检索结果-南通市图书馆

人端粒酶反转录酶基因电转染优化培养大鼠前软骨干细胞

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中国组织工程研究 2016年第14期20卷 2110-2116页

作者：彭义曲家富曹立海赵国志杜晓健唐山市第二医院足踝外科河北省唐山市063000

背景:将人端粒酶反转录酶转染至目的细胞中,可以提高其端粒酶活性,保持端粒的长度,在调控增殖和分化方面有重要作用。目的:探讨人端粒酶反转录酶基因转染对体外培养大鼠前软骨干细胞端粒酶活性及生物学特性的影响。方法:体外培养Wistar... 详细信息

背景:将人端粒酶反转录酶转染至目的细胞中,可以提高其端粒酶活性,保持端粒的长度,在调控增殖和分化方面有重要作用。目的:探讨人端粒酶反转录酶基因转染对体外培养大鼠前软骨干细胞端粒酶活性及生物学特性的影响。方法:体外培养Wistar大鼠前软骨干细胞,以反转录病毒PLXSN为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染,同时设置对照组、阴性对照序列组、转染组。用TRAP-ELISA法检测前软骨干细胞端粒酶活性,RT-PCR、Western blot检测前软骨干细胞人端粒酶反转录酶基因和蛋白的表达,CCK-8法、细胞生长曲线检测细胞生长增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。结果与结论:(1)人端粒酶反转录酶基因转染前软骨干细胞48 h,端粒酶活性明显升高;(2)与对照组、阴性对照序列组相比,转染组人端粒酶反转录酶基因和蛋白水平表达明显,细胞的生长速度明显增快,G0/G1期细胞数减少,S期细胞数增多,差异有显著性意义(P前软骨干细胞端粒酶活性明显升高,能够促进大鼠前软骨干细胞增殖。

关键词：端粒末端转移酶转染软骨细胞组织工程干细胞培养端粒酶反转录酶基因电转染大鼠前软骨干细胞

降钙素基因相关肽诱导前软骨干细胞成骨分化的实验研究

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中华物理医学与康复杂志 2016年第5期38卷 329-334页

作者：印卫锋李文凯李光辉郭风劲王江华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430030

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）体外定向诱导前软骨干细胞（PSCs）向成骨细胞分化的作崩及其机制。方法将分离培养的大鼠乳鼠PSCs分别置于含有不同浓度（包括0，1×10^-8mol／L，1×10^-9mol／L，1×10^-10nml／L）CGRP的DMEM／F12... 详细信息

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）体外定向诱导前软骨干细胞（PSCs）向成骨细胞分化的作崩及其机制。方法将分离培养的大鼠乳鼠PSCs分别置于含有不同浓度（包括0，1×10^-8mol／L，1×10^-9mol／L，1×10^-10nml／L）CGRP的DMEM／F12培养液中培养，观察细胞形态学变化。于细胞培养后不同时间点采用CCK-8榆洲细胞增殖情况；^将细胞随机分为实验组及对照组，实验组置于禽有CGRP（1×10μmol／L）的成骨培养基中培养，对照组则酋于不含CGRP的成骨培养基中培养。对各组细胞进行茜素红染色并检测碱性磷酸酶（AI．P）岔量；采用RT—pCR法检测各组细胞成骨相关基因[如Runt相关基因转录因子2（RUNX2）、骨桥蛋白（OPN）及骨钙蛋白（BGP）等]表达；采用Westernblot法检测B-catenin蛋白表达以评估CGRP对wut／β-catenin通路激活的影响。结果与对旦H组（其培养基中无CGRP）比较，CGRP在体外能显著促进PSCs细胞ALP含量增加，矿化结节增大、增多，显著上调RUNX2、OPN、BGP等成骨相关基因及蛋门β—catenin表达，但对PSCs增殖无明显影响。结论CGRP可能通过激活Wnt／β-catenin通路促进PSCs向成骨细胞方向分化。

关键词：干细胞前软骨干细胞降钙素基因相关肽成骨分化 Wnt/13一catenin通路

转化生长因子-β不同亚型对前软骨干细胞增殖分化的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2013年第6期42卷 659-664页

作者：丁然王庆蔡贤华广州军区武汉总医院骨科武汉430070

目的通过观察转化生长因子-β(TGF-β)3种不同亚型(β1、β2和β3)对前软骨干细胞(PSCs)的增殖分化及细胞外基质合成的影响,为构建组织工程学软骨组织寻找理想的细胞因子。方法通过免疫磁珠分选法得到经过筛选和纯化的PSCs细胞,分别用... 详细信息

目的通过观察转化生长因子-β(TGF-β)3种不同亚型(β1、β2和β3)对前软骨干细胞(PSCs)的增殖分化及细胞外基质合成的影响,为构建组织工程学软骨组织寻找理想的细胞因子。方法通过免疫磁珠分选法得到经过筛选和纯化的PSCs细胞,分别用含有浓度为10ng/mL的3种亚型的重组TGF-β培养液对PSCs进行培养。PSCs培养后第0、3、6、9天,采用MTT法与BrdU/PI双参法测细胞增殖及DNA合成水平,采用RT-PCR法测定ColⅡ、Aggrecan基因的表达。采用免疫组化法测定培养2周后各组细胞SOX9蛋白表达情况。结果培养3d后,TGF-β1组PSCs的增殖活性明显较对照组下降(P0.05)。6d后,与对照组相比,TGF-β1组细胞增殖活性明显降低(P0.05)。结论 TGF-β1能抑制PSCs增殖活性,而TGF-β2和TGF-β3具有促进PSCs增殖的作用,TGF-β1与TGF-β3均能促进PSCs细胞分化,而TGF-β2对于分化的诱导作用不明显。

关键词：前软骨干细胞转化生长因子-β 增殖分化

脉冲磁场与前软骨干细胞向成熟软骨细胞的增殖与分化:与Ihh/PTHrP信号通路活性有关吗?

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第20期14卷 3615-3619页

作者：丁然游洪波李锋孙凯华中科技大学附属同济医院矫形外科湖北省武汉市430030

背景:前期研究证实脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖具有促进作用,但其作用机制不明确。目的:进一步探讨脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖分化的影响,并观察其对前软骨干细胞Ihh/PTHrP信号通路活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法获取并纯化S... 详细信息

背景:前期研究证实脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖具有促进作用,但其作用机制不明确。目的:进一步探讨脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖分化的影响,并观察其对前软骨干细胞Ihh/PTHrP信号通路活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法获取并纯化SD大鼠前软骨干细胞,使用频率为50MHz,电场强度为1mT的脉冲电磁场进行干预,0.5h/次,2次/d,干预2,4,6d后收集细胞,以不给予磁场刺激的为空白对照。通过RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的基因表达水平,再通过Western-blot法测定各组细胞印度刺猬蛋白、甲状旁腺激素相关肽蛋白的表达水平。结果与结论:RT-PCR结果显示,Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达随磁场刺激时间延长而增高,且经磁场刺激前软骨干细胞的聚集蛋白聚糖明显高于空白对照组(P前软骨干细胞向成熟软骨细胞增殖分化,其作用机制可能与改变Ihh/PTHrP信号通路活性有关。

关键词：前软骨干细胞种子细胞 ihh-PTHrp信号通路软骨组织工程脉冲磁场

免疫磁珠分选兔前软骨干细胞及细胞研究平台的建立

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中国矫形外科杂志 2013年第13期21卷 1352-1358,1356-1358页

作者：张瑞王俊芳程力南京医科大学附属无锡市人民医院骨科江苏无锡214023

[目的]研究兔前软骨干细胞PSCs,(precartilagious stem cells)的分离、培养方法及增殖、表型特征,为细胞移植治疗椎间盘退变,提供合适的种子细胞。[方法]取胎兔骨骺周围软骨膜(LaCroix环)中的细胞进行原代培养,然后采用免疫磁珠分离系... 详细信息

[目的]研究兔前软骨干细胞PSCs,(precartilagious stem cells)的分离、培养方法及增殖、表型特征,为细胞移植治疗椎间盘退变,提供合适的种子细胞。[方法]取胎兔骨骺周围软骨膜(LaCroix环)中的细胞进行原代培养,然后采用免疫磁珠分离系统分选纯化PSCs。体外培养,传代,冻存复苏,绘制生长曲线,观察细胞特性。分别采用免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定纯化后的PSCs。[结果]免疫磁珠分离可获得纯度较高的兔PSCs,培养后成活率高,细胞状态良好。细胞冻存复苏后,细胞增殖速度、细胞形态及表面标志物无明显变化。免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定后,细胞都有明显的PSCs表面特异性标记物的表达。[结论]PSCs存在于LaCroix环中,免疫磁珠分离法得到的PSCs,体外培养条件下,细胞增殖较快,生物学特性稳定。

关键词：前软骨干细胞免疫磁珠分选成纤维细胞生长因子受体-3

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中华实验外科杂志 2011年第7期28卷 1048-1051页

作者：许凯陈安民成薇婷郭风劲华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属中西医结合医院肿瘤科

目的观察印度豪猪蛋白（Ihh）和甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）信号通路对大鼠前软骨干细胞（PSCs）分化和增殖的调控作用。方法应用免疫磁珠筛选技术获得大鼠PSCs。噻唑蓝（M3T）比色法筛选Ihh信号阻断剂环王巴明（Cyclopamine，Cyclo）... 详细信息

目的观察印度豪猪蛋白（Ihh）和甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）信号通路对大鼠前软骨干细胞（PSCs）分化和增殖的调控作用。方法应用免疫磁珠筛选技术获得大鼠PSCs。噻唑蓝（M3T）比色法筛选Ihh信号阻断剂环王巴明（Cyclopamine，Cyclo）的最低有效浓度，PTHrP真核质粒（pEGPF—N1-PTHrP）转染PSCs。细胞分4组：对照组（Control，PBS100μl，n=3）、Ihh信号阻断组（Ihh^-，20nmol／L Cyclo 100μl，n=3）、PTHrP信号增强组（PTHrP^＋，1．0μg pEGPF—N1-PTHrP，n=3）和双重干预组（Ihh^-／PTHrP^＋，20nmol／L Cyclo 100tμ＋1．0μg pEGPF—N1-PTHrP，n=3）。干预2周后应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Ihh、PTHrP、Ⅱ型胶原（ColⅡ）的mRNA表达，BrdU掺入法测细胞增殖，免疫组织化学检测ColⅡ表达，阿辛蓝染色检测酸性糖胺多糖含量。结果成功获得PSCs，筛选获得Cyclo最低有效工作浓度为20nmol／L；1．0μg PTHrP真核质粒转染效率〉60％，转染后高表达该基因；Ihh^-组ColⅡ基因和蛋白表达明显下降，PTHrP^＋组和Ihh^-／PTHrP^＋组ColⅡ基因和蛋白表达稳定，酸性糖胺多糖分泌多；BrdU实验显示Ihh^-组和Ihh／PTHrP^＋组增殖率分别为（23．26±3．96）％和（21．65±5．12）％，相对Control组（35．42±3．79）％差异有统计学意义（P〈0．01），而两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Ihh-PTHrP信号通路参与对PSCs分化和增殖的调控，Ihh信号可独立调控PSCs的增殖，但对其分化的调控依赖PTHrP信号的作用。

关键词：前软骨干细胞信号通路分化增殖

TGF-β_3诱导大鼠前软骨干细胞向软骨细胞特性方向分化及其在KLD-12自组装肽纳米凝胶中的培养

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华中科技大学学报（医学版） 2010年第1期39卷 1-5页

作者：孙凯游洪波陈安民郭风劲祁军徐志刚丁然华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科武汉430030

目的探讨软骨组织工程方法中修复软骨缺损理想的种子细胞和支架材料。方法免疫磁珠分离纯化新生大鼠前软骨干细胞(PSCs),分别采用KLD-12自组装肽纳米凝胶三维培养(实验组)和普通培养瓶平面培养(对照组),用转化生长因子β3(TGFβ-3)诱导... 详细信息

目的探讨软骨组织工程方法中修复软骨缺损理想的种子细胞和支架材料。方法免疫磁珠分离纯化新生大鼠前软骨干细胞(PSCs),分别采用KLD-12自组装肽纳米凝胶三维培养(实验组)和普通培养瓶平面培养(对照组),用转化生长因子β3(TGFβ-3)诱导两组PSCs向软骨细胞特性方向分化。利用RT-PCR、免疫组化等方法测定其向软骨细胞特性方向分化过程中特异性细胞外基质Ⅱ型胶原(collagenⅡ)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)表达的情况。结果RT-PCR和免疫组化检测结果表明KLD-12自组装肽纳米凝胶组细胞在诱导7、14 d后均有collagenⅡ和aggrecan表达,且RT-PCR检测结果表明KLD-12自组装肽凝胶组细胞的collagenⅡ和aggrecan mRNA表达水平较对照组高,其差异有统计学意义(均P软骨方向分化,诱导后的PSCs与KLD-12自组装肽凝胶复合有望构建组织工程化软骨,KLD-12自组装肽纳米凝胶是较好的软骨组织工程细胞支架。

关键词：前软骨干细胞转化生长因子β3 细胞外基质自组装肽纳米凝胶

激活的Notch1信号系统抑制前软骨干细胞凋亡及其机制研究

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中华小儿外科杂志 2006年第11期27卷 592-595页

作者：张衣北陈安民郭风劲黄士龙华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430030

目的研究激活的Notch1信号系统抑制体外培养的前软骨干细胞(precartilainous stem cells,PSCs)凋亡及其机制。方法用RT-PCR检测PSCs细胞中Notch信号系统的表达,并分别向培养细胞中加入Notch1激活剂rhNF-kB、抑制剂γ-secretase inhibito... 详细信息

目的研究激活的Notch1信号系统抑制体外培养的前软骨干细胞(precartilainous stem cells,PSCs)凋亡及其机制。方法用RT-PCR检测PSCs细胞中Notch信号系统的表达,并分别向培养细胞中加入Notch1激活剂rhNF-kB、抑制剂γ-secretase inhibitorⅡ(MW167)和Bcl-2抑制剂HA 14-1,空白对照加PBS缓冲液,在凋亡诱导剂Celecoxib诱导后,用MTT检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡和Western Blot检测Hes-1及Bcl-2蛋白的表达。结果PSCs细胞中存在Notch1／Jagged1信号通路,rhNF-kB组细胞活力增加,凋亡较少,Hes-1蛋白和Bcl-2蛋白表达明显增加,而MW167组、HA 14-1组和对照组细胞凋亡明显,差异有显著性意义(P细胞凋亡。

关键词： Notch信号系统前软骨干细胞凋亡

高效绿色荧光蛋白基因修饰前软骨干细胞与骨基质明胶复合体异位成软骨的研究

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中华实验外科杂志 2011年第7期28卷 1036-1038页

作者：游洪波陈安民孙凯王国宾王茂朋张国良华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430030

目的观察高效绿色荧光蛋白（EGFP）基因修饰前软骨干细胞（PSCs）与骨基质明胶（BMG）复合体的成软骨活性。方法EGFP基因转染PSCs得到EGFP基因修饰PSCs。将其与BMG的复合体体外培养后植入裸鼠右后肢肌袋中，左后肢植入BMG作对照。定期... 详细信息

目的观察高效绿色荧光蛋白（EGFP）基因修饰前软骨干细胞（PSCs）与骨基质明胶（BMG）复合体的成软骨活性。方法EGFP基因转染PSCs得到EGFP基因修饰PSCs。将其与BMG的复合体体外培养后植入裸鼠右后肢肌袋中，左后肢植入BMG作对照。定期取材测定移植物的重量、细胞数，观察GFP表达，免疫组织化学检测Ⅱ型胶原表达。结果EGFP基因修饰PSCs体外培养6周仍有较强GFP表达。移植后1～6周均有较强GFP表达，3～6周有较强Ⅱ型胶原表达。移植后2～6周复合体平均重量分别为（0．71±0．07）、（1．35±0．32）、（1．76±0．48）、（1．96±0．54）、（1．89±0．13）g，均比对照组重（P〈0．01）；1～6周时复合体平均所含细胞总数分别为（40．0±2．1）×10^6、（67．0±5．6）×10^6、（139．0±11．2）×10^6、（169．0±2．9）×10^6、（173．0±13．5）×10^6、（169．0±6．9）×10^6个，均大于对照组（P〈0．01）。结论EGFP基因修饰PSCs与BMG复合体能在异位形成软骨组织。

关键词：前软骨干细胞基因转染骨基质明胶