检索结果-南通市图书馆

作者：车阳浙江工业大学

学位级别：硕士

默诺霉素A,moenomycin A(MmA)是由加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)等产生的一种磷酸糖脂类抗生素,在国内被用作一种动物饲料添加剂,能促进动物生长。本文对默诺霉素合成过程代谢曲线及相关基因转录水平以及碳代谢和氮代谢调节对加... 详细信息

默诺霉素A,moenomycin A(MmA)是由加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)等产生的一种磷酸糖脂类抗生素,在国内被用作一种动物饲料添加剂,能促进动物生长。本文对默诺霉素合成过程代谢曲线及相关基因转录水平以及碳代谢和氮代谢调节对加纳链霉菌合成默诺霉素的影响进行了研究。根据默诺霉素生物合成途径与*** ATCC14672和*** A3(2)基因序列,扩增了与默诺霉素合成相关基因moeE5、moeO5、moeX5、moeGT2、yngB、glmU、ugdH、glnA、glnⅡ,通过发酵过程相关基因的转录水平分析,发现各基因变化趋势与默诺霉素产素速率呈正相关。摇瓶发酵曲线表明:84 h时培养基中总糖含量均降至最低,确定84 h为补糖时间来考察。通过对加纳链霉菌SG-1发酵产默诺霉素过程中碳源代谢物调节的研究表明,在发酵84 h,以0.5%的浓度补加蔗糖,能促进yngB、glmU等默诺霉素相关基因的转录,对默诺霉素合成具促进效果,默诺霉素产量提高14.3%。通过对加纳链霉菌SG-1发酵产默诺霉素过程中氮源代谢物调节的研究表明,在发酵第60 h补加玉米浆粉,能促进加纳链霉菌中谷氨酰胺合成酶基因的转录,从而促进默诺霉素的合成,默诺霉素效价提高10.3%。补加玉米浆粉与蔗糖,能促进默诺霉素合成过程中前体物质的合成,也能促进默诺霉素合成基因簇Ⅰ基因的转录,从而促进MmA的合成,使默诺霉素效价提高了19.7%。

关键词：默诺霉素加纳链霉菌碳调节氮调节转录分析

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加纳链霉菌生长特性及黄霉素发酵工艺的研究

加纳链霉菌生长特性及黄霉素发酵工艺的研究

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作者：黄艳浙江工业大学

学位级别：硕士

黄霉素(flavomycin)是由加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)等产生的一种磷酸糖脂类抗生素,通常被用作动物饲料添加剂。本文对加纳链霉菌生长特性及移种标准、产黄霉素发酵条件、补料工艺及发酵培养基的优化进行了研究。对加纳链霉菌... 详细信息

黄霉素(flavomycin)是由加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)等产生的一种磷酸糖脂类抗生素,通常被用作动物饲料添加剂。本文对加纳链霉菌生长特性及移种标准、产黄霉素发酵条件、补料工艺及发酵培养基的优化进行了研究。对加纳链霉菌种子培养工艺、生长特性及移种标准进行研究,确定斜面接种标准为平板单菌落接种第一代斜面,菌龄8 d;种子摇瓶培养的最佳培养条件为采用具挡板摇瓶、温度34℃、pH7.0;液体种子移种标准为菌浓35%～41%,pH值二次回落6.9～7.0,还原糖28.8～30 g/L,氨态氮二次回落1.05～2.57 mg/L,种龄44～48 h。使用最佳培养工艺及移种标准,黄霉素的相对效价提高35.28%,不同批次间的效价差异低于7%。对黄霉素发酵条件进行优化,考察了发酵温度、摇床转速、种龄、装液量、初始pH、接种量,通过单因素试验、Plackett-Burman试验及Box-Behnken试验确定了黄霉素最佳的发酵条件:温度36℃、pH7.2、种龄 45 h、装液量 50/250 mL、接种量 8%、转速 240 r/min,黄霉素的相对效价提高63.42%。对黄霉素发酵补料工艺的研究,确定补加玉米浆,降低发酵培养基中基础豆油,补加豆油,比不补料提高51.92%,最终在5 L发酵罐上放大。对黄霉素发酵培养基配方进行优化,如碳源、氮源、无机盐、表面活性剂等,通过单因素试验、Plackett-Burman试验及Box-Behnken试验,得到影响黄霉素发酵效价的三个重要因素:黄豆饼粉、玉米粉以及CaC03,最终确定黄霉素最佳发酵培养基,黄霉素发酵效价较优化前提高60.53%。

关键词：黄霉素加纳链霉菌生长特性移种标准响应面发酵工艺优化

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碳源对加纳链霉菌合成默诺霉素的影响

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浙江农业学报 2015年第8期27卷 1355-1361页

作者：车阳赵春田裘娟萍浙江工业大学生物与环境工程学院浙江杭州310014

通过摇瓶发酵测定加纳链霉菌发酵曲线以及补料前后默诺霉素合成基因转录水平分析,寻找适宜默诺霉素合成的补料碳源。结果发现,发酵至84 h,发酵液中残糖含量最低,在该时刻补加一定浓度碳源,测定效价可知,高浓度葡萄糖和蔗糖对默诺霉素的... 详细信息

通过摇瓶发酵测定加纳链霉菌发酵曲线以及补料前后默诺霉素合成基因转录水平分析,寻找适宜默诺霉素合成的补料碳源。结果发现,发酵至84 h,发酵液中残糖含量最低,在该时刻补加一定浓度碳源,测定效价可知,高浓度葡萄糖和蔗糖对默诺霉素的合成具有抑制作用,补加0.5%蔗糖能有效促进默诺霉素的合成,转录水平分析发现蔗糖的补加促进了默诺霉素合成相关基因的转录,默诺霉素效价提高14.3%。蔗糖的补加有助于促进默诺霉素生物合成中相关底物的合成,从而提高了默诺霉素发酵水平。

关键词：默诺霉素加纳链霉菌碳源蔗糖转录分析

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一株加纳链霉菌种子培养工艺及移种标准的研究

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中国畜牧杂志 2014年第7期50卷 79-84页

作者：黄艳赵春田裘娟萍浙江工业大学生物与环境工程学院浙江杭州310014

本研究为提高黄霉素的发酵效价及发酵稳定性，对加纳链霉菌种子培养工艺、生长特性及移种标准进行研究。结果表明：斜面移种标准为平板单菌落移种第一代斜面，菌龄8d；种子摇瓶培养的最佳培养条件为采用具挡板摇瓶、温度34℃、pH7．0；... 详细信息

本研究为提高黄霉素的发酵效价及发酵稳定性，对加纳链霉菌种子培养工艺、生长特性及移种标准进行研究。结果表明：斜面移种标准为平板单菌落移种第一代斜面，菌龄8d；种子摇瓶培养的最佳培养条件为采用具挡板摇瓶、温度34℃、pH7．0；液体种子移种标准为菌浓35％-41％，pH值二次回落6．9-7．0，还原糖28．8--30g/L，氨态氮二次回落1．05～2．57mg／L，种龄44～48h。摇瓶实验结果显示，使用最佳培养工艺及移种标准，黄霉素的最终效价提高了32．5％．不N批次间的差异低于7％。该实验为提高黄霉素发酵效价和发酵稳定性提供参考。

关键词：加纳链霉菌黄霉素种子培养工艺生长特性移种标准

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默诺霉素产生菌relA基因和nsdA基因阻断的研究

默诺霉素产生菌relA基因和nsdA基因阻断的研究

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作者：陈艳萍浙江工业大学

学位级别：硕士

默诺霉素(moenomycin)是一类磷酸糖脂类抗生素,主要用于动物生长促进剂,斑堡链霉菌和加纳链霉菌为主要生产菌。 relA基因是首先于大肠杆菌中发现的一个多效调控因子,后来也在链霉菌中被发现,编码(p)ppGpp合成酶。随后的研究发现relA基... 详细信息

默诺霉素(moenomycin)是一类磷酸糖脂类抗生素,主要用于动物生长促进剂,斑堡链霉菌和加纳链霉菌为主要生产菌。 relA基因是首先于大肠杆菌中发现的一个多效调控因子,后来也在链霉菌中被发现,编码(p)ppGpp合成酶。随后的研究发现relA基因存在于多种链霉菌中且序列高度保守,对链霉菌抗生素的合成和产孢形态分化均有调控作用。nsdA是首先在天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)中发现的一个全局性负调节基因,对天蓝色链霉菌的形态分化与抗生素的合成有负调控作用,随后的研究发现在多种链霉菌中nsdA均保守存在。基于链霉菌代谢调控网络的复杂性,relA和nsdA基因普遍性和多效性,本实验研究的目的是利用基因同源重组技术阻断斑堡链霉菌(Streptomyces bambergiensis)和加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis) relA基因和nsdA基因,研究它们对形态分化及次级代谢产物默诺霉素生物合成的影响。根据基因组序列已知的天蓝色链霉菌A(3)2relA和nsdA基因的保守序列设计引物,从斑堡链霉菌和加纳链霉菌总DNA中扩增得到它们的relA和nsdA基因,通过生物信息学分析发现,与其他链霉菌相比,斑堡链霉菌relA基因序列相似性可达83.55%以上,加纳链霉菌relA基因序列相似性可达85.37%以上;斑堡链霉菌nsdA基因序列相似性高达86.39%,加纳链霉菌nsdA基因序列相似性高达87.52%。为进一步研究relA和nsdA基因在斑堡链霉菌和加纳链霉菌中的功能,本研究以pKC1139为出发载体构建了同源重组质粒pKQRK, pKBRK分别阻断加纳链霉菌和斑堡链霉菌中的relA基因;pKQNK, pKBNK分别阻断加纳链霉菌和斑堡链霉菌中的nsdA基因。将这些重组质粒分别转化大肠杆菌ET12567(pUZ8002)获得接合转移供体菌,通过属间接合转移分别导入加纳链霉菌和斑堡链霉菌中。得到的接合转移子在高温和卡那霉素抗性双重筛选压力下,完成染色体上目的基因的阻断,实验得到斑堡链霉菌relA阻断突变株1203,加纳链霉菌relA阻断突变株0613,斑堡链霉菌nsdA阻断突变株0107,并通过PCR及测序验证relA和nsdA基因已分别被正确阻断。与出发菌株相比,在摇床发酵水平上斑堡链霉菌relA阻断突变株1203默诺霉素产量提高了18.59倍;斑堡链霉菌nsdA阻断突变株0107默诺霉素产量提高了22.41倍;而加纳链霉菌relA阻断突变株0613默诺霉素的产量大幅度降低,为出发菌株产量的55.5%。为了排除由于极性效应或其他位点突变造成的影响,进行了遗传互补实验,扩增含有完整目的基因的DNA片段酶切后连接到整合载体pIJ8630-ermE*P的对应酶切位点,构建用于遗传互补的重组质粒pIJBN,经过属间结合转移进入nsdA阻断菌株斑堡链霉菌0107。在相同条件下培养,nsdA基因阻断菌株0107的遗传互补菌***0204恢复到野生株的状态,进一步证明nsdA突变株的变化是由于目的基因的阻断引起的。以上研究表明nsdA基因参与了斑堡链霉菌形态分化和次级代谢抗生素合成的调控途径,并起负调控作用;relA基因参与斑堡链霉菌和加纳链霉菌形态分化和次级代谢抗生素合成的调控途径,其调控模式因种的差异而不同。

关键词： nsdA relA 基因阻断默诺霉素斑堡链霉菌加纳链霉菌遗传互补

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