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半夏蛋白的提取工艺及其凝集素的抑菌研究

西南师范大学学报（自然科学版） 2015年第6期40卷 43-48页

作者：张小团严静高鸿吴能表西南大学生命科学学院/三峡库区生态环境教育部重点试验室重庆400715

运用正交试验和单因素比较试验,探讨半夏蛋白提取过程中各条件对蛋白质量浓度的影响,优化半夏总蛋白的分离纯化工艺.用DEAE-Sepharose FF离子交换层析对半夏凝集素进行分离、纯化、凝血鉴定,并进行抑菌效果的探究.建立半夏总蛋白的最佳... 详细信息

运用正交试验和单因素比较试验,探讨半夏蛋白提取过程中各条件对蛋白质量浓度的影响,优化半夏总蛋白的分离纯化工艺.用DEAE-Sepharose FF离子交换层析对半夏凝集素进行分离、纯化、凝血鉴定,并进行抑菌效果的探究.建立半夏总蛋白的最佳提取工艺:称取适量新鲜半夏块茎,超声波处理20min,用1.5%NaCl溶液在4℃下静置抽提6h,提取1次后离心取上清并进行硫酸铵沉淀得到半夏总蛋白.凝集素对金黄色葡萄球菌的抑制效果明显,对大肠杆菌的抑制效果一般.

关键词：半夏蛋白分离纯化凝集素抑菌

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半夏蛋白在小鼠早期妊娠子宫结合部位的检测

生理学报 1983年第1期35卷 107-111页

作者：陶宗晋孙册陈蕙玲宋锦芬中国科学院中国科学院上海生物化学研究所上海生理研究所

利用辣根过氧化物酶标记定位技术对半夏蛋白抗小鼠早期妊娠的作用原理进行了探讨。结果显示小鼠子宫内膜和腺管上皮以及胚胎外胚盘锥体部分呈现明显的酶棕显色颗粒,它们的产生能被未经酶标半夏蛋白所抑制。子宫内膜和胚胎的其他部分均... 详细信息

利用辣根过氧化物酶标记定位技术对半夏蛋白抗小鼠早期妊娠的作用原理进行了探讨。结果显示小鼠子宫内膜和腺管上皮以及胚胎外胚盘锥体部分呈现明显的酶棕显色颗粒,它们的产生能被未经酶标半夏蛋白所抑制。子宫内膜和胚胎的其他部分均未见与半夏蛋白有专一性的结合。本文对半夏蛋白的抗生育机理进行了简略的讨论。

关键词：半夏蛋白辣根过氧化物酶子宫早期妊娠小鼠

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半夏蛋白的抗兔胚泡着床作用

生理学报 1984年第4期36卷 388-392页

作者：陈蕙玲宋锦芬陶宗晋中国科学院上海生理研究所上海生物化学研究所

半夏蛋白有很强的抗兔胚泡着床作用,子宫内注射500μg,抗着床率达100%。经半夏蛋白作用后的子宫内膜能使被移植的正常胚泡不着床。在子宫内经半夏蛋白孵育的胚泡移植到同步的假孕子宫,着床率随孵育时间延长而降低。用辣根过氧化物酶标... 详细信息

半夏蛋白有很强的抗兔胚泡着床作用,子宫内注射500μg,抗着床率达100%。经半夏蛋白作用后的子宫内膜能使被移植的正常胚泡不着床。在子宫内经半夏蛋白孵育的胚泡移植到同步的假孕子宫,着床率随孵育时间延长而降低。用辣根过氧化物酶标记半夏蛋白的定位实验表明该蛋白结合在子宫内膜腺管的上皮细胞膜上。已知半夏蛋白有类似凝集素的活性,能与甘露聚糖结合,它的抗着床作用可能是由于该蛋白结合了母体和(或)子体细胞膜上的某些糖结构,改变了细胞膜的生物学行为所致。

关键词：着床半夏蛋白子宫内膜胚泡

一种具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白的纯化与N端氨基酸序列分析

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中草药 2008年第9期39卷 1320-1323页

作者：王厚伟山东中医药大学药学院山东济南250355

目的分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白,分析其对胰蛋白酶的抑制活性、抑制机制与N端氨基酸序列。方法采用以胰蛋白酶为配体的亲和色谱和Sephadex G-50凝胶过滤法,从半夏蛋白粗提液的40%(NH_4)_2SO_4沉淀中分离纯化活性半夏蛋白;... 详细信息

目的分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白,分析其对胰蛋白酶的抑制活性、抑制机制与N端氨基酸序列。方法采用以胰蛋白酶为配体的亲和色谱和Sephadex G-50凝胶过滤法,从半夏蛋白粗提液的40%(NH_4)_2SO_4沉淀中分离纯化活性半夏蛋白;采用12%SDS-PAGE鉴定其纯度,并估算其相对分子质量;采用Ed-man降解法分析其N-端氨基酸序列。结果纯化的活性半夏蛋白经SDS-PAGE检测呈现单一条带,相对分子质量为1.4×10～4;比活力为1059.012U/mg,活力回收率为24.40%;对胰蛋白酶的质量抑制比为1:4.72,抑制常数(Ki)为7.17×10～(-6)mol/L;其N端前6个氨基酸残基顺序为DPVVDG。结论该活性半夏蛋白是一种丝氨酸蛋白酶抑制刺,为胰蛋白酶的竞争性抑制剂。

关键词：半夏蛋白胰蛋白酶抑制剂分离纯化 N端氨基酸序列

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半夏蛋白及其基因研究进展

时珍国医国药 2009年第10期20卷 2557-2559页

作者：徐陶杜娟谢丽霞李尚伟贵州大学农学院贵州山地农业病虫害重点实验室贵州贵阳550025

半夏蛋白是一种从半夏属块茎中分离纯化出的植物蛋白,它是能与甘露糖专一结合的植物凝集素。半夏蛋白具凝血、抗生育、抗肿瘤、杀虫等多种生物学功能。文章综述了半夏蛋白的分离提取、成分结构和性质及其基因工程方面的研究现状,并对半... 详细信息

半夏蛋白是一种从半夏属块茎中分离纯化出的植物蛋白,它是能与甘露糖专一结合的植物凝集素。半夏蛋白具凝血、抗生育、抗肿瘤、杀虫等多种生物学功能。文章综述了半夏蛋白的分离提取、成分结构和性质及其基因工程方面的研究现状,并对半夏蛋白的利用现状和前景也做了简单的论述。

关键词：半夏蛋白凝集素抗生育抗肿瘤抗虫基因工程

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半夏蛋白的分离纯化及结构分析

半夏蛋白的分离纯化及结构分析

作者：章伟标浙江理工大学

学位级别：硕士

半夏为天南星科植物半夏（Pinellia ternata（Thunb.） Breit.）的块茎,是一种重要的中药材。半夏为广布物种,主要分布于东南亚地区,国内资源丰富,以长江流域居多。半夏内用可燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结;外用可用于消炎,另外也可作为... 详细信息

半夏为天南星科植物半夏（Pinellia ternata（Thunb.） Breit.）的块茎,是一种重要的中药材。半夏为广布物种,主要分布于东南亚地区,国内资源丰富,以长江流域居多。半夏内用可燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结;外用可用于消炎,另外也可作为杀虫剂使用。半夏含有多种活性成分,如活性多糖、生物碱、甾醇和半夏蛋白等。近年来研究发现,半夏蛋白是半夏抗肿瘤、抗生育和抗虫作用的主要有效成分。天然药物中的有效成分通常十分复杂,而半夏中所含蛋白质就不少于十种。随着半夏蛋白的深入研究,如何获得大量满足研究要求的纯化半夏蛋白就变的十分重要。目前报道的半夏蛋白纯化方法主要包括疏水色谱、亲和色谱和离子交换色谱等,但都存在一些缺陷,而不能满足进一步研究的要求。本研究在此基础上,首先尝试利用凝胶过滤从0.45硫酸铵饱和度盐析提取的半夏总蛋白中分离得到一种纯度仅为80%相对分子量约12KDa的半夏蛋白;又尝试了Sephadex G-50和MBP Trap HP亲和柱组合分离,从0.45～0.8硫酸铵饱和度盐析提取的半夏总蛋白中先后分离得到两种半夏蛋白,相对分子量分别约为22KDa和40KDa,纯度约90%;但两种方法重复性均极低,不利于后续研究。而后,选用了疏水层析直接对0.45硫酸铵饱和度盐析提取的半夏总蛋白进行分离纯化,也得到一种相对分子量约为12KDa的半夏蛋白,虽然重复性提高,纯度可达90%,但该方法对操作条件要求极高而不利于大量提纯;最后我们根据半夏凝集素对甘露糖具有专一亲和的性质,以甘露糖为亲和配基,环氧活化琼脂糖凝胶为介质,制备了一种甘露糖-Sepharose4B凝胶,并从0.95硫酸铵饱和度盐析提取蛋白中分离得到纯度在95%以上的一种半夏凝集素,其相对分子量为12.165KDa,且重复性高,操作方便,可以大量分离以满足后续试验。研究还发现该方法受到半夏凝集素与甘露糖配基两者之间疏水性的直接影响。后续研究表明该半夏凝集素为一种糖蛋白;能使小白鼠血红细胞产生凝集反应,最低反应浓度为25μg/ml,而≤12.5μg/ml时小白鼠血红细胞未见明显凝集反应;对该半夏凝集素进行的氨基酸组成分析表明该凝集素中含有15种氨基酸,其中天冬氨酸含量最高,半胱氨酸含量最低,与一般植物凝集素相符。本文还对半夏凝集素的原核表达及纯化做了研究,主要内容是利用含半夏凝集素（PTA）基因的表达载体pET-28a（+）转化大肠杆菌BL21（DE3）,鉴定转化成功后,IPTG诱导表达培养,经SDS-PAGE分析,存在与预期相符的表达蛋白,相对分子量约为30KDa,且该蛋白为不溶性的包涵体。超声波裂解菌体分离包涵体,利用表达蛋白中的组氨酸标签进行Ni柱亲和纯化,筛选最优条件,获得大量半夏凝集素。

关键词：半夏蛋白纯化色谱原核表达重组蛋白

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半夏蛋白变性过程的圆二色性研究

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1981年第4期 379-384页

作者：徐琴钰鲁子贤中国科学院上海生物化学研究所

测定了半夏蛋白的紫外圆二色谱,远紫外谱显示不常见的单一的226nm负峰,[θ]=-4.42×10~3度·厘米~2/分克分子;近紫外谱给出295nm及286nm的正峰,248nm的负峰,265～280nm的宽蜂。这些CD蜂的蜂值因加入胍而降低,降低过程相互间大体平行,[θ... 详细信息

测定了半夏蛋白的紫外圆二色谱,远紫外谱显示不常见的单一的226nm负峰,[θ]=-4.42×10~3度·厘米~2/分克分子;近紫外谱给出295nm及286nm的正峰,248nm的负峰,265～280nm的宽蜂。这些CD蜂的蜂值因加入胍而降低,降低过程相互间大体平行,[θ]对胍浓度曲线的转折点都在2.75M胍左右,与一般蛋白质相同。还测定了6M胍中变性的半夏蛋白的重天然化过程,发现分两个过程,一快一慢。慢过程的一级反应速度常数是0.144分,快过程的是3.57分。

关键词：半夏蛋白紫外圆二色谱 nm 负峰圆二色性天然化一级反应速度常数蛋白质变性过程

半夏蛋白对小鼠的抗生育作用及抗早孕的机理探讨

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上海第一医学院学报 1985年第3期 193-198页

作者：夏林纳李超荊上海第一医学院妇产科研究所

本文观察半夏蛋白对小鼠的抗生育作用并初步探讨了该药抗早孕的机理。实验表明半夏蛋白30mg/kg对小鼠具有明显的抗早孕作用,抗早孕率可高达100％。给药后24h就可见到血浆孕酮水平下降,在光镜下子宫内膜变薄,大部分区域已见不到蜕膜反应... 详细信息

本文观察半夏蛋白对小鼠的抗生育作用并初步探讨了该药抗早孕的机理。实验表明半夏蛋白30mg/kg对小鼠具有明显的抗早孕作用,抗早孕率可高达100％。给药后24h就可见到血浆孕酮水平下降,在光镜下子宫内膜变薄,大部分区域已见不到蜕膜反应,胚胎停止发育并死亡。若同时皮下注射黄体酮1mg/只或绒毛膜促性腺激素(hCG)10IU/只均能有效地对抗半夏蛋白的抗早孕作用。但是抗早孕剂量的半夏蛋白皮下注射一次性给药并不影响早孕小鼠子宫胞浆孕酮受体的含量及亲和力。以上结果提示,半夏蛋白影响了卵巢黄体功能使内源性孕酮水平下降导致蜕膜变性,胚胎失去蜕膜的支持而流产。

关键词：半夏蛋白受体,黄体酮抗早孕药抗早孕-机理

半夏蛋白的分离、结晶、生物活力和一些化学性质

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1981年第1期 77-82页

作者：陶宗晋徐琴钰吴克佐连少辉孙德中国科学院上海生物化学研究所

从中草药半夏(Pinellia ternata Breit.)的鲜汁中分离出一种植物蛋白质组分,定名为半夏蛋白。它在稀磷酸缓冲液,pH 6.8,28～30℃结晶。它具有抑制早期妊娠的活力。给怀孕七天的小白鼠每只皮下注射250微克半夏蛋白,50%注射过的小白鼠引... 详细信息

从中草药半夏(Pinellia ternata Breit.)的鲜汁中分离出一种植物蛋白质组分,定名为半夏蛋白。它在稀磷酸缓冲液,pH 6.8,28～30℃结晶。它具有抑制早期妊娠的活力。给怀孕七天的小白鼠每只皮下注射250微克半夏蛋白,50%注射过的小白鼠引起流产。半夏蛋白也是一种植物凝集素,它与兔红血球有专一的血凝活力,浓度低至每毫升2微克仍有凝集作用。用凝胶过滤法测定,半夏蛋白分子量为44,000。十二烷基硫酸钠或胍盐存在下,半夏蛋白解聚成亚基。测定了半夏蛋白的氨基酸组成和N-末端氨基酸残基。半夏蛋白不含己糖。有迹象表明半夏蛋白可能是其分子大小、结构与性质极为相近的一组蛋白。

关键词：半夏蛋白小白鼠三叶半夏鲜汁