.5%。与AA基因型相比,AG基因型与G等位基因的携带者显著增加了NSCLC的患病风险（OR=2.287,95%CI=1.558-3.358;OR=2.086,95%CI=1.432-3.039）。rs4143815位点上肺癌病例组中CC、GG、GC基因型频率分别为38.4%、16.3%、45.3%,在对照组中分别为37.8%、20.7%、41.5%。rs4143815与肺癌发生无显著相关性（p=0.439）。rs4742098位点上肺癌病例组中,AA、GG、AG基因型频率分别为20.9%、20.0%、59.1%,在对照组中分别为25.6%、29.2%、45.2%。AG基因型携带者患NSCLC的危险性更高（OR=1.599,95%CI=1.027-2.488）。（2）肺癌临床病理参数关联分析结果提示在snp位点rs2297136中,与AA基因型相比,基因型GG与淋巴结转移、远处转移显著相关（p=0.049,p=0.035）。snp位点rs4143815与肺癌的临床病理参数之间无统计学意义。在snp位点rs4742098中,与基因型AA相比,AG基因型、GG基因型及G等位基因的携带者均与肺癌的浸润深度显著相关（p=0.009,p=0.006,p=0.003）。（3）双荧光素酶报告系统结果提示snps可以影响miRNA与PD-L1基因3’-UTR的结合从而影响PD-L1的表达。miR-296-5p通过与PD-L1靶基因rs2297136位点G等位基因的结合抑制了萤火虫荧光素酶的表达（p＜0.05）,而对A等位基因无明显的抑制作用。miR-138通过与PD-L1靶基因rs4742098位点A等位基因的结合抑制了萤火虫荧光素酶的表达（p＜0.05）,而对G等位基因无明显的抑制作用。结论:PD-L1基因3’-UTR上的snp位点rs2297136、rs4742098与非小细胞肺癌发生的风险性相关,并且与NSCLC的临床病理参数显著相关,同时可以通过影响miRNA与PD-L1基因的结合从而影响其表达,提示其可能参与了肿瘤的发生发展。

关键词：非小细胞肺癌（NSCLC） PD-L1基因单核苷酸多态性（snp）微小RNA（miRNA）

黄牛KLF7基因单核苷酸多态性及其与生长性状关联分析

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黄牛KLF7基因单核苷酸多态性及其与生长性状关联分析

ARL15基因单核苷酸多态性(snps)与2型糖尿病研究现状

中国畜牧兽医学会第七届养牛学分会2009年学术研讨会

作者：马亮蓝贤勇淮永涛王辰王景雷初朝王巨强陈宏西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室河南省肉牛工程技术研究中心徐州师范大学细胞与分子生物学研究所

KLF7基因编码Krupple-like 7,据报道其单核苷酸多态性(snps)与日本人的二型糖尿病有关,在丹麦人群体中与抑制肥胖有关。因此,它在可能能量代谢中具有潜在的作用,进而影响动物生长发育。本研究利用测序和人工创造限制性酶切位点(ACRS)-PC... 详细信息

KLF7基因编码Krupple-like 7,据报道其单核苷酸多态性(snps)与日本人的二型糖尿病有关,在丹麦人群体中与抑制肥胖有关。因此,它在可能能量代谢中具有潜在的作用,进而影响动物生长发育。本研究利用测序和人工创造限制性酶切位点(ACRS)-PCR-RFLP的方法在秦川牛、南阳牛、郏县红牛和中国荷斯坦奶牛共计1002头牛中揭示了位于KLF7基因第二外显子及其侧翼区的3个snps:NC07300:g.41401C>T,42025T>C和42075A>G。其中发现了一个同义突变:苯丙氨酸/苯丙氨酸(F54F,C41401T)。有趣的是在同时引入三个TaqI酶切位点后这三个单核苷多态性可以同时被酶切和检测。在三个位点中,只有中国荷斯坦奶牛在C41401T位点偏离哈代温伯格平衡状态。连锁不平衡分析发现C41401T和T42025C在郏县红牛中强连锁,T42025C和A42075G在秦川牛、南阳牛和中国荷斯坦奶牛中强连锁(r>0.33)。群体遗传指数分析发现中国荷斯坦奶牛纯合度在C41401T位点达到1并只有1个有效等位基因。χ检验显示在P1、P2和P3位点基因型分布有显著差异,暗示这些多态性与牛品种显著相关(P<0.001)。关联分析发现在6月龄,携带基因型TT(T42025C)的牛比基因型TC的牛具有更大的日增重(P=0.009)和胸围(P=0.009)。在12月龄,基因型CC(T42025C)的牛比基因型TC的牛具有更大的体重(P=0.008)、体长(P=0.001)和胸围(P=0.003);基因型AA(T42075C)的牛比基因型AG的牛具有更大的体长(P=0.006)。总之,我们提供了一种便捷的方法(ACRS-PCR-RFLP)来评价遗传资源。另外,KLF7对黄牛早期生长的显著效应还需在其他群体中进行验证,以期有助于中国黄牛的育种。

关键词：牛生长性状 KLF7基因 PCR-RFLP 单核苷酸多态性（snp）

来源： cnki会议评论

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ARL15基因单核苷酸多态性(SNPs)与2型糖尿病研究现状

杂交水稻（Oryza sativa L.）亲本9个质量相关性状一般配合力与snpLDB的关联分析

遗传学进步促进粮食安全与人口健康高峰论坛

作者：崔正伟杨康鹃延边大学医学院细胞生物学与医学遗传学教研室

ADP-核糖基化样因子-15(ADP-ribosylation factor-likel5,ARL15),又称为(ARFRP2/FLJ20051)。2009年通过全基因组关联研究(Genome Wide Association Studies,GWAS)发现ARL15基因snp rs431 1394(A>G)与2型糖尿病患者合并大血管病变高度相关(p=0.00046075),推测ARL15可能是2型糖尿病易感基因。ARL15基因定位于5p15.2(GengID:54622,OMIM:暂无记录),DNA总长度为425.8kb(NC 000005.9),mRNA长度为2.5kbNM190187.2),含有5个外显子(142bp,145bp,60bp,209bp,1930bp)和4个内含子,编码204个氨基酸(NP 061960)多肽链,该基因表达产物为Q9NXU5蛋白质,其分子量为23 KD,是属于分泌性蛋白质。ARL15在机体广泛表达,但功能不详,由推测Q9NXU5蛋白质序列分析其结构与ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factors,ARF)和肾素-血管紧张素系统相关的GTP-结合蛋白(Ras-related GTP-binding proteins)结构相似,后者在调节细胞间物质转运中起到重要作用,可能在胰岛素传导信号以及葡萄糖刺激的胰岛素分泌(Glucose stimulating insulinsecretion,GSIS)中起作用。本文ARL15基因生物学特效以及单核苷酸多态性与2型糖尿病及其合并症研究现状加以综述。

关键词： ADP-核糖基化样因子-15（ARL15） 2型糖尿病单核苷酸多态性（snp）

来源： cnki会议评论

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杂交水稻（Oryza sativa L.）亲本9个质量相关性状一般配合力与SN...

作者： MOAZ SALAH ELKHADER ALI 南京农业大学

学位级别：硕士

提高亲本籽粒质量性状的配合力是提高杂交水稻籽粒平均质量的关键因素。配合力分析是区分优良杂交组合亲本不可或缺的一种工具。在先前的研究中,人们努力开发带有分子标记的基因组资源用于解剖一般配合力。为了更近一步,比如为了获得最... 详细信息

提高亲本籽粒质量性状的配合力是提高杂交水稻籽粒平均质量的关键因素。配合力分析是区分优良杂交组合亲本不可或缺的一种工具。在先前的研究中,人们努力开发带有分子标记的基因组资源用于解剖一般配合力。为了更近一步,比如为了获得最大数量的一般配合力的优异等位基因,我们用构建的snpLDBs（单核苷酸连锁补平衡区段,single nucleotide polymorphism linkage disequilibrium blocks）来揭示一般配合力的遗传基础。对于目前鉴定一般配合力的等位基因的实验来说,在构建的snpLDB与亲本性状的一般配合力效应之间的关联分析是一种新颖且独特的方法。在我们的研究中,通过对48个籼稻F1组合和78个粳稻F1组合的表型分析,估算了14个籼稻亲本和19个粳稻亲本的9个质量相关性状的一般配合力效应值。通过对亲本基因组测序、基因分型获得的基因型数据,应用SAS/STAT软件中标记—性状关联的单因素方差分析方法,对9个品质相关性状的一般配合力效应与构建的snpLDB之间的关联进行了分析。在此背景下,我们的研究目的如下:（a）评估33个杂交水稻亲本9个质量相关性状的一般配合力效应值;（b）将snpLDB与亲本的一般配合力联系起来以确定全基因组一般配合力的snpLDB位点,与籽粒质量性状相关的优异snpLDB等位基因;（c）根据与亲本品质性状一般配合力显著关联的snpLDB标记,选择优异的等位基因;（d）通过聚合snpLDB等位基因预测可以改善质量性状一般配合力效应值的组合。获得的结果分述如下。1.杂交稻亲本9个质量相关性状的GCA表现为了检测杂交水稻的14个籼稻和19个粳稻亲本的一般配合力效应,配制了 48个籼稻和78个粳稻杂交F1组合,并评价了 9个质量相关的性状。结果显示,籼稻和粳稻杂交亲本的所有性状均存在着显着差异。杂交水稻亲本的9个质量相关性状中的每一种都显示出正或负的一般配合力效应值。在籼稻亲本中,细胞质雄性不育系珍品A,珍汕97A和257A以及恢复系抗恢98,明恢63和盐恢559是一般配合力优良的品系,因为它们对大多数性状具有最大的一般配合力正向效应。粳稻细胞质雄性不育系863A,6427A和徐稻2A以及恢复系C418,宁恢8号和云辉4号具有最大正效的一般配合力效应值。具有最大一般配合力效应值的亲本是三系杂交稻育种的优良配组亲本,可用于培育优良的籼稻杂种和粳稻杂种。2.构建的snpLDB和亲本性状GCA效应之间的关联分析构建的2612个snpLDB和33个亲本一般配合力效应之间的关联分析证实了共有39个显著的snpLDB和亲本9个质量相关性状的一般配合力关联。鉴定的效应关联位点分布在水稻的12条染色体上。与每个性状关联的snpLBD数目不一样,并显示对亲本性状一般配合力效应有正有负。相关snpLDB的表型变异相当高,范围从19.6%到63.5%之间。我们在snpLDB的相关基因座上检测到几个增效一般配合力等位基因。9个质量相关性状的优良一般配合力等位基因分布在整个亲本基因组中。总共发现了 39个与9个质量相关性状的一般配合力相关的重要snpLDB位点,snpLDB位点主要位于4,5,11和12号染色体上。在籼稻亲本中,细胞质雄性不育系珍品A,恢复系明恢63和抗恢98是优良的亲本系,用来开发具有优良的整精米率、较低的白垩面积和直链淀粉含量的水稻品种。在杂交粳稻的亲本中,质核互作雄性不育系863A,六千辛A,武羌A和镇稻88A,恢复系C418,盐恢R50和宁恢8号是优质亲本系,含有最大数量与质量性状优异一般配合力相关的等位基因。总之,一般配合力与snpLDB的基因分型增加了关联分析以发现水稻性状相关一般配合力的有益等位基因的功效和效率。我们研究的结果为将一般配合力等位基因聚合到细胞质雄性不育系或保持系亲本（轮回亲本）来改良杂交水稻亲本用于培育优质杂交水稻品种提供了有用的信息。

关键词：杂交水稻亲本一般配合力（GCA）单核苷酸多态性（snp）单核苷酸多态性连锁不平衡区段（snpLDB）关联分析质量性状

食管癌淋巴结转移与预后及C20orf54基因多态相关性

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食管癌淋巴结转移与预后及C20orf54基因多态相关性

作者：伍玥郑州大学

学位级别：硕士

1.研究背景与目的食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一,发现晚,预后差,中-晚期患者五年生存率只有10%左右。目前针对食管癌治疗的首选方案仍然是手术治疗,而淋巴结的转移情况正是影响食管癌患者手术后长期生存的最重要因素之一... 详细信息

1.研究背景与目的食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一,发现晚,预后差,中-晚期患者五年生存率只有10%左右。目前针对食管癌治疗的首选方案仍然是手术治疗,而淋巴结的转移情况正是影响食管癌患者手术后长期生存的最重要因素之一。有文献指出,外科切除术后,无转移患者总体五年生存率约为70%-92%,而转移患者只有18%-47%。本文着重探讨术中淋巴结切除数量与转移数量对食管癌预后的影响。早预防早发现早治疗是降低食管癌患者死亡率的关键。然而,由于目前对食管癌发病的确切因素尚未明晰,一级、二级预防措施与手段的效果不佳,且食管癌发生发展的分子机制也不明确,导致缺乏特异性强、敏感度高的早期诊断早期筛查和生物防治的策略与指标。通过我们既往的全基因组关联研究,我们试图寻求一种可用于高危人群筛查、预警的有效生物标志物。因此,本文旨在探讨食管癌患者以淋巴结转移状况为主的多项临床病理特征,与患者某些基因位点snp变异的相关性,尝试寻找能迅速检验患者遗传方面与转移相关的分子特征,以期对患者术后各种临床表现及预后形成充分的应对策略,最大程度上减少患者的痛苦,提高生存率与生活质量。 2.材料与方法 2.1研究对象 2.1.1淋巴结转移与预后研究的人群构成选取1976年至2002年间,行手术治疗且有明确淋巴结取材记录的患者8,924例。其中,男性5,428例,女性3,496例,男女比例1.55：1;年龄范围为20-98岁,男性平均年龄55.23±9.02岁,女性则为55.35±8.70岁。患者主要来自于河南、山西、河北三省交界处的太行山食管癌高发区,全部经单纯手术治疗,且具备明确术后病理检测报告。 2.1.2淋巴结转移与C20orf54基因rs13042395位点关系研究的人群构成选取2,616例食管癌患者,其中男性1,663例,女性953例,男女性别比为1.75：1;最小年龄26岁,最大81岁,平均发病年龄55.27±8.90岁,中位年龄55岁,男性发病年龄59.25±8.07岁,女性发病年龄60.37±7.87岁。患者主要来自2008年底至2010年底河南、山西、河北、山东、四川、广东、福建、北京、江苏、陕西、宁夏等省市医院,且均为由至少2位消化内科专家经纤维胃镜镜检查诊断并经病理学专家组织学检查验证的确诊病例。 2.2统计方法选取可对淋巴结转移或预后产生影响的几种因素,以及GWAS平台测得的18个snp位点的基因型,对其相关数据进行量化赋值。生存时间以年计算;单因素与淋巴结转移、与基因位点的相关性采用卡方检验,多因素与淋巴结转移关系采用二元Logistic回归分析;单因素及基因位点对预后的影响采用Kaplan-Meier生存曲线绘制,并采用Log-Rank检验是否具有统计学差异;多因素分析采用Cox风险比例模型消除多个变量彼此间的相互作用,筛选出对生存期有意义的危险因素;累计生存率采用Life tables法。采用SPSS18.0统计分析软件,检验水准取α=0.05（双侧检验）。 3.结果 3.1淋巴结转移状况与临床病理资料相关分析 3.1.1淋巴结有/无转移与各单因素临床指标关系卡方检验结果显示：淋巴结有/无转移与患者性别、家族史、高低发区、肿瘤部位、肿瘤长度、分化程度、浸润深度的差异均有统计学意义（P＜0.05）,且增加淋巴结切除数量,发现淋巴结转移的几率增大（P＜0.05）,而与年龄、血型、吸烟史、饮酒史则无统计学差异（P＞0.05）。 3.1.2淋巴结有/无转移的多因素综合分析由单因素分析得到在统计学意义上与淋巴结有/无转移相关的指标,采用多变量Logistic二元回归,消除多个相关因素间交互作用后,获得影响淋巴结转移的独立危险因素。淋巴结清扫数目、T分期（浸润程度）、分化程度、肿瘤部位、高低发区均具有统计学意义（P＜0.05）。 3.1.3患者淋巴结切除数量、转移数量与5年/10年生存率关系寿命表法分析结果显示：伴随淋巴结切除数量的增加,患者5年存活率和10年存活率逐渐增高（P＜0.05）;伴随着淋巴结转移数量的增多,患者5年存活率和10年存活率依次下降（P＜0.05）。 3.1.4患者淋巴结切除数量、转移数量的不同分组与生存期关系淋巴结切除数量按照1-6、7-12、≥13分组时,中位生存期依次为3.61年、5.43年、7.89年（P＜0.05）。淋巴结转移数量按照0、1-2、3-6、≥7分组时,中位生存期依次为9.72年、2.67年、1.95年、1.92年（P＜0.05）。 3.1.5淋巴结转移患者切除数量与生存期关系 Log-Rank检验、寿命表结果显示：淋巴结取材数量以1-12与≥13分组时,其5年存活率依次为25%、49%,10年存活率依次为18%、25%（P＜0.05）。

关键词：食管癌淋巴结转移预后单核苷酸多态性（snp）全基因组关联分析（GWAS）

BDNF Val66Met基因多态性与雌性生殖功能的相关性研究

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BDNF Val66Met基因多态性与雌性生殖功能的相关性研究

作者：冯璇山东大学

学位级别：硕士

一、研究背景脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor, BDNF）,是神经营养因子家族的重要成员之一。它可以促进中枢神经系统神经元的发育、生长、存活和分化。此外,很多证据表明BDNF在神经元的可塑性及长时程增强... 详细信息

一、研究背景脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor, BDNF）,是神经营养因子家族的重要成员之一。它可以促进中枢神经系统神经元的发育、生长、存活和分化。此外,很多证据表明BDNF在神经元的可塑性及长时程增强等方面发挥着重要作用。近来对于BDNF基因上snp位点rs6252的研究与日俱增。该突变可导致编码BDNF蛋白基因第66位密码子由缬氨酸（Val）突变为甲硫氨酸（Met）,进而导致BDNF转运障碍和调节性BDNF分泌降低。人群中,携带有Met的杂合子表现为海马容积的减少和海马依赖的学习记忆功能受损,并且与多种神经精神疾病的发生密切相关。有研究表明BDNF不仅存在于神经系统,也存在于其他多种器官中。近期有研究证明BDNF及其受体TrkB同样出现在卵巢、子宫等女性生殖器官中。使用体外培养卵细胞及转基因小鼠研究发现BDNF对卵细胞的成熟及受精卵的发育有重要作用。对子宫内膜异位所致不孕患者的临床研究也进一步发现,其卵泡液内BDNF的含量明显降低,提示BDNF可能参与女性生殖功能的调控。那么BDNFMet基因变异后是否会增加女性患不孕的风险,其可能的机制又是什么?这成为本实验关注的重点。为此,本实验收集280例子宫内膜异位症不孕患者,130例单纯输卵管因素所致不孕患者和114例正常怀孕女性为对照,探讨BDNFMet基因多态性对女性生育能力的影响。此外本研究还利用实验室早前构建的BDNFMet knock in小鼠BDNFMet转基因小鼠模型,研究BDNFMet基因多态性对生殖能力的影响及机制。二、研究目的 1.观察BDNFVal66Met基因多态性与子宫内膜异位所致女性不孕的相关性,及对该类患者IVF治疗效果的影响和可能的机制。 2.观察BDNF Val66Met基因变异雌性小鼠生育能力的改变,并探索其机制。三、实验方法 1.BDNF Val66Met基因变异在子宫内膜异位症不孕中的作用 1.1人外周血DNA的提取,Real-time PCR基因型鉴定 1.2临床子宫内膜异位患者IVF-ET分析 1.3ELISA检测人血浆和卵泡液中BDNF蛋白含量 2. BDNF Val66Met基因变异降低雌性生殖能力的机制研究 2.1交配实验观察BDNFMet/Met基因型小鼠的生殖能力 2.2小鼠动情周期的检测 2.3通过石蜡包埋、切片观察小鼠卵巢中各种卵泡数及子宫内膜是否产生病理性变化 2.4卵巢、子宫HE染色 2.5ELISA测下丘脑和垂体、卵巢、子宫的BDNF蛋白浓度 2.6促排卵试验观察小鼠对激素的反应能力四、实验结果 1BDNF Val66Met基因变异在子宫内膜异位症不孕中的作用 1.1BDNFVal66Met变异增加子宫内膜异位症女性不孕的发生对正常生育女性、输卵管因素不孕女性及子宫内膜异位症不孕女性行BDNFMet基因型鉴定,发现子宫内膜异位症不孕女性BDNFMet/Met基因型（32.5%）和Met等位基因频率（57.1%）分别较其它两组明显增高（P=0.043,P=0.015）,提示BDNF Val66Met变异可能是导致子宫内膜异位症女性不孕的危险因素之一。 1.2BDNF Val66Met变异降低不孕患者IVF治疗效果所收集的子宫内膜异位症不孕患者和输卵管因素不孕患者中分别有198名和102名行IVF-ET台疗,我们将其按BDNFMet基因型分别分为三组。在子宫内膜异位症不孕患者中,携带BDNFMet/Met的患者较BDNFVal/Val携带者使用了更高剂量的Gn（P＜0.01）,但却获得更少的成熟卵（P＜0.01）、更低的受精率（P＜0.05）和更少的高质量胚胎（P＜0.05）。此外,输卵管因素不孕患者中也发现了类似的现象：在输卵管阻塞病相关不孕的病人中BDNFMet/Met基因型的人群相比于BDNFVal/Val基因型人群,这些指标也呈现相似的差异：在更高剂量的Gn（P＜0.01）下有更少的成熟卵（P＜0.05）和更低的受精率（P＜0.01）。 1.3BDNF Val66Met变异降低IVF患者卵泡液中BDNF含量在对上述行IVF治疗的病人取卵时,分别抽取静脉血和卵泡液,用ELISA方法检测BDNF蛋白的含量。结果发现,不论是子宫内膜异位症不孕患者还是输卵管因素不孕患者,BDNFMet/Met携带者较BDNFVal/Val携带者卵泡液中BDNF蛋白水平明显下降（P＜0.05）,而血浆中BDNF含量不受影响。 2BDNF Val66Met基因变异降低雌性生殖能力的机制 2.1BDNFMet/Met基因型小鼠相对于野生型小鼠的生殖能力减弱。选取10周龄不同BDNF基因

关键词：脑源性神经营养因子（BDNF）单核苷酸多态性（snp）女性不孕 IVF-ET 子宫内膜异位症

ERCC1基因多态性与卵巢上皮性癌患者铂类化疗敏感性及预后关系的研究

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ERCC1基因多态性与卵巢上皮性癌患者铂类化疗敏感性及预后关系的...

作者：齐冰丽河北医科大学

学位级别：硕士

目的：卵巢癌是妇女生殖道常见的恶性肿瘤之一，其中90%是上皮性的卵巢癌。由于其缺乏早期的临床症状，大约有70%的卵巢癌患者发现时已为晚期，因此卵巢癌患者的5年生存率徘徊在30%左右。目前以铂类为基础的联合化疗成为卵巢癌肿瘤细胞... 详细信息

目的：卵巢癌是妇女生殖道常见的恶性肿瘤之一，其中90%是上皮性的卵巢癌。由于其缺乏早期的临床症状，大约有70%的卵巢癌患者发现时已为晚期，因此卵巢癌患者的5年生存率徘徊在30%左右。目前以铂类为基础的联合化疗成为卵巢癌肿瘤细胞减灭术后的一线治疗方案，尽管不断优化手术方式，卵巢癌患者的5年生存率仍无明显提高，其中铂类化疗耐药成为治疗上皮性卵巢癌患者的主要障碍。 DNA损伤修复能力的改变是铂类耐药的重要分子基础。DNA损伤修复能力的差异可能导致上皮性卵巢癌患者对铂类化疗的敏感性不同。核苷酸切除修复（nucleotide-excision repair，NER）通路被认为是机体内修复DNA损伤的最主要途径，切除修复交叉互补基因1（excision repaircross-complementing1，ERCC1）是NER通路的重要基因，其编码的蛋白与XPF（Xeroderma pigment group F）蛋白形成异源二聚体，在NER初期发挥DNA损伤识别功能，后期表现5′核酸内切酶活性，共同行使损害部位5′端切除的功能，所以ERCC1蛋白被认为是NER修复途径中的关键蛋白。因此ERCC1与卵巢癌患者铂类化疗敏感性的关系备受关注。本研究旨在探讨ERCC1基因上的标签单核苷酸多态性（tag single nucleotidepolymorphism，tagsnp）与上皮性卵巢癌患者铂类化疗预后的关系。方法：通过Haploview软件筛选出ERCC1基因的6个（rs11615、rs3212986、rs735482、rs3212955、rs12610134、rs3212958）tagsnps。采用Snapshot法检测220例上皮性卵巢癌患者ERCC1基因的6个tagsnps的基因型频率分布的情况。所有患者经过三年的随访，判定患者临床预后的指标包括患者对铂类化疗的敏感性，疾病无进展生存期（PFS）和总生存时间（OS）。统计学处理：数据统计分析采用SPSS13.0版软件包（SPSS Company，Chicago，Illinois，USA）进行。患者的临床特征与疾病复发及死亡的关联采用χ2检验;Logistic regression计算相对风险度的比值比（OR）及其95%CI;生存分析采用Kaplan–Meier方法行log-rank检验;Cox比例风险回归模型分析ERCC1基因tagsnp与患者的PFS和OS之间的关联，计算HR及95%CI。以P＜0.05为差异有统计学意义。结果： 1患者的临床特征与疾病复发及死亡的关系：统计学分析显示，患者确诊时年龄、临床分期、组织学分级、残余病灶大小与上皮性卵巢癌患者的疾病复发及死亡明显相关。确诊时年龄≥50岁、临床分期为晚期、手术残余病灶≥1cm的患者复发和死亡的风险明显增加（P＜0.01），组织学分级为低分化的患者复发风险增加（P=0.04）。病理类型与患者的疾病复发及死亡无关（P＞0.05）。 2ERCC1基因多态性与上皮性卵巢癌患者铂类化疗敏感性的关系：220例上皮性卵巢癌患者初始治疗铂类敏感者147（66.8%）例，不敏感者73（33.2%）例。ERCC1rs11615C/T多态的C/C、C/T、T/T三种基因型频率分布在铂类化疗敏感组和不敏感组分别为：53.0%、45.6%、1.4%和52.1%、35.6%、12.3%，两组比较有统计学差异（P＜0.01）。与携带C/C基因型的患者相比，携带T/T基因型的卵巢癌患者的铂类化疗敏感性明显降低（OR=6.22，95%CI=1.12~34.42）。ERCC1rs3212986C/A、rs735482A/C、rs3212955A/G、rs12610134T/C多态位点的基因型频率分布在卵巢癌患者铂类化疗敏感组和不敏感组无统计学差异（P＞0.05）。 3ERCC1基因多态性与上皮性卵巢癌患者临床预后的关系：患者以复发和未复发分组进行分析，3年随访中复发135（61.4%）例、未复发85（38.6%）例，ERCC1rs11615C/T多态的C/C、C/T、T/T三种基因型频率分布在复发组和未复发组分别为：54.8%、37.0%、8.2%和49.4%、50.6%、0%，两组比较有统计学差异（P＜0.01）。患者以死亡和生存分组进行分析，3年随访中死亡患者92（41.8%）例，生存患者128（58.2%）例。ERCC1rs11615C/T多态的C/C、C/T、T/T三种基因型频率分布在死亡组和生存组分别为：51.1%、39.1%、9.8%和53.9%、44.5%、1.6%，两组比较有统计学差异（P=0.02）。 Kaplan-Meier生存曲线分析显示：ERCC1rs11615C/T多态的C/C、C/T、T/T三种基因型频率分布与上皮性卵巢癌患者的PFS（P＜0.01）及OS（P＜0.01）明显相关。

关键词： ERCC1 单核苷酸多态性（snp）上皮性卵巢癌铂类化疗预后

GDF-15血浆水平及基因多态位点+157A/T与不稳定型心绞痛相关性研究

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GDF-15血浆水平及基因多态位点+157A/T与不稳定型心绞痛相关性研究

作者：赵明亮承德医学院

学位级别：硕士

目的不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris)是冠心病的急性事件，属于急性冠脉综合征（acs），是介于慢性稳定性心绞痛和急性心肌梗死之间的临床综合征。冠心病不稳定型心绞痛主要包括（1）初发劳力型心绞痛2）恶化劳力型心绞痛（3... 详细信息

目的不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris)是冠心病的急性事件，属于急性冠脉综合征（acs），是介于慢性稳定性心绞痛和急性心肌梗死之间的临床综合征。冠心病不稳定型心绞痛主要包括（1）初发劳力型心绞痛2）恶化劳力型心绞痛（3）静息心绞痛（4）梗死后心绞痛（5）变异型心绞痛;不稳定性心绞痛病理基础是由于冠状动脉粥样斑块破裂出血继而血小板粘附聚集引起，特点是心绞痛症状呈进行性加重，如果不能给予及时治疗或者及时干预亦，可进展为急性心肌梗死;不稳定型心绞痛与稳定性心绞痛相比，不稳定型心绞痛患者活动耐力明显减低，疼痛更加剧烈，持续的时间更长，部分患者数月后进展为急性心肌梗死。GDF-15（生长分化因子-15）,既往的研究指出GDF-15与肿瘤的发生发展相关[1617];近年来的研究则发现GDF-15与心不稳定型心绞痛密切相关，在不稳定型心绞痛进展过程中起着保护性作用。GDF-15有明显特异性，高表达在胎盘组织和前列腺组织，在心脏及其他组织中不表达或者低表达，但心肌细胞在出现缺血或者缺血／再灌注损伤情况时，GDF-15表达会显著升高[23,24]。既往研究表明人类GDF-15基因中有数十个snp（单核苷酸多态性）位点，大多数为无意义snp，其中有3个位于外显子中的snp：+157A/T（rs1059369）、-3148C/G（rs1059519）、+2438C/G（rs1058587）导致了GDF-15前体蛋白的氨基酸序列的改变，从而有可能改变GDF-15的蛋白活性和稳定性[56]，我们由此来着手来探讨GDF-15位点+157A/T的snp：rs1059369多态性是否与不稳定型心绞痛具有相关性。1.通过对比全部90例冠状动脉造影受检者的GDF-15的血浆水平来分析GDF-15水平与不稳定型心绞痛的关系;2.并且提取全基因组DNA，采用PCR-LDR(连接酶检测反应法）来对全基因组DNA基因多态位点+157A/T的snp:rs1059369进行分型检测;分别对冠状动脉造影阳性组50例患者及对照组冠状动脉造影阴性40例病人的snp:rs1059369分型检测结果进行两组间不同表型和两组间各表型比较，从而来分析GDF-15基因多态位点+157A/T与不稳定型心绞痛相关性。方法：1.冠状动脉造影阳性50例，对照组冠状动脉造影阴40例。采用双抗体夹心酶联免疫(ELlSA)方法测定全部患者的GDF-15血清水平，并进行统计学分析。2.采用PCR-LDR(连接酶检测反应法）对全部病人进行单核苷酸多态(snp）分型检测分析。设计特异上游引物和下游引物，多重PRC扩增snp，来获得含有突变的目的基因片段，在目的基因片段设定荧光探针，当探针与目的基因片段DNA互补配对后，通过连接酶催化磷酸二酯键将相邻两根探针连接从而形成产物，当探针的两条寡聚核苷酸接头处存在碱基错配，则连接反应便不能进行。最后，上测序仪读取测序结果，然后，进行统计学分析。结果：1冠状脉动造影阳性组与对照组的一般特征冠状动脉造影阳性组与对照组组间比较，患者年龄、性别、吸烟、高血压、血糖、血脂水平均无统计学差异。冠状动脉造影阳性组男性多于女性，而经冠脉造影证实冠脉正常，有胸痛症状的对照组女性多于男性，符合冠心病男性发病率高及心脏神经官能症女性发病率高的流行病学特点。（表一）2冠状脉动造影阳性组与对照组GDF-15血清水平冠状脉动造影阳性组与冠状动脉造影阴性组血清中GDF-15水平测定实验得出：冠状脉动造影阳性组50例患者外周血GDF-15水平为：1610.08±312.80，冠状动脉阴性组40例患者外周血GDF-15水平为：630.73±132.57。阳性组GDF-15血清水平高;对照组血清水平低;差异有统计学意义（表二）3GDF-15基因多态位点+157A/Trs1059369多态性分型GDF-15基因多态位点+157A/Trs1059369多态性分型为[A/T]：AT、TT、AA、OO，产物大小50/A,54/T。其中冠状动脉造影阳性组分型：AT型20人TT型7人AA型19人OO型4人冠状动脉造影阴性组分型：AT型18人TT型8人AA型13人OO型1人4冠状脉动造影阳性组与冠状动脉造影阴性组两组间不同表型分析冠状动脉造影阳性者与冠状动脉造影阴性者血清+157A/T：rs1059369[A/T]多态分型两组间不同表型的比较（p=0.57，表三）无明显统计学意义5冠状脉动造影阳性组与对照组两组间各表型分析冠状动脉造影阳性者与冠状动脉造影阴性者血清+157A/T：rs1059369[A/T]多态分型两组间各表型分析（AT组p=0.63TT组P=0.45AA组P=0.5900组P=0.26。表四）无明显统计学意义。结论

关键词：生长分化因子-15（GDF-15）不稳定型心绞痛（UAP）单核苷酸多态性（snp）位点信息 +157A/T rs1059369