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肠艾美尔球虫单卵囊分离及ITS-1序列测定

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安徽农业科学 2011年第1期39卷 307-308,312页

作者：方素芳顾小龙崔平河北北方学院动物科技学院河北张家口075000

[目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫,提取卵囊基因组DNA。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18SrDNA和5.8SrDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1(ITS-1),PCR产物直接测序... 详细信息

[目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫,提取卵囊基因组DNA。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18SrDNA和5.8SrDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1(ITS-1),PCR产物直接测序。[结果]成功分离出肠艾美尔球虫,PCR扩增出434bp清晰条带,且最低能检测出27个孢子化卵囊。[结论]该研究结果为球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。

关键词：肠艾美尔球虫单卵囊分离 ITS-1序列 PCR 测定

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影响鸡球虫单卵囊分离纯化的因素分析

动物医学进展 2009年第6期30卷 110-112页

作者：侯金环古少鹏山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

单卵囊分离技术是获得品种单一、基因型纯净的卵囊,以便更有效的鉴别球虫种类和建立球虫纯种体系的重要手段。论文主要从雏鸡日龄、卵囊侵袭力、分离方法和材料的选择三个方面来分析其对鸡球虫单卵囊分离纯化的影响,从而为单卵囊分离技... 详细信息

单卵囊分离技术是获得品种单一、基因型纯净的卵囊,以便更有效的鉴别球虫种类和建立球虫纯种体系的重要手段。论文主要从雏鸡日龄、卵囊侵袭力、分离方法和材料的选择三个方面来分析其对鸡球虫单卵囊分离纯化的影响,从而为单卵囊分离技术的改进提供指导,进一步为球虫的各项研究提供基础。

关键词：鸡球虫单卵囊分离影响因素

日本鹌鹑艾美耳球虫单卵囊分离及雏鹑扩增研究

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河南农业科学 2014年第6期43卷 149-151页

作者：张敏韩琼琼李清州王芳梁楠张龙现菅复春宁长申焦作市动物疫病预防控制中心河南焦作454003 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省农业科学院农业经济与信息研究所河南郑州450002 河南新正好生物工程有限公司河南郑州450002 河南农业职业学院河南中牟451450

为获取大量纯种日本鹌鹑艾美耳球虫（***），采用饱和食盐水漂浮法收集某场鹌鹑的球虫卵囊，26℃恒温培养至孢子化后，对据形态学鉴定为***的分离株进行单卵囊分离和雏鹑扩增试验。结果显示，26℃条件下卵囊孢子化时间为14h；单卵囊感染... 详细信息

为获取大量纯种日本鹌鹑艾美耳球虫（***），采用饱和食盐水漂浮法收集某场鹌鹑的球虫卵囊，26℃恒温培养至孢子化后，对据形态学鉴定为***的分离株进行单卵囊分离和雏鹑扩增试验。结果显示，26℃条件下卵囊孢子化时间为14h；单卵囊感染7日龄雏鹑，其潜隐期6d，显露期8～10d；以200个卵囊感染7日龄雏鹑，其潜隐期为5d，显露期为11d。

关键词：日本鹌鹑艾美耳球虫单卵囊分离卵囊孢子化扩增

鸡球虫的单卵囊分离和感染法及其在种的鉴定上的应用

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华南农学院学报 1980年第4期 74-82页

作者：林维庆陈淑玉林辉环陈炳德华南农学院畜牧兽医系

将球虫卵囊悬浮液少许混入较大量的2％重铬酸钾溶液中,于室温下静置4—7天,这样卵囊就会孢子化。用吸管吸取一滴含此种孢子化卵囊的溶液于载玻片上,加上一滴等渗氯化钠溶液稀释至每个视野含1—2个卵囊。在低倍显微镜下,用玻璃毛细吸管... 详细信息

将球虫卵囊悬浮液少许混入较大量的2％重铬酸钾溶液中,于室温下静置4—7天,这样卵囊就会孢子化。用吸管吸取一滴含此种孢子化卵囊的溶液于载玻片上,加上一滴等渗氯化钠溶液稀释至每个视野含1—2个卵囊。在低倍显微镜下,用玻璃毛细吸管对着一个卵囊,将其吸取,然后吹落于铺有琼脂薄膜的玻片上,并在镜下检查证实只有一个卵囊时,用细镊子划出含此卵囊的相应部分琼脂薄膜,并喂给一天龄小鸡。这些试验小鸡应注意保温和分别隔离饲养,喂以煮沸过的饲料和饮水,避免一切环境污染的可能性。经过排卵囊前期之后,这些小鸡就应在粪便中排出单纯一个种的卵囊。

关键词：鸡球虫鉴别试验潜在期感染试验卵囊藏卵器单卵囊分离

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感染鸡日龄对球虫单卵囊分离的影响

中国畜牧兽医 2007年第5期34卷 96-98页

作者：李赟古少鹏王敏霞王海珍山西农业大学动物科技学院太谷030801

选用5、8、11日龄的雏鸡进行鸡球虫单卵囊分离试验,研究不同感染日龄对鸡球虫单卵囊分离的影响。结果表明:在其他条件一致的情况下,从感染成功率、潜伏期、高峰期的出现时间及持续时间和从每只感染雏鸡收集到的球虫卵囊数量等指标进行... 详细信息

选用5、8、11日龄的雏鸡进行鸡球虫单卵囊分离试验,研究不同感染日龄对鸡球虫单卵囊分离的影响。结果表明:在其他条件一致的情况下,从感染成功率、潜伏期、高峰期的出现时间及持续时间和从每只感染雏鸡收集到的球虫卵囊数量等指标进行综合判定,发现感染11日龄的雏鸡单卵囊分离成功率最高。

关键词：鸡感染日龄球虫单卵囊分离

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鸡球虫单卵囊分离技术与雏鸡感染试验

动物医学进展 2006年第3期27卷 72-75页

作者：龚振兴刘毅刘增再刘伟龙燕湖南农业大学动物科技学院湖南长沙410128

把收集到的新鲜带血鸡粪用饱和食盐水漂浮法收集鸡球虫卵囊,在装有25 g/L重铬酸钾溶液的平皿中保存,置于29℃的恒温箱中2 d^3 d,得到混合种孢子化卵囊。生理盐水稀释卵囊液至每滴1个~2个卵囊,在载玻片上用自制的毛细吸管在显微镜下吸取... 详细信息

把收集到的新鲜带血鸡粪用饱和食盐水漂浮法收集鸡球虫卵囊,在装有25 g/L重铬酸钾溶液的平皿中保存,置于29℃的恒温箱中2 d^3 d,得到混合种孢子化卵囊。生理盐水稀释卵囊液至每滴1个~2个卵囊,在载玻片上用自制的毛细吸管在显微镜下吸取1个卵囊于备好的40 g/L琼脂糖薄片上,确保只有1个卵囊,用手术刀切割琼脂糖薄片并包埋卵囊,即完成单卵囊分离。将包埋好的单卵囊感染雏鸡,感染率为60%~90%。

关键词：鸡球虫卵囊单卵囊分离感染

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黄艾美耳球虫单卵囊分离及PCR鉴定

黄艾美耳球虫单卵囊分离及PCR鉴定

东北虎源等孢球虫在猫体内的卵囊排出规律观察

中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：顾小龙刘红彬方素芳刘贤勇崔平索勋河北北方学院预防兽医学重点实验室中国农业大学动物医学院河北北方学院药学系

目的:建立PCR方法鉴定黄艾美耳球虫;方法:单卵囊分离孢子化黄艾美耳球虫河北株并接种无球虫兔,后代卵囊再次接种无球虫进行增殖。CTAB法提取卵囊基因组DNA。在鸡柔嫩艾美耳球虫18S rR NA3’端和28S rRNA 5’端保守区设计艾美耳属通用引... 详细信息

目的:建立PCR方法鉴定黄艾美耳球虫;方法:单卵囊分离孢子化黄艾美耳球虫河北株并接种无球虫兔,后代卵囊再次接种无球虫进行增殖。CTAB法提取卵囊基因组DNA。在鸡柔嫩艾美耳球虫18S rR NA3’端和28S rRNA 5’端保守区设计艾美耳属通用引物,以黄艾美耳球虫河北株卵囊基因组DNA为模板扩增其完整ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列。在ITS1/2序列高变区设计种特异引物,以大型艾美耳球虫和肠艾美耳球虫卵囊基因组DNA验证引物的特异性。结果:单卵囊分离成功率50%,PCR扩增产物大小为1126bp,其中ITS1序列长330bp,5.8S rRNA序列长157bp,ITS2序列长522 bp,将黄艾美耳球虫河北株ITS1/2序列进行Blast搜索,结果搜索到3条序列,其中2条序列为黄艾美耳球虫(JX406873,HM768883),相似性分别为99%和98%,第3条序列为梨形艾美球虫(HM768889),相似性85%。在黄艾美耳球虫河北株ITS1/2序列高变区设计种特异引物,与大型艾美耳球虫和肠艾美耳球虫无交叉反应。结论:初步建立了灵敏、特异的PCR方法鉴定黄艾美耳球虫。

关键词：家兔黄艾美耳球虫单卵囊分离 ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列,PCR鉴定

来源： cnki会议评论

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中国预防兽医学报 2009年第11期31卷 914-915页

作者：张靖伟路义鑫张子群韩彩霞王守育宋铭忻东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江出入境检验检疫局黑龙江哈尔滨150030

为研究猫体内的卵囊排出规律,本研究分离的东北虎源等孢球虫纯种卵囊,在猫体内多次传代后获得充足的卵囊。对猫进行人工感染30、103和104个孢子化卵囊,观察猫的卵囊排出规律,包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵囊数(OPG值... 详细信息

为研究猫体内的卵囊排出规律,本研究分离的东北虎源等孢球虫纯种卵囊,在猫体内多次传代后获得充足的卵囊。对猫进行人工感染30、103和104个孢子化卵囊,观察猫的卵囊排出规律,包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵囊数(OPG值)。通过对比,验证了潜隐期、显露期、OPG值与感染剂量存在相关关系,即感染剂量越小,潜隐期越长,显露期越长,OPG值越小,反之亦然。

关键词：东北虎源等孢球虫单卵囊分离猫卵囊排出规律

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黄艾美耳球虫纯种分离及ITS-1序列测定

河南农业科学 2011年第1期40卷 144-146页

作者：方素芳崔平顾小龙河北北方学院动物科技学院河北张家口075000

为建立一种有效鉴定兔球虫的分子生物学方法,采用单卵囊分离技术,分离纯化黄艾美耳球虫。根据GenBank中发表的艾美耳属球虫18S rDNA和5.8S rDNA序列,设计特异性引物,建立PCR方法并针对黄艾美耳球虫第一内转录间隔区进行扩增,PCR产物直... 详细信息

为建立一种有效鉴定兔球虫的分子生物学方法,采用单卵囊分离技术,分离纯化黄艾美耳球虫。根据GenBank中发表的艾美耳属球虫18S rDNA和5.8S rDNA序列,设计特异性引物,建立PCR方法并针对黄艾美耳球虫第一内转录间隔区进行扩增,PCR产物直接测序。结果分离出黄艾美耳球虫,并扩增出包含黄艾美耳球虫第一内转录间隔区的基因条带,随后测定了该条带序列,大小为455 bp。研究结果填补了兔球虫第一内转录间隔区序列遗传资料的空白,为兔球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。

关键词：黄艾美耳球虫单卵囊分离 ITS-1 PCR 测序