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半月板纤维软骨细胞接种脱钙松质骨支架构建组织工程半月板的方法选择

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中国运动医学杂志 2016年第1期35卷 5-10页

作者：张正政王少杰齐岩松张继英江东余家阔北京大学第三医院运动医学研究所北京100191

目的：探讨半月板纤维软骨细胞（MFCs）接种脱钙松质骨（DCB）支架的最佳接种方法。方法：实验分静滴法、注射法、离心法、负压法等4组。取兔MFCs,采用上述4种方法对孔隙率为80%、平均孔径为268μm的DCB支架进行细胞接种。Live/Dead染... 详细信息

目的：探讨半月板纤维软骨细胞（MFCs）接种脱钙松质骨（DCB）支架的最佳接种方法。方法：实验分静滴法、注射法、离心法、负压法等4组。取兔MFCs,采用上述4种方法对孔隙率为80%、平均孔径为268μm的DCB支架进行细胞接种。Live/Dead染色检测其细胞活性,并通过软件分析其细胞分布情况。CCK-8法和Hoechst 33258法检测支架内MFCs增殖情况和支架内DNA含量。结果：通过Live/Dead染色显示,离心法接种细胞后其存活率优于其他3组（P〈0.05）;细胞分布均匀,由浅至深各层细胞比例无明显统计学差异（P〉0.05）;1~5天细胞增殖能力优于其他3组（P〈0.05）,14~21天支架DNA含量亦优于其他3组（P〈0.05）。结论：离心法可以明显提高MFCs在DCB上的细胞分布和细胞增殖能力,是一种简单、高效的,利于组织工程半月板（TEM）构建的接种方法。

关键词：组织工程半月板接种方法半月板纤维软骨细胞脱钙松质骨

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兔半月板纤维软骨细胞的体外去分化研究

中国运动医学杂志 2015年第1期34卷 31-36页

作者：付维力李箭李棋唐新陈刚四川大学华西医院骨科成都610041

目的：比较研究不同代次间兔半月板纤维软骨细胞生物学特性的改变,为构建组织工程半月板和细胞治疗中的种子细胞优选提供进一步的理论和实践基础。方法：采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传... 详细信息

目的：比较研究不同代次间兔半月板纤维软骨细胞生物学特性的改变,为构建组织工程半月板和细胞治疗中的种子细胞优选提供进一步的理论和实践基础。方法：采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第5代。采用相差倒置显微镜和SEM观察各代细胞的形态变化和超微结构,MTT法检测细胞增殖情况并描绘生长曲线,采用细胞化学染色和免疫组化鉴定细胞分泌的蛋白聚糖和Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白。结果：半月板纤维软骨细胞原代接种后8～12 h开始贴壁,48～72h大部分细胞贴壁,胞质逐渐展开,细胞变大伸长,形成突起,呈多角形,细胞形态规则,轮廓清晰,镜下观察有立体感,7～10 d后,细胞长满传代。传代后细胞贴壁生长能力和增殖速度明显加快,原代至第2代细胞形态较规则,多呈多角形,大小均一。第3代后随着传代次数的增加,细胞中梭形细胞增多,分泌和增殖能力下降,传代周期延长。第5代分裂相少见,密度稀疏,细胞形态不佳,约80%呈长梭形,分泌和增殖能力下降。SEM示第1代半月板细胞形态规则,呈多极性,表面有突起;第5代细胞形态不规则,多呈梭形。生长曲线可见第4代前半月板细胞生长速度及生长周期均相似,第5代后细胞生长速度减慢,增殖减缓。细胞化学和免疫组化染色分析胶原和蛋白聚糖的表达：随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减弱而Ⅰ型胶原表达逐渐增强。结论：体外单层培养条件下,随着传代的进行,细胞活力逐渐下降,生长速度减慢,传代周期延长,逐渐变为梭形,形态不规则。体外单层培养系统中半月板纤维软骨细胞表型随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减少而Ⅰ型胶原表达逐渐增多,体外单层培养条件下培养的半月板纤维软骨细胞从第3代开始逐渐失去其特异性表型,发生去分化,逐渐变为成纤维细胞的表型。体外单层分离培养的第5代前半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型和生物学特性,可作为组织工程半月板的种子细胞。

关键词：半月板纤维软骨细胞体外培养去分化传代

力学刺激通过整合素α5β1介导半月板纤维软骨细胞的凋亡

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山西医科大学学报 2019年第8期50卷 1134-1139页

作者：杨化群付岳松王法正喀什地区第一人民医院运动医学科

目的研究力学刺激对半月板纤维软骨细胞(meniscal fibrochondrocytes,MFs)凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法通过酶消化法从大鼠半月板组织中分离MFs,实验首先分为两组:对照组(无力学刺激)和力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d),... 详细信息

目的研究力学刺激对半月板纤维软骨细胞(meniscal fibrochondrocytes,MFs)凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法通过酶消化法从大鼠半月板组织中分离MFs,实验首先分为两组:对照组(无力学刺激)和力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d),通过力学刺激仪器诱导MFs损伤细胞模型,CCK-8法和流式细胞术分别检测力学刺激对MFs活力和凋亡的影响。然后将实验分为四组:对照组(无力学刺激)、力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d)、对照siRNA(NC-siRNA)力学刺激组和干扰α5β1(α5β1 siRNA)力学刺激组,其中α5β1 siRNA和NC-siRNA力学刺激组细胞通过lipofectamine 2000将α5β1 siRNA和对照siRNA转染到MFs,然后进行力学刺激;CCK-8法和流式细胞术分别检测α5β1 siRNA和力学刺激对MFs活力和凋亡的影响;Western blot检测力学刺激和α5β1 siRNA对MFs Bcl2和cleaved caspase3蛋白表达的影响。结果CCK-8结果显示,与对照组细胞活力比较,力学刺激组MFs细胞活力显著降低;与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞活力显著升高,差异具有统计学意义(P细胞凋亡率明显升高;与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞凋亡率显著降低,差异具有统计学意义(P细胞Bcl2表达显著降低,α5β1和cleaved caspase3表达明显升高;而与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞Bcl2表达显著升高,α5β1和cleaved caspase3表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论力学刺激可能通过促进整合素α5β1表达,抑制Bcl2表达,促进cleaved caspase3表达,激活线粒体凋亡通路,促进MFs凋亡。

关键词：力学刺激半月板纤维软骨细胞整合素α5β1 细胞凋亡

碱性成纤维细胞生长因子转染对半月板纤维软骨细胞增殖、细胞周期及胶原合成影响的研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第12期20卷 1253-1256页

作者：张经纬曾炳芳赵金忠上海交通大学附属第六人民医院骨科

目的探索携带碱性成纤维细胞生长因子(bas ic fibrob last grow th factor,bFGF)基因的重组慢病毒载体转染半月板纤维软骨细胞的效能,观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。方法将从1只3月龄新西兰大白兔分离培养的第1代半月板... 详细信息

目的探索携带碱性成纤维细胞生长因子(bas ic fibrob last grow th factor,bFGF)基因的重组慢病毒载体转染半月板纤维软骨细胞的效能,观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。方法将从1只3月龄新西兰大白兔分离培养的第1代半月板纤维软骨细胞分为实验组(A组)、对照组(B组)和空白组(C组),3组细胞分别以2×104个/孔接种于24孔培养板。细胞生长至60%融合时,A组与克隆有bFGF基因的重组慢病毒载体悬液共培养,B组与不携带任何基因的慢病毒悬液共培养,C组未接受外加处理。共培养48 h后检测3组的细胞周期、胶原合成能力、培养液中bFGF的表达及不同时间各组细胞的细胞增殖能力的变化。结果共培养48 h后在A组测出bFGF浓度为870±60 pg/m l,而B、C组培养液中未能检测出bFGF的表达;共培养6 d后,M TT法检测,A组吸光度(A)值0.427±0.037与B组0.320±0.042和C组0.308±0.034比较差异有统计学意义(P细胞周期较B、C组缩短,A组细胞G1期,S期和G2/M期的时间分别为16.28、12.60和11.04 h;而B、C组分别为23.61、16.90和21.33 h及21.56、19.80和21.41 h;A组与B、C组比较差异有统计学意义(P细胞每分衰变数(7 281.69±805.50)高于B组(5 916.40±698.11)和C组(5 883.57±922.63),比较差异有统计学意义(P半月板纤维软骨细胞的转染;bFGF基因转染能促进半月板纤维软骨细胞的增殖和胶原合成能力。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子半月板纤维软骨细胞基因转染

构建组织工程化半月板:细胞、支架及生物因子

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中国组织工程研究 2013年第20期17卷 3764-3769页

作者：覃荣周阿坝师范高等专科学校体育保健教研室四川省阿坝藏族羌族自治州623001

背景:自体或异体移植修复损伤的半月板治疗效果并不理想,应用组织工程化技术重建半月板的研究成为目前的研究热点。目的:探讨组织工程化技术修复重建损伤半月板的可行性。方法:对体外构建组织工程化半月板的种子细胞进行培养,并制备半... 详细信息

背景:自体或异体移植修复损伤的半月板治疗效果并不理想,应用组织工程化技术重建半月板的研究成为目前的研究热点。目的:探讨组织工程化技术修复重建损伤半月板的可行性。方法:对体外构建组织工程化半月板的种子细胞进行培养,并制备半月板支架材料,将种子细胞依附于支架材料上,利用细胞因子调控种子细胞的黏附、生长、分化和迁移,组织学检查细胞与支架的结合情况以及细胞的数量等。结果与结论:组织工程化半月板修复研究主要包括种子细胞、支架材料和细胞因子等方面。构建需要的种子细胞有骨髓间充质干细胞和半月板纤维软骨细胞,半月板纤维软骨细胞传至第3代可得出最佳效应浓度。对组织工程化半月板支架材料进行表面修饰,由多材料组成的复合材料具有更好的生物相容性。应用组织工程化技术修复重建损伤的半月板。

关键词：组织构建组织构建学术探讨半月板细胞因子纤维蛋白胶原聚乳酸聚羟基乙酸骨髓间充质干细胞半月板纤维软骨细胞