检索结果-南通市图书馆

生鲜畜禽肉来源单核细胞性李斯特菌的基因组特征及其菌膜形成能力分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品科学 2023年第10期44卷 142-149页

作者：王静周昌艳陈秀金索玉娟李兆周河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 上海农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所上海201403

目的:了解生鲜畜禽肉中典型单核细胞性李斯特菌遗传特征与其菌膜形成能力间的关系,为生鲜畜禽肉中该菌的精准防控提供依据。方法:依据前期分型结果,挑选生鲜畜禽肉来源的8种序列分型(sequence typing,ST)的10株单核细胞性李斯特菌分离... 详细信息

目的:了解生鲜畜禽肉中典型单核细胞性李斯特菌遗传特征与其菌膜形成能力间的关系,为生鲜畜禽肉中该菌的精准防控提供依据。方法:依据前期分型结果,挑选生鲜畜禽肉来源的8种序列分型(sequence typing,ST)的10株单核细胞性李斯特菌分离株进行全基因组测序,对其进行基因功能注释、毒力基因鉴定、可移动遗传元件(前噬菌体、基因组岛、质粒)分析、进化分析和菌膜形成相关基因分析。然后,利用结晶紫染色法对分离株进行菌膜形成能力测定,分析不同类型分离株的基因组特征与其菌膜形成能力的相关性。结果:8种ST型单核细胞性李斯特菌分离株的基因组均鉴定到毒力岛LIPI-1、LIPI-2和其他19种以上的毒力基因,以及数量不等的前噬菌体和基因组岛;仅在ST3型分离株中鉴定到毒力岛LIPI-3基因,在ST8和ST1403型分离株中鉴定到质粒。进化分支系数显示,5种ST型分离株与数据库中疾病暴发菌株有较近的亲缘关系;此外,菌膜形成相关基因luxS和sigB分别在6种和7种ST型菌株中发生了突变;菌膜形成能力显示,ST1403和ST87型分离株的菌膜形成能力较强,ST1402型分离株能力最弱。结论:生鲜畜禽肉中含有多种致病潜力的单核细胞性李斯特菌,菌株可移动遗传元件的携带率可能与菌膜的形成能力相关。

关键词：单核细胞性李斯特菌全基因组测序毒力基因菌膜

单核细胞增多性李斯特菌硫氧还蛋白TrxA介导的感染机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

单核细胞增多性李斯特菌硫氧还蛋白TrxA介导的感染机制研究

作者：董志梅浙江农林大学

学位级别：硕士

单核细胞增多性李斯特菌(简称单增李斯特菌)为革兰氏阳性、食源性胞内寄生菌,可穿过宿主胃肠道屏障、血脑屏障、胎盘屏障引起脑膜炎和流产等,致死率高达30%。单增李斯特菌发挥其致病机制需要一系列毒力因子的参与,从而破坏宿主的免疫防... 详细信息

单核细胞增多性李斯特菌(简称单增李斯特菌)为革兰氏阳性、食源性胞内寄生菌,可穿过宿主胃肠道屏障、血脑屏障、胎盘屏障引起脑膜炎和流产等,致死率高达30%。单增李斯特菌发挥其致病机制需要一系列毒力因子的参与,从而破坏宿主的免疫防线和应激修复系统。硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)是一类广泛存在于细菌中的氧化还原蛋白,与细菌的抗氧化应激相关,且能够通过二硫键修饰参与蛋白质的折叠从而维持蛋白质功能。生物信息学分析显示单增李斯特菌可能编码含有一个硫氧还蛋白(Trx A,由lmo1233基因编码)。那么,李斯特菌作为重要的胞内寄生菌是否也利用TrxA抵抗体内外环境中的氧化应激并维持其氧化还原稳态?是否参与了重要功能蛋白的折叠修饰?因此,本研究重点探索了单增李斯特菌在适应体外环境及感染宿主过程中利用Trx A介导细菌抗氧化应激的生存机制;揭示了Trx A通过对重要毒力因子的氧化折叠修饰并协助细菌发挥致病力的分子机理;阐明了Trx A与细菌关键鞭毛调控蛋白MogR和GmaR的互作关系并介导细菌鞭毛形成的内在机制。本论文研究发现:(I)单增李斯特菌TrxA在巯基特异性氧化剂肼(diamide)的诱导下其蛋白表达水平极显著上调(P菌在该氧化环境下的生长和存活能力极显著削弱(P李斯特菌的抗氧化应激至关重要;(II)体外原核表达并纯化TrxA后发现该酶具有经典的硫氧还蛋白酶活性,可以高效且特异地将氧化态胰岛素(insulin)还原。在生物信息学分析基础上,通过氨基酸点突变技术将TrxA的两个可能关键氨基酸Cys28和Cys31分别突变成Ala后该酶活性均完全丧失,该结果首次证实李斯特菌TrxA亦属于经典的硫氧还蛋白酶家族,其中Cys28和Cys31为其关键氨基酸位点,决定了该酶的活性和功能;(III)细胞感染试验发现,缺失trxA后细菌在人肠道上皮细胞Caco-2上的黏附、侵袭及存活能力均显著削弱(P菌无法在其两端形成粗壮的“彗星状尾巴”,造成其在细胞间的迁移能力显著降低(P李斯特菌在胞内感染和生存发挥了关键的作用。体内感染小鼠发现,trxA缺失或过表达均导致细菌在肝脏和脾脏中的复制及增殖水平显著降低(P菌发挥致病力尤为关键;(IV)利用全基因组转录谱测序发现,缺失trxA后共有270个基因的转录水平发生了显著变化(差异2倍以上),其中李斯特菌重要毒力基因plcA,mpl,actA,hly和plcB的转录水平下降尤为显著(P李斯特菌毒力中枢调控蛋白PrfA(单体含有4个半胱氨酸)在体外能够发生明显的放热式互作(K=4.00E±1.13E4M-1),推测Trx A参与了PrfA单体分子内二硫键的形成,进而折叠成具有正确结构的二聚体并发挥正常功能,该结果证实TrxA通过对PrfA的氧化还原修饰进而调控下游毒力因子的表达,从而最终介导李斯特菌的致病力。(V)体外运动试验发现,李斯特菌缺失trxA后导致其运动性完全消失,通过电镜观察证实缺失株无法形成鞭毛。ITC试验发现,TrxA在体外能够与鞭毛形成重要蛋白MogR(单体含有2个半胱氨酸)发生吸热式互作(K=1.28E±1.56E4M-1),表明TrxA可能也参与了单增李斯特菌鞭毛形成的相关蛋白修饰及功能维持。因此,本项目首次运用生物信息学、分子生物学、蛋白质组学、感染生物学和细胞生物学等手段,探索了单增李斯特菌硫氧还蛋白Trx A在细菌体内外环境中的抗氧化应激机制,以及在感染宿主过程中通过对重要毒力因子的氧化还原修饰而参与细菌致病过程的分子机理,首次揭示了该蛋白通过对鞭毛调控蛋白MogR的修饰并介导细菌鞭毛形成及运动的分子机制。本研究对于揭示单增李斯特菌在体外氧化应激环境、宿主体内的抗氧化生存、二硫键稳态维持及氧化还原修饰机理以及维护人和动物健康具有重要意义。

关键词：单核细胞性李斯特菌硫氧还蛋白氧化应激细菌毒力鞭毛调控

三文鱼基质上单核细胞性李斯特菌毒力因子的表达

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

食品科学 2018年第2期39卷 138-143页

作者：朱雅慧朱洪日王佳莹张公亮郝洪顺侯红漫大连工业大学辽宁省水产品加工质量安全与控制重点实验室辽宁大连116034

为了解单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)污染食品基质后毒力因子表达的变化,本研究以Lm标准株ATCC 19115为研究对象,将其接种于三文鱼基质及胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(tryptic soy agar-yeast extract,TSA-YE)(对照组)上,于... 详细信息

为了解单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)污染食品基质后毒力因子表达的变化,本研究以Lm标准株ATCC 19115为研究对象,将其接种于三文鱼基质及胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(tryptic soy agar-yeast extract,TSA-YE)(对照组)上,于0、4、7℃贮藏条件下分别培养24 h和48 h后,收集菌体提取总RNA,采用反转录实时定量聚合酶链式反应(reverse transcript-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)对其4个毒力因子hlyA、inlB、prfA、sigB的表达进行分析。结果表明,在0、4℃和7℃分别培养24 h和48 h后,4个主要毒力因子在三文鱼基质上的表达量均高于平板对照,其中hlyA在贮藏4℃的三文鱼基质上表达上调的最为显著。此外,prfA和sigB在4℃贮藏条件下,表达量极显著高于7℃和0℃(P4℃>0℃(P24 h(P菌在食品基质上的风险评估和有效防控提供一定的理论依据。

关键词：单核细胞性李斯特菌毒力因子三文鱼基质

基质辅助激光解析飞行质谱法检测空肠弯曲菌及李斯特菌

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品科学 2017年第20期38卷 262-267页

作者：屠博文吉俊敏杜强黎俊宏唐宏兵熊吉滨韩晓冬常州市疾病预防控制中心江苏常州213022 泰州医药高新技术产业园区疫苗工程中心江苏泰州225300 南京大学医学院江苏南京210093

目的:通过VITEK MS微生物检测系统对养殖场及市售活鸡来源的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌进行激光解析飞行质谱鉴定,建立两种致病菌的质谱鉴定方法。方法:从样品中分离获得疑似的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌,经不同配比的基质液... 详细信息

目的:通过VITEK MS微生物检测系统对养殖场及市售活鸡来源的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌进行激光解析飞行质谱鉴定,建立两种致病菌的质谱鉴定方法。方法:从样品中分离获得疑似的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌,经不同配比的基质液处理后进行质谱鉴定。通过分析检出菌特征峰及相对丰度差异来评价不同配比基质液对两种致病菌检测的影响。结果:空肠弯曲菌和李斯特菌对基质液配比要求具有明显差异,前者不需要经过甲酸裂解,而对三氟乙酸含量敏感,后者鉴定结果受到甲酸裂解制约。基质液含水量控制在体积分数30%可以有效避免特征峰缺失并提高检出率。结论:控制基质液的含水量、基质浓度和三氟乙酸含量可以增加空肠弯曲菌和李斯特菌的特征峰数量,增强相对丰度,提高致病菌检出率。基质液配比优化研究有助于增强食源性致病菌快速鉴定能力,有助于提高疾病预防和食源性风险监测的时效性。

关键词： VITEKMS微生物检测系统空肠弯曲菌单核细胞性李斯特菌基质液配比微生物质谱检测方法