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北细辛苗在不同生长阶段与成熟期的主要化学成分分析

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中国实验方剂学杂志 2019年第9期25卷 159-165页

作者：陆亚男田晓清周晓云乔玉宝唐莹莹马丽艳樊成奇中国水产科学研究院东海水产研究所农业部远洋与极地渔业创新重点实验室上海200090 吉林省吉林中西医结合医院吉林吉林132010 上海海洋大学上海201306

目的:研究北细辛苗在生长过程中主要化学成分的变化规律。方法:分别采集生长1周和2周的北细辛苗以及生长3个月的北细辛植株,均分成地上(茎、叶)与地下部分(根),采用HPLC-TOF-MS对其次生代谢产物进行定性鉴别,以细辛脂素作为指标成分进... 详细信息

目的:研究北细辛苗在生长过程中主要化学成分的变化规律。方法:分别采集生长1周和2周的北细辛苗以及生长3个月的北细辛植株,均分成地上(茎、叶)与地下部分(根),采用HPLC-TOF-MS对其次生代谢产物进行定性鉴别,以细辛脂素作为指标成分进行定量鉴别。结果:从北细辛地下部分共鉴定6个已知化合物,分别为α-细辛醚(1),N-isobutyl-2,4,8,10-dodecatetraenamide(2),9-methoxyaristolactamⅣ(3),细辛脂素(4),caulesnarinside(6)和chalcononaringenin 2’,4’-di-O-β-Dglucopyranoside(7),峰面积数值表明其含量随着生长时间的增长逐渐增加;从北细辛地上部分共鉴定出4个已知化合物,分别为N-isobutyl-2,4,8,10-dodecatetraenamide(2),caulesauroneside(5),caulesnarinside(6)或chalcononaringenin 2’,4’-di-O-β-Dglucopyranoside(7)和peonidin 3-caffeoylgentiobioside(8)。仅在生长3个月的北细辛地下部分鉴定出了细辛脂素,其质量分数155.4μg·g^(-1)。结论:北细辛地上与地下部分次生代谢产物种类与含量存在较大差异;在北细辛苗的不同生长阶段,相同部位的次生代谢产物的种类和含量也存在较大差异,其主要成分的含量基本呈现随生长时间增加而增加的趋势。

关键词：北细辛种苗生长阶段地上部分地下部分次生代谢产物细辛脂素

北细辛AhWRKY33基因的克隆及其拟南芥遗传转化

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中国中药杂志 2020年第13期45卷 3112-3119页

作者：杨永成王潇晗王艳芳刘秀岩杨世海吉林农业大学中药材学院国家中医药管理局药用植物栽培与育种实验室吉林长春130118 北京中医药大学中药学院北京102488

根据北细辛全长转录组测序数据,选择在植物形态发生及应对逆境胁迫中发挥重要作用的WRKY家族基因,用在模式植物拟南芥中调控抗毒素camalexin合成的AtWRKY33比对同源基因,设计引物,以北细辛叶总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增得到AhWRKY3... 详细信息

根据北细辛全长转录组测序数据,选择在植物形态发生及应对逆境胁迫中发挥重要作用的WRKY家族基因,用在模式植物拟南芥中调控抗毒素camalexin合成的AtWRKY33比对同源基因,设计引物,以北细辛叶总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增得到AhWRKY33基因开放阅读框(ORF)片段,实时荧光定量PCR结果表明其在北细辛地上和地下部分有显著的表达差异,AhWRKY33在毒性成分马兜铃酸含量较根中高的叶片中有较高的表达量。经验证,北细辛WRKY33基因ORF全长1 686 bp,编码561个氨基酸。北细辛WRKY33有2个保守的WRKYGQK结构域,按经典的分类方法来说,属于Ⅰ组WRKY转录因子,与其他物种氨基酸具有一定的同源性。该研究成功构建植物真核表达载体PHG-AhWRKY33并转化拟南芥,经过PCR检测和潮霉素(Hyg)抗性平板的筛选获得了转基因拟南芥。发现加快了转基因拟南芥种子的萌发,提高了植株的抗逆性。这为继续深入分析WRKY转录因子在北细辛生长发育和次生代谢产物合成中的功能奠定了基础。

关键词：北细辛 WRKY基因植物表达载体遗传转化

北细辛挥发油对5种镰刀菌的抑菌活性及其成分分析

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天然产物研究与开发 2015年第7期27卷 1225-1231,1236页

作者：于婷婷李强王茂青何朋尚坤吴秀菊东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 黑龙江省农垦总局科研育种中心哈尔滨150036

以水蒸气蒸馏法提取北细辛挥发油,通过菌丝生长速率法和孢子萌发法,研究其对5种马铃薯干腐病致病菌镰刀菌的抑菌效果,优化提取方法,并采用气质联用法分析挥发油的化学成分。结果表明北细辛挥发油对5种供试镰刀菌抑制作用显著,且抑菌活... 详细信息

以水蒸气蒸馏法提取北细辛挥发油,通过菌丝生长速率法和孢子萌发法,研究其对5种马铃薯干腐病致病菌镰刀菌的抑菌效果,优化提取方法,并采用气质联用法分析挥发油的化学成分。结果表明北细辛挥发油对5种供试镰刀菌抑制作用显著,且抑菌活性与挥发油浓度呈剂量依赖性。不同方法提取的4组挥发油共鉴定出51种成分,其中18种组分相同,均以甲基丁香酚和黄樟醚为主,两者总含量达50%以上。地下部分挥发油含量明显高于地上部分,且超声辅助浸提法提取率更高。因此,北细辛挥发油可进一步开发为植物源农药,具有很好的开发前景。

关键词：北细辛挥发油镰刀菌抑菌活性植物源农药

北细辛叶柄愈伤组织的增殖培养及器官分化研究

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中草药 2016年第13期47卷 2341-2345页

作者：何朋刘思妤王宏宇杨悦王丽娟吴秀菊东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

目的研究北细辛Asarum heterotropoides叶柄愈伤组织增殖培养、再生芽分化及不定根诱导的最适条件,建立高效的愈伤组织培养和再生体系。方法以北细辛幼嫩叶柄诱导出愈伤组织,于含不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的增殖培... 详细信息

目的研究北细辛Asarum heterotropoides叶柄愈伤组织增殖培养、再生芽分化及不定根诱导的最适条件,建立高效的愈伤组织培养和再生体系。方法以北细辛幼嫩叶柄诱导出愈伤组织,于含不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的增殖培养基中扩大培养,选取嫩绿致密的愈伤组织接种在不同激素浓度配比的分化培养基上诱导再生芽及不定根,经驯化后移栽。结果愈伤组织增殖较适培养基为1/2 MS+0.40 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,在含0.40 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA的1/2 MS培养基中再生芽分化率最高,无激素添加的1/2 MS培养基适于壮苗培养,不定根诱导最适培养基为1/4 MS+0.25 mg/L IBA。结论确定北细辛愈伤组织增殖及分化的最适培养基及激素水平,建立了完善的北细辛再生体系,成功获得再生植株。

关键词：北细辛愈伤组织增殖再生芽分化不定根诱导再生体系

北细辛不同生长期甲基丁香酚和黄樟醚的气相色谱法定量分析

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色谱 1997年第1期15卷 85-86页

作者：王栋王喜军夏晓晖黑龙江中医药大学

对北细辛不同生长期所含甲基丁香酚（ｍｅｔｈｙｌｅｕｇｅｎｏｌ）和黄樟醚（ｓａｆｒｏｌｅ）用气相色谱法进行了定量分析。结果表明：地下部分甲基丁香酚以萌动期和果后期含量为最高；黄樟醚以萌动期、花期和果后期为最高。地上部分... 详细信息

对北细辛不同生长期所含甲基丁香酚（ｍｅｔｈｙｌｅｕｇｅｎｏｌ）和黄樟醚（ｓａｆｒｏｌｅ）用气相色谱法进行了定量分析。结果表明：地下部分甲基丁香酚以萌动期和果后期含量为最高；黄樟醚以萌动期、花期和果后期为最高。地上部分二者均以花期为最高，以后各时期依次减少。

关键词：气相色谱法北细辛甲基丁香酚黄樟醚

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北细辛丁香酚合成酶基因克隆及其表达分析

西北植物学报 2021年第3期41卷 368-376页

作者：梁岩岩王亚男张银萍王鹰李强吴秀菊东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

丁香酚合成酶(eugenol synthase,EGS)是北细辛(Asarum heterotropoides)主要活性成分甲基丁香酚体内合成途径中的关键酶之一。该研究根据北细辛转录组数据库中筛选到的序列设计特异引物,以RT-PCR法扩增获得北细辛丁香酚合成酶基因(AhEGS... 详细信息

丁香酚合成酶(eugenol synthase,EGS)是北细辛(Asarum heterotropoides)主要活性成分甲基丁香酚体内合成途径中的关键酶之一。该研究根据北细辛转录组数据库中筛选到的序列设计特异引物,以RT-PCR法扩增获得北细辛丁香酚合成酶基因(AhEGS)的开放阅读框(ORF)序列,进行了相应的生物信息学分析。同时运用实时定量PCR法分析AhEGS在不同发育时期(幼叶期、花期、果期)和不同组织部位(叶、根茎、根)中的表达谱,并进行原核表达分析。结果显示:(1)AhEGS基因ORF序列长为951 bp,编码316个氨基酸,理论分子量为34.93 kD,等电点为6.19,AhEGS蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构,无信号肽序列;同源序列比对发现,北细辛AhEGS与月季RcEGS(AFQ98278.1)同源性最高。(2)实时定量PCR分析表明,AhEGS基因在北细辛幼叶期的根中表达量最高。(3)成功构建了原核表达载体pET28a-AhEGS-BL21,经pET28a-AhEGS重组子转化*** BL21(DE3),SDS-PAGE检测显示在大肠杆菌(Escherichia coli,***)中诱导产生了35 kD左右的特异性蛋白,与理论分子量一致;最佳诱导条件为16℃、14 h,IPTG浓度为0.2 mmol/L。该研究首次克隆了北细辛的EGS基因,构建了原核表达载体,筛选出该蛋白最佳诱导条件,研究结果为北细辛甲基丁香酚代谢工程的应用奠定基础。

关键词：北细辛丁香酚合成酶基因序列分析原核表达诱导条件

北细辛AhOMT1基因的克隆及原核表达分析

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华北农学报 2022年第4期37卷 62-70页

作者：王亚男梁岩岩严文培张银萍李强吴秀菊东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为进一步挖掘甲基丁香酚合成相关酶基因,解析北细辛次生代谢途径,根据北细辛转录组数据库信息,筛选和克隆了AhOMT1基因,并进行了相应的生物信息学分析及原核表达分析。结果表明,AhOMT1基因包含的开放阅读框为1089 bp,编码362个氨基酸,... 详细信息

为进一步挖掘甲基丁香酚合成相关酶基因,解析北细辛次生代谢途径,根据北细辛转录组数据库信息,筛选和克隆了AhOMT1基因,并进行了相应的生物信息学分析及原核表达分析。结果表明,AhOMT1基因包含的开放阅读框为1089 bp,编码362个氨基酸,理论分子质量为40.23 ku,等电点为5.34,AhOMT1蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构,无信号肽序列;AhOMT1基因具有二聚化结构域与甲基转移酶结构域,AhOMT1与催化类黄酮、丁香酚类化合物的O-甲基转移酶的同源性较高;构建pET-32b-AhOMT1原核表达载体,成功诱导表达约60 ku的重组蛋白;确定了最佳诱导条件是0.2 mmol/L IPTG,16℃诱导16 h,该诱导条件下的重组蛋白多以可溶性蛋白形式存在;使用Ni^(2+)树脂分离纯化AhOMT1蛋白,以200 mmol/L咪唑洗脱可得到最大量的蛋白。该研究首次克隆了北细辛AhOMT1基因,构建原核表达载体,筛选出AhOMT1蛋白最佳诱导条件。

关键词：北细辛 AhOMT1 基因克隆生物信息学分析原核表达

北细辛年发育与有效成分动态积累相关规律的研究

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植物研究 1996年第4期16卷 485-488页

作者：王栋都晓伟刘玫刘鸣远黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨哈尔滨师范大学黑龙江哈尔滨

对栽培６年生北细辛年不同发育期根系和地上部分所含挥发油及其中甲基丁香酚和黄樟醚含量进行测定。结果表明：挥发油主要存在于根系，积累高峰为花期。甲基丁香酚和黄樟醚在根系中有两个高峰期，一个是萌动到花期，另一个是果后营养期... 详细信息

对栽培６年生北细辛年不同发育期根系和地上部分所含挥发油及其中甲基丁香酚和黄樟醚含量进行测定。结果表明：挥发油主要存在于根系，积累高峰为花期。甲基丁香酚和黄樟醚在根系中有两个高峰期，一个是萌动到花期，另一个是果后营养期；地上部分二者高峰均为花期。

关键词：北细辛年发育有效成分动态积累

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北细辛地上部分化学成分的研究

中草药 1998年第2期29卷 83-84页

作者：王栋夏晓晖黑龙江中医药大学药学院哈尔滨150040

北细辛Asarum heterotropides Fr ***. Mandshuricum(Maxim.) Kitag.为中药细辛的主要品种，药用全草。为了全面寻找北细辛的有效成分，我们对其地上部分的化学成分进行了研究。乙醇提取部分经聚酰胺柱层析配合硅胶薄层层析，分得3个黄... 详细信息

北细辛Asarum heterotropides Fr ***. Mandshuricum(Maxim.) Kitag.为中药细辛的主要品种，药用全草。为了全面寻找北细辛的有效成分，我们对其地上部分的化学成分进行了研究。乙醇提取部分经聚酰胺柱层析配合硅胶薄层层析，分得3个黄酮甙类化合物，分别为山柰酚-3-葡萄糖甙(Ⅰ)、山柰酚-3-芸香糖甙(Ⅱ)和山柰酚-3-龙胆二糖甙(Ⅲ)。该3个化合物均系首次从北细辛中分离出。

关键词：中药北细辛地上部分化学成分