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单核细胞趋化蛋白3（MCP-3）在牙髓中的免疫组化研究

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单核细胞趋化蛋白3（MCP-3）在牙髓中的免疫组化研究

作者： Hong Inseo（洪牣栖）吉林大学

学位级别：硕士

单核细胞趋化蛋白3（Monocyte Chemotactic Protein3, MCP-3，又称为CCL7）,是近二十年来分离克隆的CC亚家族趋化因子之一。它是单核/巨噬细胞强有力的趋化因子,并参与多种炎性疾病的发生发展。MCP-3主要引起单核/巨噬细胞在炎症部位持... 详细信息

单核细胞趋化蛋白3（Monocyte Chemotactic Protein3, MCP-3，又称为CCL7）,是近二十年来分离克隆的CC亚家族趋化因子之一。它是单核/巨噬细胞强有力的趋化因子,并参与多种炎性疾病的发生发展。MCP-3主要引起单核/巨噬细胞在炎症部位持续聚集,并激活单核细胞巨噬细胞发挥其吞噬病原体和抗原提呈作用。同时MCP-3对淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK）、树突状细胞（DC）和嗜碱性细胞等也具有一定的趋化活性,诱导这些炎症细胞向炎症区域聚集，引发一连串的炎症反应。鉴于MCP-3能够激活多种细胞参与炎症反应，因此，目前MCP-3在炎症、肿瘤等领域成为热点研究。近年来，国外医学研究从各个学科领域的不同炎症疾病中发现MCP-3与多种慢性炎症疾病的发生发展有关，病理状态下MCP-3的异常表达，可导致过敏性疾病、动脉粥样硬化、肠炎、宫颈癌、心肌炎等多种临床疾病。在口腔疾病领域的相关研究证实，MCP-3与根尖周炎，慢性牙周炎、口腔癌等疾病发生发展相关。牙髓炎作为口腔常见的炎症性疾病之一，常继发于细菌感染引起的龋病或逆行性的牙周感染，其炎症的发生发展势必伴随着炎症细胞的聚集，根据MCP-3趋化因子的特性，在牙髓炎症疾病过程中也势必伴随MCP-3的出现并引发相关的炎症性细胞改变。但目前尚未有实验证实MCP-3的在炎症牙髓细胞中的存在及其相关作用。因此,本实验采用免疫组化方法检测人的正常牙髓组织、急性牙髓炎症组织和慢性牙髓炎症组织的牙髓组织中MCP-3的表达,进一步研究MCP-3这一趋化因子在牙髓炎发展的作用机理,并完善趋化因子MCP-3在口腔疾病中的相关作用。研究结果表明: MCP-3在正常牙髓组织中无表达,在急慢性牙髓组织中有不同程度的表达。主要实验结果如下： 1.健康牙髓组织组：镜下观察可见成纤维细胞、胶原纤维、毛细血管及组织细胞,尚可见少量巨噬细胞，但未见MCP-3阳性表达的棕黄色阳性细胞。 2.急性牙髓炎组：镜下可见大量的中性粒细胞游出血管并向炎症区域趋化游走,MCP-3阳性细胞主要分布于中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、浆细胞等，阳性细胞平均表达率为24.28%，阳性染色细胞数量不均,阳性染色程度不一致,阳性表达为主要分布于细胞浆和细胞膜并呈棕黄色的颗粒状物。 3.慢性牙髓炎组：镜下可见成纤维细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、新生毛细血管的血管内皮细胞有不同程度的MCP-3阳性表达,阳性细胞平均表达率为39.92%，与急性牙髓炎症组织阳性细胞平均表达率比较有显著性差异(P细胞浆和细胞膜并呈棕黄色的颗粒状物。 4.急慢性炎症牙髓组织MCP-3阳性细胞表达率有显著性差异。综上所述，MCP-3在牙髓炎牙髓组织中有表达,并在牙髓炎发生、发展过程可协同其他CC亚家族趋化因子在炎症组织的愈合修复中起到主要作用。

关键词：趋化因子单核细胞趋化蛋白3 牙髓炎免疫组化

单核细胞趋化蛋白3、白介素8及干扰素γ对寻常型银屑病患者外周血中性粒细胞趋化功能的影响

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青海医学院学报 2006年第3期27卷 145-147页

作者：齐瑞群毕新岭顾军张莉青海大学附属医院皮肤科上海第二军医大学附属长海医院皮肤科

目的研究单核细胞趋化蛋白3(MCP-3)及其他银屑病相关细胞因子对银屑病患者中性粒细胞(PMN)趋化功能的影响。方法体外分离银屑病患者外周血PMN,用Transwell趋化小室测定MCP-3、IL-8、IFN-γ对其趋化功能的影响。结果MCP-3组与对照组比较... 详细信息

目的研究单核细胞趋化蛋白3(MCP-3)及其他银屑病相关细胞因子对银屑病患者中性粒细胞(PMN)趋化功能的影响。方法体外分离银屑病患者外周血PMN,用Transwell趋化小室测定MCP-3、IL-8、IFN-γ对其趋化功能的影响。结果MCP-3组与对照组比较差异无统计学意义,IL-8组对PMN有较强趋化作用,MCP-3+IL-8组趋化性明显高于IL-8组。各组细胞用IFN-γ处理前后比较,除MCP-3+IL-8组外,其他组差异均无统计学意义。结论MCP-3本身对PMN无趋化作用,但它能协同IL-8趋化PMN,IFN-γ可进一步放大这种协同趋化作用。*

关键词：银屑病单核细胞趋化蛋白3 中性粒细胞趋化因子

淫羊藿对哮喘大鼠肺组织RANTES及MCP-3表达的影响

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中国中西医结合杂志 2008年第3期28卷 238-241页

作者：谢瑾玉董竞成崔焱黄建华巫善美陈伟华应健复旦大学附属华山医院中西医结合肺、炎症和肿瘤研究室上海200040

目的观察补肾中药淫羊藿对哮喘大鼠肺组织调节激活正常T细胞表达和分泌因子(regulated on activation,normal T cell expressed and secreted,RANTES)、单核细胞趋化蛋白3(monocyte chemotactic pro- tein-3,MCP-3)表达的影响,进一步探讨淫羊藿防治哮喘的作用机制。方法将挪威大鼠随机分成6组:正常组、模型组、阳性药组(给地塞米松)、淫羊藿低、中、高剂量组(分别给淫羊藿0.125、0.5、2.0 g/mL)。用Re- al-time PCR法检测肺组织RANTES、MCP-3 mRNA的表达,EUSA法检测各组血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)4、5的含量。结果与模型组比较,各用药组大鼠肺组织RANTEs、MCP-3 mRNA的表达下调(P33),IL-5水平仅见阳性药组和淫羊藿高剂量组显著下降(P= 0.003,P=0.005)。结论哮喘发作期给予淫羊藿可减轻哮喘气道炎症,并且其与抑制肺组织RANTES、MCP-3表达有关。

关键词：淫羊藿支气管哮喘调节激活正常T细胞表达和分泌因子单核细胞趋化蛋白3 炎症细胞因子

MCP-3及CD34标记的微血管密度在DM/PM患者肌肉组织中的测定及意义

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MCP-3及CD34标记的微血管密度在DM/PM患者肌肉组织中的测定及意义

作者：孔令爽青海大学

学位级别：硕士

目的:为了解DM和PM患者骨骼肌里MCP-3及CD34标记的微血管密度(MVD)的水平,探讨MCP-3在DM和PM患者肌肉组织中的表达情况以及和MVD之间的关联,并分析两个指标在DM和PM疾病发生和进展过程中的作用,从而进一步探究DM和PM的发病机制。方法:... 详细信息

目的:为了解DM和PM患者骨骼肌里MCP-3及CD34标记的微血管密度(MVD)的水平,探讨MCP-3在DM和PM患者肌肉组织中的表达情况以及和MVD之间的关联,并分析两个指标在DM和PM疾病发生和进展过程中的作用,从而进一步探究DM和PM的发病机制。方法:运用免疫组化Envision二步法检测10例DM患者、10例PM患者及20例对照组(来源于单纯骨科创伤的健康人)肌肉组织中的MCP-3及MVD的水平。采用SPSS 21.0统计软件对其结果行统计学处理。结果:MCP-3在DM、PM二组患者肌肉组织中的阳性所占比依次为60.0%、50.0%,与对照组(5%)比较有统计学差异(P34标记的微血管,且此二组的MVD水平都高于对照组,差异均有统计学意义(P3和MVD在DM、PM二组患者肌肉组织中的水平均无统计学差异(P>0.05);DM、PM二组患者肌肉组织中的MCP-3阳性系数与MVD呈正相关(r=0.749,P=0.013;r=0.771,P=0.009)。结论:提示DM和PM患者肌肉中可能都有新生血管的生成,MCP-3可能参与了DM和PM患者肌肉中新生血管的生成过程。

关键词：皮肌炎多发性肌炎单核细胞趋化蛋白3 CD34 微血管密度

融合型独特型B细胞淋巴瘤DNA疫苗的制备及其免疫学活性测定

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融合型独特型B细胞淋巴瘤DNA疫苗的制备及其免疫学活性测定

作者：张颜河北医科大学

学位级别：硕士

目的B细胞淋巴瘤的膜表面免疫球蛋白(surface membrane immunoglobulin,mIg)独特型(idiotype,Id)来自基因重排,由可变区的重链(VH)和轻链(VL)基因所决定,其突出的个体化特征即肿瘤特异性抗原(TSA)正好满足了抗肿瘤疫苗的特异性的需要。... 详细信息

目的B细胞淋巴瘤的膜表面免疫球蛋白(surface membrane immunoglobulin,mIg)独特型(idiotype,Id)来自基因重排,由可变区的重链(VH)和轻链(VL)基因所决定,其突出的个体化特征即肿瘤特异性抗原(TSA)正好满足了抗肿瘤疫苗的特异性的需要。将来源于个体的恶性增殖的B细胞的Ig特异性片段VH和VL通过基因克隆制备成单链抗体可变区片段(scFv),二者由一段短肽连接,可以模拟完整免疫球蛋白的免疫原性。由于scFv源于自身抗原,单独应用不足以诱导抑制肿瘤细胞的免疫反应,为此人们在提高免疫原性方面做了大量的研究。研究者发现利用配体与细胞表面受体的结合可提高抗原呈递给抗原提呈细胞(APC)的效率,提高抗原特异性免疫反应。Biragyn将单核细胞趋化蛋白3(Monocyte chemotactic protein-3,MCP3)与scFv偶联作为疫苗免疫小鼠,发现其表达的融合蛋白具有Ig的天然构象及趋化因子的功能,能和抗原结合,同时吸引抗原提呈细胞(特别是未成熟树突状细胞)向抗原靠近,诱导的免疫反应强于免疫球蛋白疫苗。同时,抗肿瘤的DNA疫苗也是最近研究的一个热点,本研究利用小鼠B细胞淋巴瘤细胞株A20的scFv和MCP3的融合基因构建DNA疫苗,并用该疫苗免疫同源小鼠,LDH法检测小鼠的脾细胞与靶细胞A20孵育后的CTL活性。比较表达scFv和MCP3-scFv的DNA疫苗产生的细胞免疫反应对肿瘤细胞的杀伤效果,探讨融合型独特型DNA疫苗在抗肿瘤免疫反应中是否能诱导T细胞介导的抗肿瘤反应,诱导的抑瘤效果是否高于独特型DNA疫苗,为提高独特型疫苗的免疫原性提供理论基础,为淋巴瘤疫苗的制备及临床试验研究拓宽思路。方法:1真核表达质粒的构建1.1 PCR引物设计根据A20细胞IgVH cDNA、IgVL cDNA与MCP3序列分别设计MCP3-scFv和scFv的上下游引物,此部分实验已经完成[1]。根据EGFP序列设计EGFP上下游引物,序列均来源于Genebank。1.2 PCR扩增目的片段以pGLo/MCP3-scFv为模板,分别用MCP3上游引物和VL下游引物扩增MCP3-scFv,VH上游引物和VL下游引物扩增scFv。以含有EGFP基因序列的质粒PCX-EGFP为模板,分别用引物EGFP上游引物和EGFP下游引物扩增EGFP基因。1.3 pGEM T-easy载体克隆MCP3-scFv、scFv、EGFP片段以及鉴定1.4 DNA质粒构建将PCR产物MCP3-scFv、scFv、EGFP酶切后,定向克隆到真核表达载体pTARGET ,得到真核表达质粒pTARGET/EGFP、pTARGET/scFv-EGFP和pTARGET/MCP3-scFv-EGFP,将三种质粒转化感受态细菌及酶切鉴定,选取阳性克隆测序。2质粒转染及鉴定将构建的质粒分别电穿孔法转染至培养至对数生长期的人脐静脉内皮细胞ECV-304,转染后48小时,在倒置荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。3质粒准备和免疫小鼠3.1质粒纯化应用QIAGEN/Endofree Plasmid Maxi,Giga Kit分离纯化质粒pTARGET/EGFP、pTARGET/scFv-EGFP、pTARGET/MCP3-scFv-EGFP。每种质粒内毒素水平控制在0.1 EU/ug以下,制备成为符合动物实验要求的质粒。3.2 DNA疫苗免疫动物将18只Babl/c小鼠按随机区组方法分成三组:pTARGET/EGFP组;pTARGET/scFv-EGFP组;pTARGET/MCP3-scFv-EGFP组。6只/组。在小鼠双侧股四头肌肌内注射2.5g/L盐酸布比卡因,每侧50μl。5天后每组质粒取50微克溶至50微升0.9%NaCL分别注射于小鼠两侧的股四头肌,接种三次,每次间隔两周。4 LDH释放法测定CTL的特异性杀伤率于小鼠免疫结束后第5天取脾细胞作为效应细胞,A20细胞为靶细胞,将效靶比例设置为20/1、50/1、100/1,应用LDH释放法测定CTL活性。5统计学分析CTL的杀伤率数据分析采用SPSS(13.0)统计软件进行,3组间比较采用方差分析,两两比较采用SNK-q检验,P细胞转染及荧光观察:融合基因真核表达质粒转染ECV后经倒置荧光显微镜下观察发现,pTARGET/EGFP、pTARGET/scFv-EGFP和pTARGET/MCP3-scFv-EGFP在转染后48h和72h

关键词： B细胞淋巴瘤融合型独特型DNA疫苗单链可变区单核细胞趋化蛋白3 细胞毒性T细胞

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骨髓巨噬细胞归巢静脉血栓及作用机理研究

骨髓巨噬细胞归巢静脉血栓及作用机理研究

作者：孙浩重庆医科大学

学位级别：硕士

[目的]探讨骨髓细胞动员和静脉血栓的关系,并观察单核细胞趋化蛋白-3(MCP-3)对骨髓细胞动员的大鼠静脉血栓中巨噬细胞趋化功能的影响,从而了解人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员骨髓细胞对大鼠静脉血栓机化和再通的可能机理。[方法... 详细信息

[目的]探讨骨髓细胞动员和静脉血栓的关系,并观察单核细胞趋化蛋白-3(MCP-3)对骨髓细胞动员的大鼠静脉血栓中巨噬细胞趋化功能的影响,从而了解人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员骨髓细胞对大鼠静脉血栓机化和再通的可能机理。[方法]成年Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、血栓组和rhG-CSF组。正常组未行任何处理。假手术组大鼠的下腔静脉未行缩窄及阻断,余处理同血栓组。rhG-CSF组为模型鼠术后当天开始连续7天在腹部皮下按25ug/kg注射rhG-CSF,其余组注射等体积生理盐水。术前0.5h,术后1、3、5、7、10和14天采集外周血,以全自动血细胞计数分析仪检测白细胞总数,血涂片显微镜下计数单个核细胞(MNC)比例;用ELISA检测外周血中MCP-3水平;术后7天、14天取血栓组和rhG-CSF组下腔静脉标本。切取左肾静脉以下下腔静脉至左右髂总静脉汇合处,用免疫组化和图像分析仪及电子显微镜观察血栓机化率和血栓中巨噬细胞密度;用RT-PCR检测血栓中MCP-3 mRNA的表达情况。[结果]1.外周血MNC计数术后第3、5和7天,与血栓组外周血MNC计数(1.72±0.22×109/L,1.56±0.36×109/L,1.46±0.41×109/L)比较,rhG-CSF组外周血MNC计数(2.92±0.36×109/L,3.28±0.26×109/L,4.48±0.33×109/L)升高有显著性差异。2.血栓机化率和电镜结果术后7天和14天,与血栓组血栓机化率(14.64±2.32%, 63.21±8.68%)比较, rhG-CSF组血栓的机化率(32.52±3.50%, 89.54±5.62%)有显著性差异(P﹤0.01)。电镜观察显示:与血栓组比较, rhG-CSF组巨噬细胞数量多,其周围常见新生幼稚血管和成熟再通血管,巨噬细胞吞噬功能活跃。3.巨噬细胞密度术后第7天,与血栓组血栓内巨噬细胞密度(1.57±0.82%)比较,rhG-CSF组明显升高(8.58±1.24%,P=0.0037);术后第14天,血栓组血栓内巨噬细胞密度为( 5.62±1.07% ), rhG-CSF组为(14.52±1.32%,P =0.0079),巨噬细胞密度升高有显著性差异。4.外周血MCP-3水平术后7天假手术组、血栓组和rhG-CSF组外周血MCP-3水平(96.53±8.21,99.81±7.96,138.44±10.01)明显升高,各组内分别与术前比较有显著性差异(P化。[结论]1.静脉壁机械性损伤联合缩窄可稳定建立大鼠静脉血栓模型。2.rhG-CSF可增加外周血趋化因子MCP-3水平和血栓中MCP-3mRNA的表达。3.外周血MCP-3水平增高和血栓中MCP-3 mRNA表达增加引起血栓中巨噬细胞聚集增多。提示骨髓细胞动员的大鼠静脉血栓中MCP-3能促使巨噬细胞的趋化功能增强(巨噬细胞归巢静脉血栓),从而加快了血栓机化、再通过程。

关键词：单核细胞趋化蛋白3 静脉血栓骨髓细胞动员巨噬细胞

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CC趋化因子7研究进展

中华老年多器官疾病杂志 2017年第5期16卷 381-384页

作者：吕中华陈逸伦耿晓雯程庆强王高坤任艺虹解放军总医院心血管内科北京100853

CC趋化因子7(CCL7)广泛表达于单核细胞、T淋巴细胞、树突状细胞等免疫细胞中。起初多作为炎性因子研究,但随着研究的深入,人们发现CCL7在免疫调节、组织损伤修复、与肝素结合、促纤维化等方面均发挥重要作用。因此,了解CCL7对于研究疾... 详细信息

CC趋化因子7(CCL7)广泛表达于单核细胞、T淋巴细胞、树突状细胞等免疫细胞中。起初多作为炎性因子研究,但随着研究的深入,人们发现CCL7在免疫调节、组织损伤修复、与肝素结合、促纤维化等方面均发挥重要作用。因此,了解CCL7对于研究疾病的分子机制及治疗均有重要意义。随着多功能干细胞临床应用的进展,CCL7作为可诱导其迁徙的重要因子可能会提高细胞治疗的效率和疗效。本文将对CCL7的结构和作用进行综述。

关键词： CC趋化因子7 单核细胞趋化蛋白3 免疫调节组织损伤修复