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镉诱导华溪蟹不同组织金属硫蛋白表达及镉蓄积的研究

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环境科学学报 2008年第6期28卷 1192-1197页

作者：马文丽王兰何永吉颜涛山西大学生命科学与技术学院太原030006

为了系统研究镉诱导华溪蟹不同组织(肝胰腺,腮)金属硫蛋白(MT)表达及镉蓄积状况,并探讨二者之间的关系,采用体外镉暴露法处理华溪蟹,用镉-血红蛋白饱和法和火焰原子吸收分光光度法(AAS)分别测定华溪蟹肝胰腺及腮中镉蓄积及MT表达含量.... 详细信息

为了系统研究镉诱导华溪蟹不同组织(肝胰腺,腮)金属硫蛋白(MT)表达及镉蓄积状况,并探讨二者之间的关系,采用体外镉暴露法处理华溪蟹,用镉-血红蛋白饱和法和火焰原子吸收分光光度法(AAS)分别测定华溪蟹肝胰腺及腮中镉蓄积及MT表达含量.结果显示,暴露期间动物死亡率低于9.2%,体重未见显著变化.不同浓度镉暴露下,华溪蟹体内镉蓄积及金属硫蛋白表达具有明显组织差异,且呈现一定的时间-效应与剂量-效应关系.鳃中镉蓄积量高于肝胰腺且最高达到(15.41±3.21)μg·g-1;而肝胰腺中MT表达量高于鳃,最高达到(97.18±11.83)μg·g-1.通过鳃及肝胰腺中MT的镉结合率计算,显示肝胰腺中的镉可完全被MT结合,而鳃中镉蓄积量远远大于MT结合能力.

关键词：镉金属硫蛋白华溪蟹鳃肝胰腺

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基于多核基因标记的华溪蟹属系统发生研究

基于多核基因标记的华溪蟹属系统发生研究

作者：马晓萍南京师范大学

学位级别：硕士

华溪蟹属是东亚地区物种丰富度高且分布广泛的淡水蟹类,也是中国的特有属,常被用作探索进化驱动因素和研究淡水蟹生态系统中现存生物多样性形成等历史事件的模型。本论文广泛的采样包括了将近86%的已知华溪蟹属类群,几乎涵盖了其整个分... 详细信息

华溪蟹属是东亚地区物种丰富度高且分布广泛的淡水蟹类,也是中国的特有属,常被用作探索进化驱动因素和研究淡水蟹生态系统中现存生物多样性形成等历史事件的模型。本论文广泛的采样包括了将近86%的已知华溪蟹属类群,几乎涵盖了其整个分布区。之前对华溪蟹属的系统发生研究主要是基于少数几条线粒体和核基因标记,而基于这些分子标记的数据分析显示了物种水平非单系性的高发生率。首次重建的华溪蟹属系统发生重建提示了核基因标记的信息在加强该属端部系统发生关系中的重要作用。分类单元的取样量和分子标记的数量都会对系统发生关系的重建起到重要影响。更多的分子标记和更广泛的取样将有助于解决华溪蟹属内部的系统发生关系。本研究使用了本实验室开发的多核基因标记、并增加了物种取样来揭示华溪蟹属系统发生、系统地理和多样化历史的更多细节。本研究使用的样本共包括68种已描述的华溪蟹物种(包括5个亚种)和5个未描述种,约占华溪蟹属已知物种数(80个已描述种和5个未描述种)的86%。本研究开发了适用于华溪蟹属类群的59个核基因标记。基于59个核基因的联合数据集,使用最大似然法和贝叶斯方法重建了华溪蟹属的系统发生关系,进行了基于校准点的分歧时间估计。这些核基因标记可以作为华溪蟹属系统发生研究的工具。本研究同时结合过去研究中使用过的基因标记进行了相关分析。本研究主要得到如下结果和结论:1.经典的华溪蟹属以及龙溪蟹属不单系性。剔除小华溪蟹的经典华溪蟹属是一个单系群。2.有关华溪蟹属分类厘定的建议如下:1)以小华溪蟹为模式种,建立小华溪蟹属(属名待定);2)保留经典的华溪蟹属之属名,类群包括除小华溪蟹以外的其他所有华溪蟹;3)新立3个亚属。将盆地圆叶组归为指名亚属Sinopotamon(Sinopotamon)(Bott,1967),组成成分与狭义华溪蟹属***.的组成相同;将龙溪蟹属降为亚属Sinopotamon(Longpotamon)(Shih,Huang&Ng 2016),类群包括除小华溪蟹、保康华溪蟹和指名亚属之外的其余华溪蟹;新立匙指亚属Cochlearidigitum(Dai et,1986),包括保康华溪蟹、匙指华溪蟹和凹指华溪蟹。

关键词：华溪蟹多核基因标记系统发生关系系统分类

重组华溪蟹金属硫蛋白在SUMO融合系统中的表达与纯化及金属螯合能力的研究

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重组华溪蟹金属硫蛋白在SUMO融合系统中的表达与纯化及金属螯合能...

作者：武阳山西大学

学位级别：硕士

金属硫蛋白(Metallothionein, MT)是一类富含半胱氨酸、低分子量(2～7kDa)、无芳香族氨基酸和组氨酸、能与金属结合的非常独特的蛋白质,它在生物界中广泛分布。近年来的研究表明,MT参与体内微量元素的储存、转运和代谢,拈抗电离辐射、... 详细信息

金属硫蛋白(Metallothionein, MT)是一类富含半胱氨酸、低分子量(2～7kDa)、无芳香族氨基酸和组氨酸、能与金属结合的非常独特的蛋白质,它在生物界中广泛分布。近年来的研究表明,MT参与体内微量元素的储存、转运和代谢,拈抗电离辐射、清除自由基以及对重金属的解毒作用。甲壳类动物的MT发现相对较晚。研究表明,MT可以通过其大量的Cys残基螯合重金属并清除活性氧,使动物体免受氧化损伤,参与动物的发育、抵抗逆境胁迫等多种生理过程,是一种重要的功能蛋白。本课题组在前期承担的国家自然科学基金(No.30640051)中,系统地研究了华溪蟹主要组织MT表达情况以及与重金属蓄积的关系,并完成了镉诱导河南华溪蟹(Sinopotamon henanense) MT cDNA全长序列的克隆。在此基础上,本研究采用PCR扩增技术,将克隆得到的MT基因两端加上酶切位点,然后使用基因重组技术将获得的MT基因分别克隆至pET28a、 pET28a-SUMO和pGEX-6p-1三个表达载体上,构成重组表达载体,测序公司的测序结果证明三种重组表达载体均构建成功。将三种重组表达载体分别转入大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,诱导表达目的蛋白,收集菌体超声波破壁后的上清液,经SDS-PAGE分析表明,IPTG成功诱导了MT蛋白的表达,并且根据SDS-PAGE电泳结果比较分析三种重组质粒中MT的表达量,最终确定MT在SUMO融合表达系统中可溶性表达量更高。通过研究诱导温度、诱导时间和诱导浓度三个条件对MT融合蛋白表达量的影响,优化了SUMO原核表达系统的诱导表达条件,最终确定在37℃条件下使用1mmolIPTG诱导6小时,MT融合蛋白的可溶性表达量最高。用SUMO表达系统获得的MT融合蛋白携带有his标签,使用Ni亲和层析法纯化MT融合蛋白,经咪哗缓冲液洗脱后,收集纯化蛋白,经SDS-PAGE电泳分析表明蛋白纯化效果较好,去除大部分的杂蛋白,获得了较纯的MT融合蛋白。本论文采用定点突变技术,对MT的一级结构经行了部分改造,构建了两种突变体SUMO-MTt1和SUMO-MTt2,诱导表达SUMO-MTt1SUMO-MTt2, SUMO-MT和GST-MT四种融合蛋白,在诱导的过程中分别加入终浓度为300μMn的Cu、Cd、Zn三种重金属离子,诱导完成后用火焰原子及收光谱法,测定了表达菌体中重组MT对Cu、Cd、 Zn种金属的吸附能力。结果表明,与空菌体比较,4种MT融合蛋白对Cu、Cd、Zn三种金属离子具有很明显的结合能力,但是每一种MT融合蛋白对不同的金属离子的结合能力是有差异的。总体来看,四种MT融合蛋白对Cd的吸收量最大,而对Zn和Cu的吸收能力相近。比较四种蛋白对同种金属离子的吸收量可以看出,经过一级结构改造的突变体比未突变的蛋白结合能力更强,尤其是在对Cd2+的吸收能力上，SUMO-MTt1比未改造的SUMO-MT有明显的提高,这可能与Cys的数量、位置以及中间连接区的长短有关。

关键词：华溪蟹金属硫蛋白原核表达载体 SUMO表达系统基因重组分离纯化金属螯合能力

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华溪蟹浸渍标本的制作

广东蚕业 2019年第6期53卷 112-113页

作者：侯孟春樊轲四川省阿坝州汶川县水磨镇阿坝师范学院资源与环境学院四川汶川623000 北京市海淀区学院路中国矿业大学(北京)力建学院北京100000

文章讨论了蟹类浸渍标本的制作过程,增强了同学们的动手能力,也从实验中探索出了更高效快捷的制作蟹类动物浸渍标本的方法和在制作标本过程中应当注意的问题。与此同时学生进一步了解了华溪蟹以及其他蟹类动物,方便在今后的学习中学会... 详细信息

文章讨论了蟹类浸渍标本的制作过程,增强了同学们的动手能力,也从实验中探索出了更高效快捷的制作蟹类动物浸渍标本的方法和在制作标本过程中应当注意的问题。与此同时学生进一步了解了华溪蟹以及其他蟹类动物,方便在今后的学习中学会辨认蟹类动物,保护珍惜品种。

关键词：华溪蟹标本制作探究

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华溪蟹几丁质的提取与壳聚糖的制备

华溪蟹几丁质的提取与壳聚糖的制备

武夷山自然保护区携带肺吸虫囊蚴的华溪蟹属(Sinopotamon)一新种记述(十足目:华溪蟹科)

2004年甲壳动物学分会会员代表大会暨学术年会

作者：王金香王兰山西大学生命科学与技术学院

几丁质Chitin,是自然界中仅次于纤维素的第二大类天然高分子化合物,广泛存在于部分菌类的细胞壁和节肢动物的外骨骼中,全球自然生成量约在千亿吨以上。由于几丁质及其衍生物具有抗菌、抑菌、降血糖、防癌、抑癌等功效,因而具有极大的开... 详细信息

几丁质Chitin,是自然界中仅次于纤维素的第二大类天然高分子化合物,广泛存在于部分菌类的细胞壁和节肢动物的外骨骼中,全球自然生成量约在千亿吨以上。由于几丁质及其衍生物具有抗菌、抑菌、降血糖、防癌、抑癌等功效,因而具有极大的开发价值。

关键词：几丁质华溪蟹壳聚糖

来源： cnki会议评论

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武夷科学 1985年第1期7卷 141-146页

作者：李友松林金祥程由注汤剑华福建省寄生虫病研究所邵武市卫生防疫站

作者等于1984年11月在武夷山自然保护区进行肺吸虫病病原学及人群感染调查时,发现当地有三种溪蟹,其体内均发现有卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani Kerbert,1878)和三平正并殖吸虫(Euparagonimus cenocopiosus Chen,1962)的囊蚴。... 详细信息

作者等于1984年11月在武夷山自然保护区进行肺吸虫病病原学及人群感染调查时,发现当地有三种溪蟹,其体内均发现有卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani Kerbert,1878)和三平正并殖吸虫(Euparagonimus cenocopiosus Chen,1962)的囊蚴。这三种溪蟹是:福建华溪蟹(Sinopotamon fujianense Dai et Chen,1979)、福建马来溪蟹(Malayopotamon fukienense Dai et Lin,1979)和武夷华溪蟹。最后一种是一个新种,

关键词：华溪蟹 Sinopotamon 武夷山自然保护区福建省肺吸虫

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肺吸虫囊蚴感染华溪蟹一例报告

动物学杂志 1984年第6期 45-45页

1983年8月下旬,我们在江西万载县官元山采育林场的三洋坑溪内,捕获一只重约26克的雄性华溪蟹。为了解肺吸虫囊蚴感染情况,将蟹分为螯肢、步肢和胸体部三份,用直接分离检查法检出囊蚴并分别计数。现将结果报告如下。整只蟹共检出囊蚴6,... 详细信息

1983年8月下旬,我们在江西万载县官元山采育林场的三洋坑溪内,捕获一只重约26克的雄性华溪蟹。为了解肺吸虫囊蚴感染情况,将蟹分为螯肢、步肢和胸体部三份,用直接分离检查法检出囊蚴并分别计数。现将结果报告如下。整只蟹共检出囊蚴6,599只,其中螯肢部检出933只,占总数的15.05％,步肢部检出2,175

关键词：肺吸虫囊蚴华溪蟹

基于16S rRNA初步探讨福建华溪蟹与修水华溪蟹间的遗传分化

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中国人兽共患病学报 2012年第3期28卷 213-216,222页

作者：石林波汪雁邹节新朱春潮张小燕周宪民南昌大学医学院寄生虫学教研室南昌330006 南昌大学医学院医学遗传与细胞生物学实验室南昌330006

目的探讨***与***间的的遗传分化。方法采用PCR结合DNA测序技术,测定两种华溪蟹***与***线粒体16SrRNA基因序列的组成和变异。经比对获得513bp的核苷酸序列,以分析***与***间的的遗传分化。结果数据显示***和***两个群体之间的遗传距离... 详细信息

目的探讨***与***间的的遗传分化。方法采用PCR结合DNA测序技术,测定两种华溪蟹***与***线粒体16SrRNA基因序列的组成和变异。经比对获得513bp的核苷酸序列,以分析***与***间的的遗传分化。结果数据显示***和***两个群体之间的遗传距离为0.032±0.006,遗传分化指数(Fst)为0.70336,基因流(Nm)为0.11。结论这表明两群体间高度分化,基因交流很少。重建的系统发生显示它们各自形成独立的分支,这与形态学鉴定结果基本一致。

关键词：华溪蟹 16S rRNA基因遗传分化

镉对长江华溪蟹精子发生过程中细胞核超微结构的影响

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中国水产 2003年第2期327卷 58-60页

作者：张彰王茜山西医科大学电镜室 030001 山西大学生命科学与技术学院 030001

目前,由于重金属污染水体引起水生生物中毒情况时有发生,因此,对重金属的毒理研究已越来越为人们所重视,而重金属对生物生殖系统的毒性研究更是研究的重点.细胞核作为真核细胞中最大的细胞器,是遗传物质的贮存场所,是细胞进行遗传与代... 详细信息

目前,由于重金属污染水体引起水生生物中毒情况时有发生,因此,对重金属的毒理研究已越来越为人们所重视,而重金属对生物生殖系统的毒性研究更是研究的重点.细胞核作为真核细胞中最大的细胞器,是遗传物质的贮存场所,是细胞进行遗传与代谢等生命活动的调控中心,在细胞分裂过程中起着相当重要的作用.

关键词：镉长江华溪蟹精子发生过程细胞核超微结构