检索结果-南通市图书馆

中国生物制品学杂志 2023年第10期36卷 1206-1212页

作者：师江龙孙文泽乐鑫潘勇兵武汉生物制品研究所有限责任公司抗体研究室湖北武汉430207

目的制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)iga单克隆抗体,对其表达条件进行优化以提高表达量,并初步探讨iga抗体在抗SARS-CoV-2中的效应。方法将编码iga1-F61抗体序列的... 详细信息

目的制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)iga单克隆抗体,对其表达条件进行优化以提高表达量,并初步探讨iga抗体在抗SARS-CoV-2中的效应。方法将编码iga1-F61抗体序列的质粒与聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)转染试剂混合后转染EXPi293F^(TM)细胞,瞬时表达抗体蛋白;通过优化重链(heavy chain,Hc)、轻链(light chain,Lc)、J链(joining chain,Jc)比例、质粒与PEI比例、转染后收获时间确定单体iga1(monomeric iga1,miga1)-F61及二聚体iga1(dimeric iga1,diga1)-F61在EXPi293F^(TM)细胞中的最佳培养条件以及最佳表达量。将转染后上清经亲和层析纯化后,BCA法测定浓度,SDS-PAGE及体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法分析抗体表达完整性及纯度,假病毒中和试验检测抗体中和活性。结果当He与Lc比例为1:2、质粒与PEI比例为1:3、转染后5d收获上清时,miga1-F61最高表达量为123.45μg/mL,纯化后抗体纯度达95%以上;Hc:Lc:Jc为1:2:1时,可获得最大纯度的diga1-F61,达90%以上。针对OmicronBA.4/5的假病毒中和试验结果显示,diga1-F61呈现优于IgG-F61的中和活性,其最大半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))降低了4倍左右。结论成功表达了重组抗SARS-CoV-2单克隆抗体miga1-F61和diga1-F61,纯度较高,且diga1在体外展现出优于IgG的中和活性。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 单克隆抗体单体iga 二聚体iga 瞬时表达优化

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