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半枝莲提取物通过Hippo/YAP通路抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖、侵袭转移和成瘤能力的研究

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中华中医药杂志 2017年第7期32卷 2947-2951页

作者：蔡芸芸高嵩刘鲁明宋利斌花永强王鹏陈震复旦大学附属肿瘤医院中西医结合科上海200032 复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032

目的:探索半枝莲提取物(SBE)对胰腺癌PANC-1细胞的增殖、侵袭转移和成瘤能力的影响及其机制。方法:以不同浓度(0、10、50、100、200μg/m L)的SBE干预人胰腺癌PANC-1细胞系48h后,应用CCK-8法、流式细胞术及Annexin V/PI双染色法、Transw... 详细信息

目的:探索半枝莲提取物(SBE)对胰腺癌PANC-1细胞的增殖、侵袭转移和成瘤能力的影响及其机制。方法:以不同浓度(0、10、50、100、200μg/m L)的SBE干预人胰腺癌PANC-1细胞系48h后,应用CCK-8法、流式细胞术及Annexin V/PI双染色法、Transwell细胞侵袭实验分别测定SBE对胰腺癌PANC-1细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响;Western blot法和免疫组化方法分别检测细胞和瘤体组织中Hippo通路关键蛋白YAP、p-YAP的表达。结果:与空白组比较,不同浓度的SBE能够显著抑制PANC-1增殖、迁移和侵袭能力;动物实验结果表明,相对于对照组,SBE可显著抑制胰腺癌在裸鼠体内生长,裸鼠瘤体的体积变小、重量相对较低;免疫组化结果提示SBE可影响肿瘤组织中YAP、p-YAP蛋白的表达,Western bolt结果趋势与之一致。结论:SBE可显著抑制体外胰腺癌PANC-1细胞的增殖、侵袭转移以及在裸鼠体内的成瘤能力,Hippo/YAP通路关键蛋白可能是SBE作用于胰腺癌治疗的重要靶点之一。

关键词：胰腺癌半枝莲提取物 Hippo/YAP通路

半枝莲提取物对肝癌HuH-7细胞自噬的影响及其作用机制

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中国生物制品学杂志 2022年第12期35卷 1465-1470页

作者：王娟霞鲁佳敏吴瑞郭佳敏门碧莹黄子龙兰州大学第二医院感染科甘肃兰州730030 兰州大学第二临床医学院甘肃兰州730000

目的探讨半枝莲提取物对肝癌HuH-7细胞自噬的影响,并分析自噬在半枝莲提取物调节HuH-7细胞生长抑制中的作用机制。方法分别用100、200、500、1000和1500μg/mL浓度的半枝莲提取物以及500μg/mL半枝莲提取物+5 mol/L 3-Methyladenine(3-... 详细信息

目的探讨半枝莲提取物对肝癌HuH-7细胞自噬的影响,并分析自噬在半枝莲提取物调节HuH-7细胞生长抑制中的作用机制。方法分别用100、200、500、1000和1500μg/mL浓度的半枝莲提取物以及500μg/mL半枝莲提取物+5 mol/L 3-Methyladenine(3-MA)处理HuH-7细胞24 h,设不加半枝莲提取物对照组。CCK-8试验检测各组细胞活力,确定最适半枝莲提取物处理浓度,并检测半枝莲提取物及3-MA逆转半枝莲提取物对HuH-7细胞活力的影响;激光共聚焦试验和Western blot法检测半枝莲提取物及3-MA逆转半枝莲提取物对HuH-7细胞自噬的影响;流式细胞术检测半枝莲提取物及3-MA逆转半枝莲提取物对HuH-7细胞凋亡的影响;Western blot法检测半枝莲提取物对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。结果500μg/mL半枝莲提取物抑制HuH-7细胞活性40%左右,作用浓度适中,选择该浓度处理HuH-7细胞。与对照组相比,500μg/mL半枝莲提取物可明显诱导LC3B斑点的形成(F=2.597,P半枝莲提取物组相比,500μg/mL半枝莲提取物+5 mol/L 3-MA细胞LC3B斑点形成明显降低(F=1.180,P半枝莲提取物可明显抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性。结论半枝莲提取物可通过激活自噬抑制肝癌HuH-7细胞生长,其机制可能与对PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制相关。

关键词：半枝莲提取物自噬肝癌 PI3K/AKT/mTOR信号通路

半枝莲提取物对LoVo细胞增殖及侵袭能力的影响

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时珍国医国药 2014年第11期25卷 2629-2631页

作者：陈志成史仁杰东南大学附属中大医院江苏南京210009

目的探讨半枝莲提取物(SBE)对LoVo细胞增殖及侵袭能力的影响及其可能机制。方法分别用1.1,2.2mg/ml的SBE处理LoVo细胞,以不加SBE的LoVo细胞作对照,同时以5-氟尿嘧啶(5-FU)5μg/ml作为阳性对照组(5-FU组)。MTT法检测处理后72h内细胞增殖... 详细信息

目的探讨半枝莲提取物(SBE)对LoVo细胞增殖及侵袭能力的影响及其可能机制。方法分别用1.1,2.2mg/ml的SBE处理LoVo细胞,以不加SBE的LoVo细胞作对照,同时以5-氟尿嘧啶(5-FU)5μg/ml作为阳性对照组(5-FU组)。MTT法检测处理后72h内细胞增殖能力的变化,细胞克隆形成实验和侵袭实验分别观察细胞克隆形成能力和侵袭能力的变化,Westernblot检测细胞Twist和E-钙粘素蛋白的表达。结果与对照组相比,5-FU组和SBE高剂量组的LoVo细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力均明显降低,E-钙粘素表达增加,Twist蛋白表达减少(P<0.05)。结论2.2mg/ml的SBE对LoVo细胞增殖和侵袭能力的抑制作用可能与上调E-钙粘素、下调Twist蛋白的表达有关。

关键词：半枝莲提取物 E-钙粘素 Twist蛋白

半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素蛋白表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2011年第10期17卷 155-158页

作者：梁宪梅夏春波桂林市第二人民医院呼吸内科广西桂林541001 桂林医学院人体解剖学教研室广西桂林541004

目的:研究半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素(survivin)蛋白表达的影响及其作用机制。方法:体外培养(10%胎牛血清、1640培养基)肺癌A549细胞,MTT法观察半枝莲提取物对A549细胞的抑制作用,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学(SP)法检测半... 详细信息

目的:研究半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素(survivin)蛋白表达的影响及其作用机制。方法:体外培养(10%胎牛血清、1640培养基)肺癌A549细胞,MTT法观察半枝莲提取物对A549细胞的抑制作用,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学(SP)法检测半枝莲提取物对A549细胞survivin蛋白表达的影响。结果:MTT法结果显示,半枝莲提取物质量浓度5～40 mg·L-1对A549细胞的抑制率呈浓度依赖性(P半枝莲提取物18.86 mg·L-1剂量组凋亡指数为(38.40±7.41)%,对照组为(6.22±0.45)%,两者有显著性差异(P半枝莲提取物组survivin蛋白阳性细胞数明显低于对照组(P半枝莲提取物能明显抑制肺癌A549细胞生长,其机制可能与下调survivin表达有关。

关键词：半枝莲提取物肺癌细胞生存素蛋白凋亡

半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及与内质网应激的关系

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半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及与内质网应激的关...

作者：李秋平南华大学

学位级别：硕士

目的:以肺癌A549细胞作为研究对象,探讨半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及与内质网应激之间的关系。方法:采用体外培养的肺癌A549细胞进行实验。1、观察不同浓度半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响:将实验分为4组,... 详细信息

目的:以肺癌A549细胞作为研究对象,探讨半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及与内质网应激之间的关系。方法:采用体外培养的肺癌A549细胞进行实验。1、观察不同浓度半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响:将实验分为4组,A组:阴性对照组、B组:半枝莲提取物10mg/L、C组:半枝莲提取物20mg/L、D组:半枝莲提取物40mg/L,各组分别处理不同时间(24、48、72 h)后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western blot检测各组内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白(GRP78/Bip)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)蛋白的表达情况。2、探讨半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响与内质网应激的关系:将实验分为3组,A组:阴性对照组、B组:半枝莲提取物最佳浓度(SBE40mg/L)组、C组:半枝莲提取物最佳浓度(SBE40mg/L)+4-PBA抑制剂组;分别处理不同时间(24、48、72 h)后,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组GRP78/Bip、CHOP和Caspase-12蛋白的表达。结果:1、不同浓度半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响:(1)与阴性对照组相比,给予不同浓度(10mg/L、20mg/L、40mg/L)半枝莲提取物分别处理肺癌A549细胞242 h均可显著抑制其增殖,且具有时间剂量依赖性,差异有统计学意义(P半枝莲提取物处理肺癌A549细胞48小时后,凋亡率均明显高于未给予半枝莲提取物处理的阴性对照组,差异有统计学意义(P半枝莲提取物组GRP78/Bip、CHOP和Caspase-12的表达均明显增高,差异有统计学意义(P半枝莲提取物对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响与内质网应激之间的关系:加入ERS抑制剂(4-PBA)后,较未加入4-PBA组,肺癌A549细胞的增殖抑制率明显下降,差异有统计学意义(P半枝莲提取物具有抑制肺癌A549细胞增殖及促进细胞凋亡的作用。2、半枝莲提取物可能通过内质网应激途径抑制肺癌A549细胞的增殖并促进其凋亡。

关键词：半枝莲提取物肺癌A549细胞内质网应激

以STAT3信号通路为靶点探索半枝莲提取物的抗癌分子机制

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以STAT3信号通路为靶点探索半枝莲提取物的抗癌分子机制

作者：刘鹏兰州大学

学位级别：硕士

半枝莲是一种广泛应用于临床的清热解毒类中草药,也被广泛用于多种癌症的辅助治疗。研究也证明半枝莲提取物能够有效抑制多种癌细胞的生长和存活,并引起细胞凋亡,而半枝莲对肿瘤相关信号通路的影响则尚未见报道。STAT3信号通路是迄今为... 详细信息

半枝莲是一种广泛应用于临床的清热解毒类中草药,也被广泛用于多种癌症的辅助治疗。研究也证明半枝莲提取物能够有效抑制多种癌细胞的生长和存活,并引起细胞凋亡,而半枝莲对肿瘤相关信号通路的影响则尚未见报道。STAT3信号通路是迄今为止研究的最为透彻的促癌信号通路之一,参与肿瘤发生、发展和恶化的几乎所有关键步骤。大量研究证明抑制STAT3信号通路能够显著抑制癌细胞的生存、增殖和转移等。因而探索半枝莲提取物对STAT3信号通路的抑制效果将有助于深入理解其抗癌分子机制。首先我们利用现代植物化学技术对半枝莲全草进行了醇提和乙酸乙酯萃取,并得到了不同的提取组分。Western Blotting检测发现半枝莲乙酸乙酯萃取物(BE)对STAT3的酪氨酸磷酸化有特异性的抑制作用,而且BE能够选择性抑制STAT3依赖型的人前列腺癌DU145细胞的增殖,而对STAT3组成型活化水平较低的癌细胞和正常来源的细胞具有较低的细胞毒性,这初步证明BE可以通过抑制STAT3信号通路来发挥其抗癌活性。HPLC分析发现BE含有两种已知黄酮类STAT3抑制剂木犀草素和芹菜素,但经检测,二者叠加产生的信号抑制和细胞生长抑制效果均不及BE显著,这说明BE产生的STAT3信号抑制并不是来自单一化学成分的简单叠加。基于以上结果,我们对BE的信号抑制活性和体外抗癌效果进行了细胞水平验证。在STAT3依赖的DU145细胞中,BE能够显著抑制其持续的STAT3组成型活化,以50μg/mL的浓度处理15min即能对P-STAT3产生明显的抑制效果,且具有时间和剂量依赖性;而在STAT3组成型活化水平很低的LNCaP细胞中,用10μg/mL BE预处理LNCaP细胞2h即能显著遏制IL-6对STAT3磷酸化的激活,且呈剂量依赖性;BE还能强烈抑制由IL-6刺激的STAT3核转位;下调STAT3调控的周期相关蛋白(CDK2和cyclin B)和抗凋亡蛋白(Bcl-2、Bcl-XL和Survivin)的表达,从而引起G2/M周期阻滞和Caspase介导的细胞凋亡。在经典的STAT3信号通路中,STAT3的活化往往依赖于其上游JAK激酶的活化。进一步研究证明BE能有效抑制组成型和IL-6激活型JAK2的磷酸化。而且BE对p-JAK2的抑制先于对p-STAT3的抑制,引起明显p-JAK2抑制效果的浓度也低于STAT3磷酸化抑制的浓度,这表示BE可能是通过抑制JAK2的活化来达到其STAT3信号通路阻断效果的。为进一步验证和评估BE对STAT3信号的抑制效果和抗癌功效,我们构建了BALB/c-4T1小鼠乳腺癌模型来检测其体内活性。实验小鼠分为正常组(溶剂灌胃刺激)、肿瘤组(溶剂灌胃刺激)、预防组(接种肿瘤细胞前7天开始灌胃BE,25mg/Kg)和治疗组(接种肿瘤细胞后3天开始灌胃BE,50mg/Kg)。每日灌胃一次并记录体重,肿瘤细胞接种21天后处死小鼠,制备血清和摘取瘤块进行后续病理分析。结果证明,无论是预防性给药还是治疗性给药,BE都能够显著抑制4T1肿瘤的生长,抑瘤率分别达到了45.1%和31.6%,且预防给药能够起到更好的抑制效果。给药组小鼠血清中乳腺癌标志物CA153的含量明显低与肿瘤组;免疫组化和肿瘤组织蛋白Western Blotting分析显示BE可以显著抑制肿瘤组织中KI-67和Survivin的表达,并且促进Caspase-3的裂解活化。冰冻切片免疫荧光染色、免疫组化和肿瘤组织蛋白Western Blotting分析共同证明,BE能够显著抑制肿瘤组织中p-STAT3的表达和入核,这更加有力的证明了BE以STAT3信号为靶点的抗癌效果。综上所述,通过体外和体内水平的实验检测,证实BE能够有效抑制JAK2/STAT3信号通路的持续活化,从而抑制STAT3依赖型肿瘤的生长并促进凋亡。这一研究结果为我们进一步研究半枝莲提取物的抗癌作用机理打下了基础,也为中草药现代化研究提供了新的理论依据。而确切的作用靶点探索和后续的有效成分解析则值得进一步深入研究。

关键词：半枝莲提取物 STAT3 信号抑制抗肿瘤体内活性

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半枝莲提取物质量标准研究

四川中医 2018年第5期36卷 75-76页

作者：徐克明陈帅袁崇均罗森王笳重庆市开县人民医院药剂科重庆405400 四川省中医药科学院四川成都610041

目的:建立半枝莲提取物的质量标准。方法:采用TLC进行定性鉴别,检查干燥失重,测定总黄酮及野黄芩苷的含量。结果:TLC斑点清晰,分离度好。总黄酮、野黄芩苷含量测定方法可行。结论:该方法简便准确,可用于半枝莲提取物的质量标准。

关键词：半枝莲提取物总黄酮野黄芩苷 TLC HPLC

半枝莲提取物对黄曲霉素B_1所诱发肝癌Notch1的影响

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世界中医药 2015年第1期10卷 83-85页

作者：蔡林雪刘澍楠福建医科大学药学院药物分析系福州350004 福州总院四七六医院福州350001

目的:探讨半枝莲提取物(ESB)对黄曲霉素B1所诱发的肝癌大鼠Notch1的影响。方法:选取60只Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、半枝莲提取物低、高剂量组,每组15只。建立用黄曲霉素B1所诱发的肝癌大鼠的动物模型。其中空白组与模型组给... 详细信息

目的:探讨半枝莲提取物(ESB)对黄曲霉素B1所诱发的肝癌大鼠Notch1的影响。方法:选取60只Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、半枝莲提取物低、高剂量组,每组15只。建立用黄曲霉素B1所诱发的肝癌大鼠的动物模型。其中空白组与模型组给予蒸馏水灌胃,半枝莲提取物低、高剂量组给予不同浓度的ESB灌胃治疗。灌胃1次/d,连续治疗1个月。治疗结束后将所有大鼠处死,观察各组大鼠的体质量、肝表面的结节数,并取肝组织采用免疫组化法检测肝组织中Notch1的表达情况。结果:与空白组比较,模型组和ESB低、高剂量组大鼠的体质量明显降低(P半枝莲提取物能够有效的抑制肝癌的恶化,其机制可能与下调肝组织中Notch1有关。

关键词：半枝莲提取物黄曲霉素B1 肝癌 Notch1

半枝莲提取物对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

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浙江中医杂志 2015年第10期50卷 762-764页

作者：李海龙高秀飞吴越王蓓浙江中医药大学附属第一医院浙江杭州310006

目的:观察半枝莲提取物对体外生长的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法:采用系统溶剂法初步提取分离半枝莲不同有效部位,运用生长曲线法观察不同浓度的半枝莲各提取物对体外培养的MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,并以流式细... 详细信息

目的:观察半枝莲提取物对体外生长的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法:采用系统溶剂法初步提取分离半枝莲不同有效部位,运用生长曲线法观察不同浓度的半枝莲各提取物对体外培养的MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,并以流式细胞仪检测其对MDA-MB-231细胞周期的影响。结果:半枝莲石油醚提取物、半枝莲乙酸乙酯萃取物和半枝莲水提取对MDA-MB-231细胞生长均有明显抑制作用,半枝莲石油醚提取物抑制作用最强(P半枝莲的石油醚、乙酸乙酯提取物均可提高体外生长MDA-MB-231细胞G1期细胞比率,降低S期和G2细胞数。结论:半枝莲石油醚萃取物、乙酸乙酯提取物和半枝莲水提物对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用。

关键词：半枝莲提取物 MDA-MB-231细胞细胞增殖细胞周期