检索结果-南通市图书馆

生物化学与生物物理进展 2000年第4期27卷 354-359页

作者：罗贵民吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春130023

催化抗体也叫抗体酶 ,是具有催化活性的免疫球蛋白 .由于它兼具抗体的高度选择性和酶的高效催化性 ,因而催化抗体制备技术的开发预示着可以人为生产适应各种用途的 ,特别是自然界不存在的高效催化剂 ,对生物学、化学和医学等多种学科有... 详细信息

催化抗体也叫抗体酶 ,是具有催化活性的免疫球蛋白 .由于它兼具抗体的高度选择性和酶的高效催化性 ,因而催化抗体制备技术的开发预示着可以人为生产适应各种用途的 ,特别是自然界不存在的高效催化剂 ,对生物学、化学和医学等多种学科有重要的理论意义和实用价值 .综述了催化抗体研究的最新进展 ,讨论了该领域目前存在的问题 ,提出了解决这些问题的可能办法 .

关键词：催化抗体抗体酶半抗原设计随机奕变

拟除虫菊酯类农药及其代谢物免疫检测技术研究进展

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食品与发酵工业 2022年第8期48卷 320-328页

作者：许梓红罗林陈子键王炳志严义勇孙远明徐振林广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院广东广州510642 深圳市易瑞生物技术股份有限公司广东深圳518000

拟除虫菊酯类农药是一类在世界范围内被广泛用于防治害虫的神经毒剂。由于用量大且存在一定毒性,因此,研究适合现场快速检测的筛查方法对于保障消费者身心健康具有重要作用。基于抗体特异性识别的免疫分析法具有简便、灵敏、快速及低成... 详细信息

拟除虫菊酯类农药是一类在世界范围内被广泛用于防治害虫的神经毒剂。由于用量大且存在一定毒性,因此,研究适合现场快速检测的筛查方法对于保障消费者身心健康具有重要作用。基于抗体特异性识别的免疫分析法具有简便、灵敏、快速及低成本等特点,是当前食品安全主流快速检测方法。该文重点介绍了拟除虫菊酯类农药及其代谢物半抗原设计策略、抗体制备和免疫检测新方法等方面研究进展,并对其应用现状、存在的问题及未来前景进行了评述。

关键词：拟除虫菊酯类免疫法检测半抗原设计抗体制备

基于高特异性单克隆抗体的间接竞争ELISA检测食品中胭脂红的研究

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分析测试学报 2022年第1期41卷 128-135页

作者：朱琳陈子键罗林王宇钟玉心沈玉栋孙远明徐振林广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院广东广州510640 广州市食品检验所广东广州510410

该研究设计合成了一种胭脂红半抗原,分别采用重氮化法和戊二醛法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原,通过免疫Bal b/c小鼠及杂交瘤技术成功筛选制备了胭脂红高特异性单克隆抗体,与苋菜红、柠檬黄等结构类似物无交叉反应。基于该抗体建... 详细信息

该研究设计合成了一种胭脂红半抗原,分别采用重氮化法和戊二醛法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原,通过免疫Bal b/c小鼠及杂交瘤技术成功筛选制备了胭脂红高特异性单克隆抗体,与苋菜红、柠檬黄等结构类似物无交叉反应。基于该抗体建立了间接竞争酶联免疫分析方法用于检测食品中胭脂红残留。该方法对胭脂红的半抑制浓度(IC_(50))和检出限(IC_(10))分别为10.1 ng/mL和0.98 ng/mL,线性范围为2~50 ng/mL。将该方法应用于山楂条和雪碧中胭脂红的快速检测,样品加标回收率分别为93.0%~113%和93.0%~100%,相对标准偏差分别为9.7%~12%和3.2%~3.9%。结果与HPLC-UV方法一致,表明该方法可用于食品中痕量胭脂红的快速筛查。

关键词：胭脂红半抗原设计单克隆抗体间接竞争ELISA 食品

活力高于天然谷胱甘肽过氧化物酶的含硒抗体酶

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中国科学（B辑） 1997年第4期27卷 293-300页

作者：丁兰赵大庆倪嘉缵罗贵民刘仔中国科学院长春应用化学研究所稀土化学与物理开放实验室长春130022 吉林大学酶工程国家重点实验室长春130023 长春农牧大学军事兽医研究所长春130021

还原型谷胱甘肽(GSH)的巯基和两个羧基分别与2,4-二硝基氯苯(DNCB)和甲醇反应,合成出半抗原Hp2;通过戊二醛将Hp2连到牛血清白蛋白(BSA)上,合成出全抗原Ag2;吸收光谱法测出Hp2在BSA上的平均连接量为30.2mol/mol.用标准的单克隆抗体(McAb... 详细信息

还原型谷胱甘肽(GSH)的巯基和两个羧基分别与2,4-二硝基氯苯(DNCB)和甲醇反应,合成出半抗原Hp2;通过戊二醛将Hp2连到牛血清白蛋白(BSA)上,合成出全抗原Ag2;吸收光谱法测出Hp2在BSA上的平均连接量为30.2mol/mol.用标准的单克隆抗体(McAb)制备技术,制备出阳性McAb(IgG)-4G3;4G3对GSH和半抗原Hp2的解离常数(K_D)表明,单克隆抗体4G3对GSH具有较强的亲和力.对4G3进行两步化学诱变(Chemical Mutation),诱变后即为具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的含硒抗体酶(m4G3),m4G3的GPX活力为9337U/μmol,是兔肝GPX(RL-GPX,5780U/μmol)的 1.6倍,曾报道的含硒抗体酶m4A4(1239 U/μmol)的7.5倍,制备出活性高于天然酶的抗体酶,证实了半抗原设计思想.将m4G3拆分成Fab和Fc片段,发现m4G3的活性中心位于Fab片段上,m4G3的硒代半胱氨酸(Se-Cys)含量为1.9 mol/mol.

关键词：谷胱甘肽过氧化物酶硒抗体酶半抗原设计

呋喃西林代谢物多克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法

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食品工业科技 2012年第5期33卷 330-333,379页

作者：任海涛沈玉栋徐振林杨金易雷红涛肖治理王弘孙远明广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院广东广州510642

为了建立检测呋喃西林代谢物(SEM)的酶联免疫吸附分析方法(ELISA),将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计... 详细信息

为了建立检测呋喃西林代谢物(SEM)的酶联免疫吸附分析方法(ELISA),将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响,发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果,结果显示:ELISA方法的半抑制浓度(IC50)为12.37ng/mL;定量检测线性范围(IC20～IC80)为0.439～110.78ng/mL;检测限(IC10)达0.07ng/mL,达到了国内外相关检测限量要求,可应用于实际食品样品检测。

关键词：硝基西林半抗原设计多克隆抗体异源包被 ELISA(酶联免疫吸附分析)

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氰戊菊酯人工结合抗原合成方法研究进展

湖北农业科学 2010年第12期49卷 3211-3216页

作者：刘莹余华强赵翠荣王立峰陈科海彭萍湖北省襄阳市农业科学院湖北襄阳441057

随着拟除虫菊酯农药的用量越来越大,其残留问题日益突出。氰戊菊酯作为检出率和超标率最高的菊酯类农药之一,为满足对其快速、简便、现场检测的要求,建立氰戊菊酯的免疫分析方法,首先必须合成适当的人工结合抗原。综述了目前国内外有关... 详细信息

随着拟除虫菊酯农药的用量越来越大,其残留问题日益突出。氰戊菊酯作为检出率和超标率最高的菊酯类农药之一,为满足对其快速、简便、现场检测的要求,建立氰戊菊酯的免疫分析方法,首先必须合成适当的人工结合抗原。综述了目前国内外有关氰戊菊酯的人工抗原合成方法的研究进展,旨在为氰戊菊酯的免疫分析研究提供依据。

关键词：氰戊菊酯免疫分析半抗原设计偶联

新型喹乙醇残留标志物人工半抗原的设计及其在动物组织残留检测中的应用

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中国兽药杂志 2016年第2期50卷 22-28页

作者：白玉惠王鹤佳刘智宏黄耀凌徐士新中国兽医药品监察所北京100081

为提高酶联免疫方法测定喹乙醇残留标志物（MQCA）的检测性能,设计了一种新型MQCA人工半抗原,该半抗原既完整保留MQCA分子特征性基团和结构,又具有便于和蛋白质载体偶联的基团-NH2。通过三步化学反应合成该半抗原,将其与蛋白质载体偶联... 详细信息

为提高酶联免疫方法测定喹乙醇残留标志物（MQCA）的检测性能,设计了一种新型MQCA人工半抗原,该半抗原既完整保留MQCA分子特征性基团和结构,又具有便于和蛋白质载体偶联的基团-NH2。通过三步化学反应合成该半抗原,将其与蛋白质载体偶联成为免疫抗原后,进一步制备特异性抗体,研制了MQCA酶联免疫试剂盒,灵敏度高,特异性好,IC50为1.94μg/L。建立了测定动物性产品中MQCA残留量的直接竞争酶联免疫法,测定猪肝、猪肉、鸡肉、鸡蛋中MQCA的检测限分别为0.42、0.23、0.28、0.28μg/kg。猪肉中不同添加浓度MQCA（1,2,4μg/kg）的回收率为70%~97%;批内、批间变异系数均低于12%。本试剂盒可同时快速检测大批样品,有望在MQCA残留检测中发挥重要作用。研究有助于指导小分子药物半抗原的合理设计,为现有的半抗原设计方法提供新的理念和思路。

关键词：喹乙醇残留标志物半抗原设计酶联免疫分析残留检测

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拟除虫菊酯类农药酶免疫分析方法研究进展

农药学学报 2008年第1期10卷 15-22页

作者：王春梅程敬丽刘毅华朱国念浙江大学农药与环境毒理研究所杭州310029

对拟除虫菊酯类单一农药残留和多残留酶免疫分析方法的研究进展进行了综述。在介绍单一农药残留酶免疫分析方法中半抗原分子设计和ELISA方法建立的基础上,指出刚性连接臂是菊酯类农药免疫半抗原分子设计的一般原则,包被原和免疫原采用... 详细信息

对拟除虫菊酯类单一农药残留和多残留酶免疫分析方法的研究进展进行了综述。在介绍单一农药残留酶免疫分析方法中半抗原分子设计和ELISA方法建立的基础上,指出刚性连接臂是菊酯类农药免疫半抗原分子设计的一般原则,包被原和免疫原采用不同的载体蛋白和不同结构的半抗原有利于菊酯类农药ELISA方法的建立。在介绍菊酯类农药多残留酶免疫分析方法时,剖析了通用免疫半抗原的结构特点,阐述了宽谱特异性抗体的筛选方法,揭示了在菊酯类农药多残留酶免疫分析法中存在竞争半抗原的选择具有盲目性、宽谱特异性抗体对不同农药的特异性差异较大的问题。并对拟除虫菊酯类农药通用免疫半抗原设计及多残留酶免疫分析技术的发展趋势进行了探讨。

关键词：拟除虫菊酯酶免疫分析半抗原设计农药残留

苯并咪唑广谱性及多菌灵高灵敏性单克隆抗体的制备及侧流层析免疫分析方法的建立

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苯并咪唑广谱性及多菌灵高灵敏性单克隆抗体的制备及侧流层析免疫...

作者：李子哲河南农业大学

学位级别：硕士

苯并咪唑类化合物主要包括阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、芬苯达唑、芬苯达唑砜、奥芬达唑、氟苯达唑、奥苯达唑、甲苯达唑、噻苯达唑、甲基硫菌灵、苯菌灵和多菌灵（carbendazim,CBZ）等。阿苯达唑、芬苯达唑和甲苯达唑等常作... 详细信息

苯并咪唑类化合物主要包括阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、芬苯达唑、芬苯达唑砜、奥芬达唑、氟苯达唑、奥苯达唑、甲苯达唑、噻苯达唑、甲基硫菌灵、苯菌灵和多菌灵（carbendazim,CBZ）等。阿苯达唑、芬苯达唑和甲苯达唑等常作为抗寄生虫药物应用于畜牧业,由于这些化合物具有一定的致畸作用和胚胎毒性,我国规定了它们在动物源性食品中最大残留限量（Maximum Residue Limit,MRL）为0.01-5 mg/kg。CBZ是一种内吸性广谱杀菌剂,广泛应用于果蔬菜的真菌病害防治,也具有一定毒性,我国规定了其在果蔬等中的MRL为0.05-5 mg/kg。因此,建立食品中苯并咪唑类化合物残留的快速检测方法,十分必要。胶体金侧流层析免疫分析法（Colloidal Gold Lateral Flow Immunoassay,CG-LFA）因其操作简便、检测快速等特点深受现场检测的欢迎。然而,广谱性苯并咪唑抗体的缺乏以及CBZ抗体的灵敏度较低,构成了制约免疫分析技术发展的主要瓶颈。因此,本研究旨在制备广谱性苯并咪唑抗体及高灵敏度CBZ的单克隆抗体,并以此建立相关的LFA,为苯并咪唑化合物的快速检测提供一定的方法学基础。首先,以CBZ为苯并咪唑类化合物的公共骨架,从CBZ的苯环上分别引入羧基和苯甲酸,设计半抗原H1和H2,充分暴露苯并咪唑氨基甲酸酯结构,以制备苯并咪唑广谱性抗体。以2-氨基苯并咪唑为公共骨架,分别引入丁二酸酐、4-异氰酸丁酸乙酯和对苯二甲酸分别制备半抗原H3、H4和H5,充分暴露苯并咪唑环结构,以制备高灵敏度CBZ的抗体。经过高斯运算和分子叠合等计算化学技术发现:半抗原H2间隔臂与公共骨架部分产生了-27.14°的角度差,该构象有利于更好的暴露公共骨架,并且其间隔臂充分保留了氨基甲酸酯部分的电荷特征和构象,仅对苯环部分的电荷产生轻微干扰,是制备广谱性苯并咪唑化合物抗体最优半抗原;半抗原H5的苯环间隔臂可较好地隔离了活性基团对间隔臂及抗原表位的电荷干扰,是制备CBZ高灵敏抗体的最优半抗原。此外,采用活泼酯法偶联载体蛋白,合成完全抗原,紫外分光光度法表明完全抗原合成成功。其次,采用单克隆抗体制备技术,分别通过H1-KLH制备出mAb 14G9和mAb 7B1,H2-KLH制备出mAb 9E5和mAb 3F1,H3-KLH制备的mAb 10A9、mAb 6D5、mAb 8D3和mAb 3H10,H4-KLH制备出mAb 3A3和mAb 5B10,H5-KLH制备出mAb 3B9和mAb 4B11,共12株单克隆抗体。采用间接竞争酶联免疫实验对抗体性能进行评估,其中,mAb 9E5对CBZ、苯菌灵、甲基硫菌灵、阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、芬苯达唑、芬苯达唑砜、奥芬达唑、甲苯达唑、奥苯达唑和氟苯达唑12种苯并咪唑药物的半抑制浓度(IC50值)分别为2.65、42.1、3.57、1.96、1.85、2.88、1.65、2.34、1.89、1.08、3.22和2.46 ng/m L,交叉反应率在42.1-240.2%,是文献报道苯并咪唑化合物识别力最广谱的抗体;mAb 4B11对CBZ的IC50值为0.04 ng/m L,对苯菌灵和甲基硫菌灵的交叉反应率分别为15.2%和1.06%,是文献报道灵敏度最高的CBZ抗体。最后,通过对包被原浓度、抗体添加量和金标抗体添加量的优化,以H2-BSA-mAb 9E5为抗原抗体组合,建立了同步检测牛奶中12种苯并咪唑化合物的LFA,对上述12种苯并咪唑药物的IC50值分别为1.29、1.83、7.82、0.74、0.73、0.68、2.27、1.84、1.79、1.99、1.98和1.62 ng/m L,cut-off值分别为10、20、40、10、10、10、20、20、10、10、10和20 ng/m L;以H4-BSA-mAb 4B11为抗原抗体组合,建立了果蔬中CBZ高灵敏检测的LFA,韭菜、芦笋、缸豆、橘子、葡萄和草莓样品中的LOD分别为0.18、0.10、0.11、0.16、0.12和0.13 ng/m L,添加回收率为76.0%-96.1%,真实样本中的检测与高效液相色谱检测结果一致。本研究分别以CBZ和2-氨基苯并咪唑环为苯并咪唑类化合物和CBZ的骨架结构,设计半抗原,验证了半抗原与载体蛋白的连接位点对抗体识别力的影响,半抗原的间隔臂类型对于抗体灵敏度的影响,为小分子化合物抗体的定向制备提供了一定的理论依据。此外,本研究构建了牛奶中同步检测12种苯并咪唑类化合物的LFA及果蔬中高灵敏检测CBZ的LFA,给苯并咪唑化合物的检测提供了坚实的方法学基础。

关键词：苯并咪唑多菌灵半抗原设计单克隆抗体侧流层析免疫分析法