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重组氨肽酶底物特异性及协同水解玉米蛋白质

食品与生物技术学报 2013年第12期32卷 1274-1280页

作者：林颖孔峰田亚平江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

以9种不同的氨基酸一对硝基苯胺为底物，考察重组枯草芽孢杆菌氨肽酶对底物的特异性。结果显示，该氨肽酶对由疏水氨基酸组成的Leu-pNA水解活力最强。其次是两种由碱性氨基酸组成的Arg-pNA、Lys-pNA，对其它几种由疏水氨基酸组成的Ala—... 详细信息

以9种不同的氨基酸一对硝基苯胺为底物，考察重组枯草芽孢杆菌氨肽酶对底物的特异性。结果显示，该氨肽酶对由疏水氨基酸组成的Leu-pNA水解活力最强。其次是两种由碱性氨基酸组成的Arg-pNA、Lys-pNA，对其它几种由疏水氨基酸组成的Ala—pNA、Ile-pNA、Val-pNA、Phe-pNA、Pro-pNA表现出较弱的水解活力．而对酸性氨基酸组成的Glu-pNA则无水解活力。在此基础上考察其与内切蛋白酶协同水解玉米蛋白质的效果。以水解度为指标进行单因素试验，明确氨肽酶与碱性蛋白酶复配水解玉米蛋白质的效果较佳。双酶水解产物中新增游离氨基酸含量分别为碱性蛋白酶和氨肽酶单独水解的4．89倍、6．05倍；水解产物中多肽相对分子质量多在1000Da以下，其中500～1000Da的寡肽占14．57％。180～500Da的小肽质量分数为68．42％，水解度达65％。这些结果表明,氨肽酶和碱性蛋白酶协同水解蛋白质原料具有良好的应用前景。

关键词：重组氨肽酶底物特异性协同水解玉米蛋白质

微波与纤维素酶协同水解杨木制备还原糖的研究

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食品工业科技 2010年第10期31卷 203-206页

作者：余先纯龚铮午中南林业科技大学材料科学与工程学院湖南长沙410001 岳阳职业技术学院基础部湖南岳阳414000

以速生杨木为原料,采用微波辐射和纤维素酶协同水解制备还原糖。探讨了经过微波辐射处理后原料的粒度、酶液用量、水解温度和水解时间对还原性糖得率的影响,并采用响应面法建立二次回归模型对水解工艺进行了优化,在反应温度为50.5℃、... 详细信息

以速生杨木为原料,采用微波辐射和纤维素酶协同水解制备还原糖。探讨了经过微波辐射处理后原料的粒度、酶液用量、水解温度和水解时间对还原性糖得率的影响,并采用响应面法建立二次回归模型对水解工艺进行了优化,在反应温度为50.5℃、反应时间为20.7h、酶液用量为27U/g时,还原糖的得率可达到32.40%,比在相同工艺条件下未经微波处理的得率提高了11.87%。

关键词：还原糖得率纤维素酶微波辐射协同水解响应面分析

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化学生物法协同水解杨木制备乙酰丙酸的研究

化工新型材料 2010年第2期38卷 87-89,114页

作者：余先纯孙德林中南林业科技大学材料科学与工程学院长沙410001 岳阳职业技术学院基础部岳阳414000

采用黑曲霉和固体酸协同水解速生杨木粉制备乙酰丙酸,在相同的工艺条件下,经过酶解处理后乙酰丙酸的得率可提高5.17%。最佳酶解条件为:温度50℃、杨木粉粒度120目、酶液用量30U/g和反应时间8h。以SO42--TiO2/粘土固体酸为催化剂水解酶... 详细信息

采用黑曲霉和固体酸协同水解速生杨木粉制备乙酰丙酸,在相同的工艺条件下,经过酶解处理后乙酰丙酸的得率可提高5.17%。最佳酶解条件为:温度50℃、杨木粉粒度120目、酶液用量30U/g和反应时间8h。以SO42--TiO2/粘土固体酸为催化剂水解酶解液及残渣制备乙酰丙酸,采用响应面分析方法对反应温度、反应时间和固体酸用量等主要因素进行了优化分析,得到了合成乙酰丙酸的最佳工艺条件。研究结果显示:当反应温度为242℃、反应时间为27min、固体酸用量为4.4%时,乙酰丙酸的得率可达到23.32%。

关键词：生物酶固体酸协同水解乙酰丙酸得率响应面分析

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木聚糖酶原位协同水解预处理大米草的研究

应用化工 2020年第1期49卷 74-77,84页

作者：杨旸刘健甘礼惠龙敏南厦门大学能源学院

用氨水与双氧水预处理大米草,与原料大米草一起进行球磨,用于木聚糖酶的协同酶解。结果表明,氨水结合双氧水预处理能有效脱除大米草中的木质素(63.81%),球磨处理能对纤维素结晶结构有所破坏,两者均可有效提高木聚糖酶的水解率。酶水解... 详细信息

用氨水与双氧水预处理大米草,与原料大米草一起进行球磨,用于木聚糖酶的协同酶解。结果表明,氨水结合双氧水预处理能有效脱除大米草中的木质素(63.81%),球磨处理能对纤维素结晶结构有所破坏,两者均可有效提高木聚糖酶的水解率。酶水解物主要成分为木糖(12.54%)、木二糖(40.38%)及少量阿拉伯糖(5.50%)。碱预处理结合球磨预处理,对木聚糖酶协同水解大米草产木寡糖具有明显的促进作用。

关键词：碱预处理球磨预处理协同水解木糖木寡糖

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凡纳滨对虾虾头协同水解工艺的响应面优化

食品与机械 2010年第1期26卷 18-21页

作者：付光中章超桦吉宏武解万翠广东海洋大学食品科技学院广东湛江524025

利用风味蛋白酶协同虾头内源酶水解凡纳滨对虾虾头,制备水解度高、苦味值低的新型虾风味食品基料。以苦味感官为指标,采用响应面法研究pH、温度、底物浓度对产物水解度和苦味的影响。在pH值6.92,温度52.5℃,底物浓度为22.25g/100mL的条... 详细信息

利用风味蛋白酶协同虾头内源酶水解凡纳滨对虾虾头,制备水解度高、苦味值低的新型虾风味食品基料。以苦味感官为指标,采用响应面法研究pH、温度、底物浓度对产物水解度和苦味的影响。在pH值6.92,温度52.5℃,底物浓度为22.25g/100mL的条件下,每克虾头添加144U风味蛋白酶水解3h,与自溶水解液相比,水解度增加了6.4%,苦味值降低了48.5%,游离氨基酸总量增加了16.8%,疏水性氨基酸总量增加了4.5%。风味蛋白酶可以协同虾头内源酶水解凡纳滨对虾虾头,制备出水解度高、苦味值低的水解液。

关键词：凡纳滨对虾虾头协同水解风味蛋白酶内源酶苦味

LPMOs及新型辅助蛋白协同水解地衣多糖及其作用机制

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LPMOs及新型辅助蛋白协同水解地衣多糖及其作用机制

作者：周蕊华侨大学

学位级别：硕士

可再生生物质能源为维持全球碳循环平衡、减缓全球变暖做出了重大贡献,符合可持续发展理念。生物质原料包括纤维素、半纤维素和木质素等。其中,利用可生物降解的多糖原料(如纤维素、地衣多糖、木葡聚糖、木聚糖、葡甘聚糖等)具有重大价... 详细信息

可再生生物质能源为维持全球碳循环平衡、减缓全球变暖做出了重大贡献,符合可持续发展理念。生物质原料包括纤维素、半纤维素和木质素等。其中,利用可生物降解的多糖原料(如纤维素、地衣多糖、木葡聚糖、木聚糖、葡甘聚糖等)具有重大价值。糖苷水解酶(Glycoside hydrolases,GHs),如纤维素酶、木聚糖酶、地衣多糖酶等,通过内/外切水解糖苷键将可生物降解的多糖水解成单糖、寡糖或它们的复合物,进而生产生物燃料。但由于多糖结构复杂,单一酶往往无法实现完全转化,寻找解决方案以实现多糖完全水解至关重要。为此,本论文开展了以下研究:首先,利用氧化裂解多糖之间糖苷键的溶解性多糖单加氧酶(Lytic polysaccharide monooxygenase,LPMOs)与地衣多糖酶协同以实现多糖底物的完全水解。在大肠杆菌中成功表达了来源于细菌Micromonospora aurantiaca的LPMOs(Ma AA10),结果证明Ma AA10本身不会水解地衣多糖,而与地衣多糖酶发生协同作用时,还原糖含量增加了1.11倍。此外,Ma AA10发挥协同作用无需加入外源电子供体。同时,分步反应,即Ma AA10先预处理底物,再加入地衣多糖酶水解底物,可显著提高水解能力;与同步反应相比,相对还原糖量增加了48.8%。其次,Ma AA10与地衣多糖酶在40 h仍具有协同作用,且单酶和双酶的还原糖量分别为0.4 mg和0.512 mg,此时的双酶底物转化率为14.68%。最后,通过高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)再次证实了协同作用,即单酶和双酶的峰面积分别是48614和52018,且Ma AA10并未改变地衣多糖酶的内源水解模式,而是通过氧化裂解破坏多糖长链,以释放更多还原端,从而提高水解效率。其次,构建了一种新型辅助蛋白SCE,即类弹性蛋白多肽(Elastin-like polypeptide,ELPs)和Spy Catcher的嵌合体,实现了在大肠杆菌中的过量表达,并显著提高了地衣多糖酶的水解效率。当SCE蛋白只与地衣多糖反应时,并没有观察到还原糖含量的增加,但随着地衣多糖酶的加入,相对还原糖量增长了52%。此外,SCE蛋白与地衣多糖酶的协同体系对可溶性底物的酶活较高,但对不溶性底物的水解促进效果更好(比可溶性底物高约15%),说明在此协同体系中,地衣多糖酶的水解作用占主要地位,且SCE更倾向于促进不溶性底物的水解,这一特性与碳水化合物结合模块(carbohydrate-binding module,CBM)类似。此外,与同步反应相比,分步反应的相对还原糖量增加了19%。SCE与地衣多糖酶在8 h协同作用效果最佳,且单酶和双酶的还原糖量分别为0.100 mg和0.223mg,此时的双酶底物转化率为6.22%。同时,通过生物信息学分析,亲和凝胶电泳和色氨酸荧光发射试验证实了SCE蛋白可以与地衣多糖底物结合。基于此,提出了SCE蛋白与底物及酶的可能作用机制。最后通过HPLC再次验证了协同效果,即单酶和双酶的峰面积分别是20362和38584,且SCE并未改变地衣多糖酶的内源水解模式,而是通过与底物结合,促使底物更接近地衣酶的催化结构域,从而提高它们的水解效率。与LPMOs相比,SCE蛋白更易制备,无需外源电子供体,促进效果更好,耗时短且过程稳定,因此在生物燃料和生物炼制中具有巨大的应用潜力。本研究成功构建并优化了两个地衣多糖酶协同体系(Ma AA10/Bgl SE和SCE/Bgl SE),分析了二者的水解模式,最后借助生物信息学分析和实验验证了SCE的作用机制,后者作为一种全新的协同体系,在生物炼制及生物燃料的生产中更具潜力,可为实现生物质的完全降解提供新思路。

关键词：地衣多糖酶溶解性多糖单加氧酶碳水化合物结合模块协同水解生物质降解

碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶协同水解大豆蛋白的研究

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中外食品工业（下） 2014年第5期 85-87页

作者：董翠翠新疆阿勒泰畜牧兽医职业学校新疆阿勒泰836500

利用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶分别水解大豆蛋白，制备具大豆多肽，通过正交优化试验确定碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶协同水解的最佳水解条件，考察底物浓度、反应时间、反应温度、PH值与碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶协同水解大豆蛋白的影响，为更... 详细信息

利用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶分别水解大豆蛋白，制备具大豆多肽，通过正交优化试验确定碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶协同水解的最佳水解条件，考察底物浓度、反应时间、反应温度、PH值与碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶协同水解大豆蛋白的影响，为更好地利用大豆蛋白奠定基础。

关键词：碱性蛋白酶木瓜蛋白酶协同水解大豆蛋白

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内切酶与端肽酶协同水解大豆蛋白的研究

食品信息与技术 2004年第8期 18-18页

作者：朱海峰

碱性蛋白酶-风味蛋白酶协同对葵花籽蛋白水解度和苦味值的影响

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农业机械 2013年第18期 42-45页

作者：罗鹏王越李雅婷何东平华中农业大学食品科技学院石河子大学食品学院武汉轻工大学

以冷榨葵花籽粕为原料,采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶协同对葵花籽蛋白进行水解,以蛋白质的水解度为评价指标,通过单因素试验和正交试验优化葵花籽蛋白的最佳酶解工艺参数。试验结果表明:酶底比(E∶S)3.6%、pH值8.0、酶解温度52℃,碱性蛋... 详细信息

以冷榨葵花籽粕为原料,采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶协同对葵花籽蛋白进行水解,以蛋白质的水解度为评价指标,通过单因素试验和正交试验优化葵花籽蛋白的最佳酶解工艺参数。试验结果表明:酶底比(E∶S)3.6%、pH值8.0、酶解温度52℃,碱性蛋白酶∶风味蛋白酶为2∶1和酶解时间130min,水解度可达34.55%;并通过苦味感官试验发现双酶协同作用下酶解液的苦味值为2,苦味不太明显。

关键词：碱性蛋白酶风味蛋白酶协同水解水解度