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基于HPLC指纹图谱和网络药理学的加味四逆散(颗粒)质量标志物分析及含量测定方法的建立

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中草药 2023年第20期54卷 6682-6693页

作者：陈静梅李泽宇梁秋明岳子俊唐佐伟郝二伟杜正彩侯小涛邓家刚广西中医药大学药学院广西南宁530200 广西中药药效研究重点实验室广西南宁530200 广西农作物废弃物功能成分研究协同创新中心广西南宁530200 广西中医湿病方药理论与转化重点实验室广西南宁530200 广西中医药大学广西中医药科学实验中心广西南宁530200 广西钦州市中医医院广西钦州535000

目的基于指纹图谱和网络药理学方法,分析预测加味四逆散(Jiawei Sini Powder,JSP)(颗粒)潜在的质量标志物(quality markers,Q-Marker),并对Q-Marker成分进行含量测定,为其质量控制提供参考。方法采用HPLC指纹图谱结合化学计量学分析JSP... 详细信息

目的基于指纹图谱和网络药理学方法,分析预测加味四逆散(Jiawei Sini Powder,JSP)(颗粒)潜在的质量标志物(quality markers,Q-Marker),并对Q-Marker成分进行含量测定,为其质量控制提供参考。方法采用HPLC指纹图谱结合化学计量学分析JSP(颗粒)潜在Q-Marker。通过网络药理学构建物质-效应网络,进一步分析预测JSP(颗粒)药效关联的Q-Marker,并建立对预测得到的标志性成分进行含量测定的HPLC方法。结果建立了JSP(颗粒)的HPLC指纹图谱,标记28个共有峰,对其进行峰归属,其中1、9、11号峰来自白芍,26、27号峰来自枳实,13、28号峰来自炙甘草,2、4、10、12、16、24号峰来自代代花,15、17、22号峰来自半枝莲,25号峰来自白芍和炙甘草共有,3、5~8、14、18~21、23号峰来自枳实和代代花共有,并指认了其中的9个共有峰,分别为芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、野黄芩苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、甘草酸铵。相似度评价显示,10批JSP(颗粒)样品的相似度为0.954~1.000。主成分分析(principal component analysis,PCA)显示前4个主成分的累积方差贡献率为95.003%,正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)显示有12个成分变量重要性投影(variable importance projection,VIP)值较大。采用网络药理学的方法分析得出芍药内酯苷、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷5个成分可能为JSP(颗粒)潜在的Q-Marker。同时测定以上5个成分的含量,方法学考察结果良好,平均加样回收率为92.52%~96.48%,RSD为1.3%~2.6%。10批样品中芍药内酯苷、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的质量分数分别为0.1076~0.2036、0.4759~1.2046、2.3109~5.2238、0.4103~0.7968、4.3119~8.3433 mg/g。结论建立了JSP(颗粒)的HPLC指纹图谱,并结合网络药理学预测出5个Q-Marker成分及建立其定量测定方法,为JSP(颗粒)研制成古代经典名方中药复方制剂提供质量控制依据。

关键词：加味四逆散质量标志物 HPLC 指纹图谱网络药理学主成分分析正交偏最小二乘-判别分析芍药内酯苷芍药苷柚皮苷橙皮苷新橙皮苷

加味四逆散治疗ⅢB型慢性前列腺炎(气滞血瘀型)疗效观察及对T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+的影响

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加味四逆散治疗ⅢB型慢性前列腺炎(气滞血瘀型)疗效观察及对T淋巴...

作者：王松江西中医药大学

学位级别：硕士

目的:1.观察加味四逆散治疗ⅢB型慢性前列腺炎,对比治疗前后的NIH-CPSI评分及中医证候积分数值变化,评估是否具备疗效性。2.从T淋巴细胞亚群CD3、CD4数值变化探讨加味四逆散治疗ⅢB型慢性前列腺炎的可能作用机制,进一步提升ⅢB型慢性前... 详细信息

目的:1.观察加味四逆散治疗ⅢB型慢性前列腺炎,对比治疗前后的NIH-CPSI评分及中医证候积分数值变化,评估是否具备疗效性。2.从T淋巴细胞亚群CD3、CD4数值变化探讨加味四逆散治疗ⅢB型慢性前列腺炎的可能作用机制,进一步提升ⅢB型慢性前列腺炎诊疗效果。方法:本次研究采取随机、平行、对照、开放的试验方法,从江西中医药大学附属医院的中医外科门诊、男科门诊、住院部纳入符合入组标准的60例病例,治疗组、对照组随机分配,每组各30例患者。在治疗上,治疗组口服加味四逆散,对照组给予前列舒通胶囊口服。两组患者治疗疗程均为28天。分别在治疗前和治疗28天后统计患者的NIH-CPSI评分和中医证候积分,在治疗前、治疗28天后留取患者前列腺按摩液,以检验CD3、CD4数值变化。如果在治疗期间出现身体不适或不良药物反应等一切意外随时记录。结果:1.基线数值对比:统计得出两组患者的年龄、病程无差异(P>0.05)。在治疗前两组患者统计的NIH-CPSI总评分及三项子评分疼痛症状评分、排尿症状评分、生活质量评分和中医证候积分经过分析后发现均无显著性差异(P>0.05)。对于前列腺按摩液中CD3、CD4数值分析,治疗前两组患者无差异(P>0.05)。所有基线值数据均有可比性。2.两组患者治疗后愈显率对比:经过28天的治疗后,治疗组的愈显率为76.7%,对照组的愈显率为40%,治疗组疗效较为有效(P0.05)。4.两组患者治疗前后中医证候评分对比:治疗28天后,中医证候积分在两组患者中均有所下降(P0.05);两组的CD4水平均下降明显,但治疗组下降程度优于对照组(P0.05)。7.两组患者治疗安全性:在入组的60例患者中,治疗组患者有1例偶发一过性瘙痒症状,3例患者出现腹泻,对照组患者4例出现散发皮疹。经过处理后症状均得到缓解,临床研究未中断。本次研究阶段,患者的各项生化指标正常,未出现明显变化,未发现有明显的毒副反应。8.剔除与脱落情况:本次研究进展顺利,所有入选病例均完成临床研究,没有患者剔除或脱落。结论:1.加味四逆散治疗ⅢB型慢性前列腺炎与前列舒通胶囊相比,可以有效降低NIH-CPSI评分、中医证候积分,提升愈显率。2.加味四逆散可以下调前列腺液中的CD3、CD4数值水平,因此我们推测加味四逆散治疗ⅢB型慢性前列腺炎的作用机制可能是通过调节T淋巴细胞紊乱来进行的,但是具体作用机制还需进一步深入研究。

关键词：加味四逆散 ⅢB型慢性前列腺炎 T淋巴细胞亚群临床观察

加味四逆散对慢性身心应激模型大鼠胃粘膜超微结构及脑肠轴的影响

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南方医科大学学报 2013年第1期33卷 103-107页

作者：谢慧臣刘芬杨强熊常初湖北中医药大学湖北武汉430065 湖北民族学院医学院中医教研室湖北恩施445000 湖北民族学院医学院附属医院中医部湖北恩施445000

目的建立大鼠慢性身心应激模型,探讨加味四逆散对模型大鼠胃粘膜超微结构、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)含量、胃组织胃泌素受体(GASR)、空肠组织血管活性肠肽Ⅱ型受体(VIPR2)mRNA表达的影响,阐明加味四逆散干预应激性胃... 详细信息

目的建立大鼠慢性身心应激模型,探讨加味四逆散对模型大鼠胃粘膜超微结构、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)含量、胃组织胃泌素受体(GASR)、空肠组织血管活性肠肽Ⅱ型受体(VIPR2)mRNA表达的影响,阐明加味四逆散干预应激性胃肠功能障碍的机制。方法大鼠随机分为正常组,模型组,加味四逆散大、中、小剂量组,奥美拉唑组,采用慢性身心应激方法建立大鼠应激模型,经加味四逆散等干预后透射电镜法观察腺胃区胃粘膜组织细胞及细胞间连接的超微结构改变,放免法测定血浆ACTH和血清CORT的变化,并用RT-PCR法检测胃组织GASR、空肠组织VIPR2 mRNA表达变化。结果电镜观察显示正常组大鼠胃粘膜上皮细胞形态及大小正常;模型组大鼠胃粘膜上皮细胞细胞器及胞核受损严重;其余治疗组均较模型组不同程度好转。与模型组比较,加味四逆散方各给药组、奥美拉唑组大鼠血中ACTH和CORT含量不同程度降低;而胃组织GASR mRNA表达均升高,空肠组织VIPR2 mRNA表达则降低,差异有统计学意义(P加味四逆散可显著改善慢性身心应激模型大鼠胃粘膜组织细胞的微观病理形态,调节脑肠轴状态并可改善胃组织GASR、空肠组织VIPR2 mRNA表达。

关键词：加味四逆散应激胃粘膜脑肠轴促肾上腺皮质激素皮质醇胃泌素受体血管活性肠肽Ⅱ型受体

加味四逆散对束缚制动心理应激大鼠HPA轴调节作用的影响

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中药材 2008年第1期31卷 88-91页

作者：史亚飞严灿吴丽丽冉川莲李强广州中医药大学广东广州510405

目的:观察加味四逆散对束缚制动所致慢性心理应激大鼠HPA轴调节作用的影响及其胸腺免疫抑制的途径。方法:大鼠随机分为正常对照组(C组)、模型组(M组)、加味四逆散组(C1组)、人参皂苷组(C2组)。采用放射免疫方法检测大鼠下丘脑CRH、血浆A... 详细信息

目的:观察加味四逆散对束缚制动所致慢性心理应激大鼠HPA轴调节作用的影响及其胸腺免疫抑制的途径。方法:大鼠随机分为正常对照组(C组)、模型组(M组)、加味四逆散组(C1组)、人参皂苷组(C2组)。采用放射免疫方法检测大鼠下丘脑CRH、血浆ACTH、CORT及胸腺细胞糖皮质激素受体的数目与核转移率。结果:与C组相比,M组下丘脑CRH、血浆ACTH、CORT显著增高(P加味四逆散有效参与了心理应激大鼠HPA轴的调节,并显著减轻糖皮质激素对胸腺的抑制作用,其作用途径与HPA轴糖皮质激素受体的介导密切相关。

关键词：加味四逆散心理应激大鼠 HPA

加味四逆散分时给药对慢性应激大鼠生物节律的影响

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中国药理学通报 2014年第6期30卷 867-874页

作者：吴丽丽刘琰陈权韩严灿广州中医药大学中医基础理论教研室广东广州510060

目的研究中药复方加味四逆散(JWSNS)分时给药对慢性应激大鼠生物节律的影响。方法采用慢性不可预知轻度应激建立慢性应激大鼠模型。运用余弦节律分析法观察分析慢性应激大鼠昼夜体温节律、血清5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)、褪... 详细信息

目的研究中药复方加味四逆散(JWSNS)分时给药对慢性应激大鼠生物节律的影响。方法采用慢性不可预知轻度应激建立慢性应激大鼠模型。运用余弦节律分析法观察分析慢性应激大鼠昼夜体温节律、血清5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)、褪黑素(melatonin,MT)、皮质酮(corticosterone,CORT)分泌及其节律的变化以及JWSNS的影响。血清5-HT、MT、CORT含量测定采用酶联免疫吸附试验。结果 JWSNS 3个给药组对模型大鼠体重增长缓慢现象没有抑制作用,但可以提高模型大鼠糖水偏爱度(P<0.01),表明JWSNS具有抗抑郁的效应。慢性应激使大鼠昼夜体温波动加剧,白昼体温更低,夜间体温更高,并且这种现象在谷值方面表现得更为明显。JWSNS酉时、卯酉分时给药对此现象具有抑制作用(P<0.05,P<0.01),且酉时给药表现为对峰值、谷值的双相调节作用,而卯酉分时给药则主要是作用于光时相,即对谷值(白昼)进行调节。慢性应激大鼠的体温节律出现延迟现象,主要表现为时相的推后,只有JWSNS卯时给药可以对体温节律延迟有抑制作用。慢性应激大鼠昼夜血清5-HT、MT、CORT含量波动幅度减小,分泌节律紊乱,主要表现为时相的大幅提前。JWSNS酉时和卯酉分时给药对大鼠血清5-HT水平低下具有抑制作用(P<0.01);JWSNS酉时给药对血清MT含量波动幅度的减小具有抑制作用(P<0.01),而JWSNS卯时给药和卯酉分时给药则对MT分泌节律紊乱具有抑制作用(P<0.01);JWSNS酉时和卯酉时给药可抑制CORT的升高,对血清CORT含量波动幅度的减小具有抑制作用(P<0.01)。结论 JWSNS卯时给药抗抑郁主要通过调节体温、激素以及神经递质分泌的节律,酉时给药抗抑郁主要通过调节激素和神经递质的分泌量,而卯酉分时给药则具有以上两方面的综合效应。

关键词：应激抑郁症 5-羟色胺褪黑素皮质酮加味四逆散

加味四逆散联合针灸疗法在反流性食管炎中的应用价值分析

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2022年第9期 250-253页

作者：杨朝美房立栋沂源县精神卫生中心山东淄博256103

探析加味四逆散联合针灸疗法治疗反流性食管炎的效果。方法以2021年1月-2022年1月作为纳入时间段,纳入我院收治的反流性食管炎患者60例展开研究,以单双法分组,对照组、观察组分别给予加味四逆散、加味四逆散+针灸疗法,在展开连续30d的... 详细信息

探析加味四逆散联合针灸疗法治疗反流性食管炎的效果。方法以2021年1月-2022年1月作为纳入时间段,纳入我院收治的反流性食管炎患者60例展开研究,以单双法分组,对照组、观察组分别给予加味四逆散、加味四逆散+针灸疗法,在展开连续30d的治疗后,就两组的总疗效、症状的消失时间、胆汁反流的情况及不良反应的发生情况展开分析。结果经过30d的治疗,对比两组的治疗总有效率,观察组的结果是96.67%,与对照组的76.67%相比,明显升高;对比两组的胃脘疼痛、嗳气反酸、饱腹感等症状的消失时间,观察组的结果短于对照组;比较胆汁反流情况,观察组的持续时间比对照组更短,频率比对照组更低;对比不良反应发生率,观察组的结果比对照组更低;上述指标的组间差异都存在着有统计学上的意义(P加味四逆散的基础上联合针灸疗法对反流性食管炎具有更好的治疗效果,能缩短患者各项临床症状的消失时间,胆汁反流的情况大大好转,且不会增加新的不良反应,有效性、安全性均有保证,建议临床推广应用。

关键词：加味四逆散针灸反流性食管炎效果

加味四逆散抗应激性抑郁效应及其海马NMDA受体通道机制的初步研究

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中国药理学通报 2007年第11期23卷 1425-1431页

作者：吴丽丽严灿丁胜元徐志伟曾纯兰金鑫广州中医药大学基础医学院中医基础理论教研室广东广州510006 广州中医药大学基础医学院生理学教研室广东广州510006

目的研究加味四逆散(JWSNS)抗应激性抑郁效应及其海马N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体通道的机制。方法采用慢性轻度不可预计应激(chronicmild unpredictable stress,CMUS)制作大鼠抑郁症模型。在造模前后测量基础糖... 详细信息

目的研究加味四逆散(JWSNS)抗应激性抑郁效应及其海马N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体通道的机制。方法采用慢性轻度不可预计应激(chronicmild unpredictable stress,CMUS)制作大鼠抑郁症模型。在造模前后测量基础糖水消耗量和体重的变化;离体海马脑片TTC染色检测各组大鼠海马损伤情况以及JWSNS含药血清的保护作用;运用细胞贴附式膜片钳记录模式检测大鼠海马NMDA受体通道开放概率和平均开放时间的变化,Tillvision图像处理系统检测海马神经元细胞内游离Ca2+浓度。结果CMUS可引起大鼠糖水偏爱度下降(P<0.01),JWSNS和MK801可提高应激性抑郁症大鼠糖水偏爱度(P<0.01,P<0.05),但对大鼠的体重无影响。JWSNS、20%JWSNS含药血清和MK801均能明显升高应激性抑郁症大鼠海马光密度值,降低海马脑片损伤百分率(P<0.05,P<0.01)。模型组大鼠海马NMDA受体通道开放概率明显增高(P<0.05),而JWSNS、MK801能明显降低海马NMDA受体通道开放概率(P<0.05,P<0.01);对NMDA受体通道平均开放时间无明显影响。JWSNS、MK801能明显降低应激性抑郁症大鼠海马神经元内升高的游离Ca2+浓度(P<0.01)。结论JWSNS具有抗抑郁作用,NMDA受体可能是其药理学作用靶点之一,调控海马神经元NMDA受体的功能状态可能是JWSNS发挥抗抑郁效应的直接作用机制之一。

关键词：应激抑郁症海马 N-甲基-D-天冬氨酸受体加味四逆散

加味四逆散对身心应激模型大鼠胃组织GASR、空肠组织VIPR2含量及其基因表达的影响

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四川大学学报（医学版） 2013年第6期44卷 871-876页

作者：谢慧臣刘芬杨强熊常初湖北民族学院医学院中医系恩施445000 湖北中医药大学中医临床学院中医系武汉430065

目的观察加味四逆散对慢性身心应激胃溃疡模型大鼠胃黏膜超微结构、胃窦组织胃泌素受体(GASR)、空肠组织血管活性肠肽受体2(VIPR2)含量及其基因表达的影响,并阐明其机制。方法将Wistar大鼠60只随机分为正常组,模型组,加味四逆散大、中... 详细信息

目的观察加味四逆散对慢性身心应激胃溃疡模型大鼠胃黏膜超微结构、胃窦组织胃泌素受体(GASR)、空肠组织血管活性肠肽受体2(VIPR2)含量及其基因表达的影响,并阐明其机制。方法将Wistar大鼠60只随机分为正常组,模型组,加味四逆散大、中、小剂量组,奥美拉唑组,每组10只。除正常组外,其余5组均采用慢性身心应激方法建立应激性胃溃疡大鼠模型。加味四逆散小、中、大剂量组大鼠每日分别灌胃0.25、0.5、1.0g/mL浓度的中药煎剂2mL,奥美拉唑组大鼠每日灌胃0.3mg/mL的奥美拉唑溶液2mL,正常组及模型组每日灌胃生理盐水2mL,造模结束后,透射电镜法观察腺胃区胃黏膜组织细胞及细胞间连接的超微结构改变,免疫组化法和Real time-PCR法检测胃窦组织细胞GASR、空肠组织细胞VIPR2蛋白含量及其基因表达的变化。结果电镜观察显示正常组大鼠胃黏膜上皮细胞间连接紧凑,胞膜完整,胞核形态及大小正常;模型组大鼠胃黏膜细胞受损严重;其余治疗组均较模型组不同程度好转。使用加味四逆散及奥美拉唑治疗后,各组胃窦组织GASR蛋白和mRNA的表达均较模型组增加(P加味四逆散大剂量组GASR、VIPR2蛋白和mRNA的表达接近正常组水平,两者相比差异无统计学意义(P>0.05)。与奥美拉唑组与加味四逆散小剂量组相比,加味四逆散大剂量组大鼠GASR蛋白和mRNA的表达均增高(P加味四逆散可改善慢性身心应激胃溃疡模型大鼠胃黏膜组织细胞的微观病理形态,并可调整胃组织GASR和空肠组织VIPR2的含量及其基因表达。

关键词：加味四逆散应激模型大鼠超微病理胃泌素受体血管活性肠肽受体2

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加味四逆散对抑郁模型大鼠肝损伤的保护作用

中国实验方剂学杂志 2020年第18期26卷 18-23页

作者：陈新牟雄军刘昊刘焱文刘松林湖北中医药大学中药资源与中药化学湖北省重点实验室武汉430065

目的:研究加味四逆散对慢性温和不可预知性应激(CUMS)结合孤养法制作抑郁模型所致肝损伤的保护作用。方法:将48只SD雄性大鼠随机分为6组,正常组,抑郁模型组,氟西汀(1.58 mg·kg-1·d-1)组,和加味四逆散低、中、高剂量(3.67,7.34,14.68 g... 详细信息

目的:研究加味四逆散对慢性温和不可预知性应激(CUMS)结合孤养法制作抑郁模型所致肝损伤的保护作用。方法:将48只SD雄性大鼠随机分为6组,正常组,抑郁模型组,氟西汀(1.58 mg·kg-1·d-1)组,和加味四逆散低、中、高剂量(3.67,7.34,14.68 g·kg-1·d-1)组,每组8只。造模给药结束后,采用生化试剂盒法检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平和肝脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)水平。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测加味四逆散对肝细胞中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的干预作用。结果:生化试剂盒检测显示,与正常组比较,模型组大鼠血清中的ALT,AST水平明显升高(P加味四逆散低、中剂量组可降低血清中ALT,AST和炎症因子TNF-α,IL-1β和IL-6水平(P加味四逆散低、中剂量组可以上调Caspase-3蛋白的表达,下调cleaved Caspase-3蛋白的表达(P加味四逆散能够通过调节多种生理生化和炎症因子指标的水平,抑制肝脏细胞凋亡来达到保肝作用。

关键词：加味四逆散抑郁模型肝损伤肝功能炎症因子细胞凋亡