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参与真菌病毒协生作用的四个候选核盘菌基因鉴定

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参与真菌病毒协生作用的四个候选核盘菌基因鉴定

作者：贺艳芳华中农业大学

学位级别：硕士

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是引起作物菌核病的典型死体营养型植物病原真菌,造成作物品质降低及严重的产量损失。真菌病毒在真菌群体中普遍存在,多个病毒侵染同一个菌株是自然界中普遍现象。复合侵染的病毒间相互作用会影响寄主... 详细信息

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是引起作物菌核病的典型死体营养型植物病原真菌,造成作物品质降低及严重的产量损失。真菌病毒在真菌群体中普遍存在,多个病毒侵染同一个菌株是自然界中普遍现象。复合侵染的病毒间相互作用会影响寄主真菌致病力,拮抗作用会导致真菌毒力增强,协生作用可使毒力降低。前期研究中鉴定出携带6种RNA病毒的核盘菌低毒菌株SCH941,及含有4种真菌病毒(核盘菌双节段病毒1(Sclerotinia sclerotiorum botybirnavirus 1,Ss BRV1)、核盘菌双节段病毒3(Sclerotinia sclerotiorum botybirnavirus 1,Ss BRV3)核盘菌呼肠孤病毒1(Sclerotinia sclerotiorum reovirus 1,Ss Re V1)以及Sclerotinia sclerotiorum yado-kari virus 1(Ss YKV1))的低毒菌株T3,且Ss BRV1、Ss Re V1、Ss YKV1三种病毒之间存在协生作用。基于转录组测序分析,发现4个核盘菌基因Ss Nmr A(sscle＿13g092100)、Ss ZFH2(sscle＿15g104540)、Ss Pho A(sscle＿11g084560)、Ss RFX1(sscle＿03g025950)在三种病毒协生过程中显著差异性表达。基于此,本研究以菌株SCH941的子囊孢子后代菌株SCH941A1(不携带病毒),及低毒菌株T3(携带四种病毒)为研究材料,探究了4个候选基因对核盘菌生物学特性的影响及在病毒协生过程中发挥的作用。对两个在病毒协生过程中明显上调表达的核盘菌基因Ss Nmr A和Ss ZFH2进行了功能分析。基因Ss Nmr A编码含有304个氨基酸的假定蛋白,有一个保守结构域PCBER-SDR,预测属于氧化还原酶超家族成员。以菌株SCH941A1为背景,获得了Ss Nmr A基因敲除转化子,该转化子菌落形态和致病力等生物学特性与SCH941A1菌株无明显差异。携带病毒Ss BRV1、Ss Re V1和Ss YKV1的Ss Nmr A基因敲除转化子,表型与T3菌株相似,呈现低毒特性,且病毒积累量与T3菌株无明显差异,表明Ss Nmr A基因的缺失不影响Ss BRV1、Ss YKV1和Ss Re V1三者之间的协生作用。基因Ss ZFH2编码一个含有361个氨基酸的假定蛋白,在294-316个氨基酸位置有一个CH型锌指蛋白(CysHis zinc finger)保守结构域,是一个负转录调控因子。Ss ZFH2基因敲除转化子的菌落形态和致病力等生物学特性与SCH941A1菌株无明显差异。但是,Ss BRV1、Ss YKV1和Ss Re V1三种病毒复合侵染Ss ZFH2基因敲除转化子后,该转化子并没有表现出低毒特性,表型正常,且敲除转化子中病毒积累量显著低于T3菌株,表明Ss ZFH2基因与病毒间协生作用具有紧密相关性。对两个在病毒协生过程中明显下调的核盘菌基因Ss Pho A和Ss RFX1进行了功能分析。Ss Pho A基因编码含有信号肽的全长413个氨基酸的假定蛋白,含有一个酸性磷酸酯酶(ALP-like)保守结构域,其敲除转化子与菌株SCH941A1的表型相似。携带Ss BRV1、Ss YKV1和Ss Re V1三种病毒的Ss Pho A基因敲除转化子表型与T3菌株相似,呈现低毒特性,且病毒积累量与T3菌株无明显差异,表明Ss Pho A基因与病毒协生作用无关。Ss RFX1基因编码一个全长821个氨基酸且包含有一个RFX DNA binding保守结构域的假定蛋白,是一个候选转录因子。基因Ss RFX1的敲除转化子生长速率降低,侵染垫形成延后,致病力下降,是一个新的核盘菌致病相关基因,但该基因在病毒协生过程中的作用需要进一步的验证。综上所述,本论文通过对Ss BRV1、Ss YKV1和Ss Re V1三种病毒协生过程中差异表达的4个基因进行功能研究,发现RFX DNA binding型转录因子基因Ss RFX1与核盘菌致病相关,而CH型锌指蛋白转录因子基因Ss ZFH2在促进病毒复制方面发挥着重要作用。该研究不仅发现了新的与核盘菌致病相关基因,为菌核病的防控提供了新的基因资源,而且发现病毒协生过程中促进病毒复制的基因,为解析病毒协生作用的机理提供了参考依据。

关键词：真菌病毒复合侵染协生作用核盘菌

杀菌剂对木霉桔抗整齐小菌核菌株的毒力及协生作用研究

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云南农业大学学报 1995年第2期10卷 151-152页

作者：燕嗣皇陆德清杨雨环贵州省农科院植保所

杀菌剂对木霉桔抗整齐小菌核菌株的毒力及协生作用研究ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅＰｏｉｓｏｎａｎｄＣｏｏｐｅｒａｔｅｆｏｒＡｎｔｉａｃｔｉｏｎｏｆＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｔｏＳｃｌｅｒｏｔｉｕｍｒｏｌｆｓｂｙＵｓｉｎｇＧｅｒ... 详细信息

杀菌剂对木霉桔抗整齐小菌核菌株的毒力及协生作用研究ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅＰｏｉｓｏｎａｎｄＣｏｏｐｅｒａｔｅｆｏｒＡｎｔｉａｃｔｉｏｎｏｆＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｔｏＳｃｌｅｒｏｔｉｕｍｒｏｌｆｓｂｙＵｓｉｎｇＧｅｒｍｉｃｉｄｅ燕嗣皇，陆德清，杨雨环...

关键词：杀菌剂木霉整齐小菌核毒力协生作用

马铃薯Y病毒HC-Pro中心区域在病毒协生作用中的主导地位

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生物工程学报 2001年第3期17卷 264-268页

作者：鲁瑞芳李为民王海云郭明彭学贤中国科学院微生物研究所植物生物技术开放实验室北京100080

利用PCR方法获得了马铃薯病毒中国株系 (PVY C)HC Pro基因的 5个缺失突变体 ,构建了相应的植物表达载体。通过土壤农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法转化了烟草品种K32 6 (Nicotinatabacumcv.K32 6 )。PCR和Southernblot分析证明... 详细信息

利用PCR方法获得了马铃薯病毒中国株系 (PVY C)HC Pro基因的 5个缺失突变体 ,构建了相应的植物表达载体。通过土壤农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法转化了烟草品种K32 6 (Nicotinatabacumcv.K32 6 )。PCR和Southernblot分析证明了HC Pro基因及其缺失突变体已整合到烟草基因组中 ,Westernblot表明它们在转基因烟草中得到了表达。侵染性试验发现HC Pro中心区域介导转基因烟草中PVY C和黄瓜花叶病毒 (CMV)、PVY C和马铃薯X病毒 (PVX)之间的协生作用 ,从而明确了PVY CHC

关键词：马铃薯Y病毒 HC-Pro基因突变中心区域协生作用

马铃薯Y病毒蚜传辅助成分介导PVX/PVY协生作用

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病毒学报 2001年第3期17卷 250-254页

作者：鲁瑞芳郭明李为民梁小波彭学贤中国科学院微生物所植物生物技术实验室北京100080

构建了马铃薯Y病毒中国株系 (PVY C)蚜传辅助成分 (HC Pro)基因的正义、反义和缺失三种植物表达载体 ,通过农杆菌介导法转化烟草品种NC89。Southernblot分析表明 ,HC Pro基因及其突变体已经整合到烟草染色体中 ,Westernblot分析证明 ,正... 详细信息

构建了马铃薯Y病毒中国株系 (PVY C)蚜传辅助成分 (HC Pro)基因的正义、反义和缺失三种植物表达载体 ,通过农杆菌介导法转化烟草品种NC89。Southernblot分析表明 ,HC Pro基因及其突变体已经整合到烟草染色体中 ,Westernblot分析证明 ,正义HC Pro基因及其缺失突变体在转基因烟草中有表达产物。攻毒试验结果证明 ,转正义HC Pro基因及其缺失突变体不仅能够提高T1转基因烟草中PVY C的病毒积累和致病性 ,而且对异源病毒PVX具有同样的作用 ,而转反义HC Pro基因烟草对PVY C和PVX的致病性无影响。因此PVY CHC

关键词：马铃薯Y病毒 HC-Pro基因致病性 PVX/PVY 协生作用蚜传辅助成分

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植物病毒协生作用及其分子机理

中国病毒学 2001年第3期16卷 195-201页

作者：鲁瑞芳李为民彭学贤中国科学院微生物研究所植物生物技术开放实验室北京100080

植物病毒协生作用分布广 ,是造成农作物减产的重要原因之一。抗病毒转基因植物中协生作用的出现 ,严重限制了基因工程植物的商品化生产。本文对植物病毒协生作用的类型和特点、协生作用中病毒与病毒、病毒与环境间的相互作用及其分子机... 详细信息

植物病毒协生作用分布广 ,是造成农作物减产的重要原因之一。抗病毒转基因植物中协生作用的出现 ,严重限制了基因工程植物的商品化生产。本文对植物病毒协生作用的类型和特点、协生作用中病毒与病毒、病毒与环境间的相互作用及其分子机制进行了阐述。

关键词：植物病毒协生作用复制运输分子机制

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粉锈宁对木霉防治辣椒白绢病的协生作用

粉锈宁对木霉防治辣椒白绢病的协生作用

马铃薯Y病毒弱毒突变体的筛选及其交叉保护作用

1995年全国生物防治学术讨论会

作者：燕嗣皇陆德清杨雨环贵州省农科院植保所

白绢病(Sclerotium rolfsii)是我省辣椒的重要病害之一,木霉属真菌Trichoderma对病原菌整齐小菌核有较强的拮抗作用。在白绢病的生物防治中,施用对整齐小菌核有特异作用的杀菌剂粉锈宁,并引进木霉耐药菌株,可提高防病效果。

关键词：木霉整齐小菌核粉锈宁协生作用

来源： cnki会议评论

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马铃薯Y病毒弱毒突变体的筛选及其交叉保护作用

作者：王振宇山东农业大学

学位级别：硕士

马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)是马铃薯Y病毒科、马铃薯Y病毒属的代表种。PVY寄主范围广泛,可侵染茄科等多种作物,给马铃薯和烟草等作物造成严重经济损失。PVY分离物可分为O株系和N株系,O株系在烟草上引起花叶,N株系可以引起烟草叶... 详细信息

马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)是马铃薯Y病毒科、马铃薯Y病毒属的代表种。PVY寄主范围广泛,可侵染茄科等多种作物,给马铃薯和烟草等作物造成严重经济损失。PVY分离物可分为O株系和N株系,O株系在烟草上引起花叶,N株系可以引起烟草叶脉坏死,对烟叶生产危害更大。本实验通过定点突变分析,获得了含有多位点突变的PVY弱毒突变体,并在其调控与马铃薯X病毒(Potato virus X, PVX)协生的位点引入突变,获得了有应用潜力的弱毒突变体。具体结果如下：1、利用PVYN-605全长cDNA侵染性克隆,构建了四个单位点突变体A(D205G)、 B (N339D)、C(K400R)、D (E419D),接种发现,与野生型PVYN-605相比,症状明显减轻。将这些位点聚合到一起得到的多位点突变体ABC、ABD、ABCD在烟草上不引起叶脉坏死症状,突变体浓度分别降低了25%、38%、47%。2、测定多位点弱毒突变体的交叉保护效果。接种多位点突变体ABC、ABD、 ABCD于普通烟后,在保护间隔期15天、20天时进行挑战接种后没有观察到叶脉坏死症状。ELISA检测病毒的积累量明显低于野生型,约为野生型积累量的30%。这些结果表明突变体ABC、ABD、ABCD具有较好的交叉保护效果。3、明确了调控PVY与PVX协生作用的关键氨基酸。将PVYHC-Pro中的FRNK基序突变为FINK, NRT基序突变为ART后,HC-Pro丧失了抑制RNA沉默的活性。与野生型HC-Pro不同,上述两个突变体插入PVX侵染性克隆pgR106后浸润本氏烟,不引起植株的系统坏死。4、在PVYHC-Pro调控和PVX协生的位点引入突变体ABCD,新获得的突变体对野生型PVY有交叉保护效果,但与PVX无协生作用。

关键词：马铃薯Y病毒辅助成分-蛋白酶弱毒突变体协生作用交叉保护

马铃薯Y病毒蚜传辅助因子促进马铃薯X病毒长距离运输(英文)

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Acta Botanica Sinica 2001年第9期43卷 935-940页

作者：李为民鲁瑞芳郭明陈毓荃彭学贤中国科学院微生物研究所植物生物技术开放实验室北京100080 西北农林科技大学基础科学系陕西杨凌712100

采用PCR和定点突变法 ,对马铃薯Y病毒中国株系 (ChinesestrainofpotatoYpotyvirus,PVY_C)蚜传辅助成分 (helpercomponentproteinase ,HC_Pro)基因中心区域的CCCT基序和PTK基序进行了定点改造 ,获得了 4种突变体。然后将突变体克隆到植... 详细信息

采用PCR和定点突变法 ,对马铃薯Y病毒中国株系 (ChinesestrainofpotatoYpotyvirus,PVY_C)蚜传辅助成分 (helpercomponentproteinase ,HC_Pro)基因中心区域的CCCT基序和PTK基序进行了定点改造 ,获得了 4种突变体。然后将突变体克隆到植物表达载体pBin438中 ,所得到的重组体通过根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导法转化了烟草 (NicotianatabacumL .cv .K32 6 )。Southernblotting和Westernblotting分析表明 4种突变体已经成功地整合到烟草的基因组中 ,并在蛋白水平上得到了表达。马铃薯X病毒 (potatoXpotexvirus,PVX)对转基因烟草的攻毒实验表明 ,4种突变体均使PVY_CHC_Pro严重丧失了促进PVX病毒粒子在寄主体内积累和提高PVX致病性的功能 ,说明CCCT、PTK基序为PVY_CHC_Pro介导PVX/PVY协生作用所必需。同时证明了HC_Pro具有增强PVX在寄主体内长距离运输的功能。

关键词：马铃薯Y病毒马铃薯X病毒蚜传辅助成分基因突变协生作用病毒传播

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漫谈大气污染与档案保护

档案与建设 1989年第1期 53-54页

作者：沈小羽江苏省档案科研所

档案的制成材料是物质的,其寿命是有限的。档案制成材料耐久性遭受破坏,其影响因素之一是大气污染。据不完全统计,目前全世界每年排入大气的污染物有6亿多吨。引起大气污染的物质绝大多数来自人类的活动,种类也很多,已经产生危害或已为... 详细信息

档案的制成材料是物质的,其寿命是有限的。档案制成材料耐久性遭受破坏,其影响因素之一是大气污染。据不完全统计,目前全世界每年排入大气的污染物有6亿多吨。引起大气污染的物质绝大多数来自人类的活动,种类也很多,已经产生危害或已为人们注意的有100种左右,其中影响范围广,威胁大的有烟、粉尘、二氧化硫等,

关键词：档案保护档案制成材料影响因素档案文件降尘量协生作用酸性气体酸碱性工业排放黄发