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STAT3-siRNA-前胸腺素α共负载热敏性纳米胶束对肿瘤相关树突状细胞免疫功能调控的影响

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STAT3-siRNA-前胸腺素α共负载热敏性纳米胶束对肿瘤相关树突状细...

作者：欧文全苏州大学

学位级别：硕士

目的:将负载前胸腺素(ProTα)多肽片段,具有温度敏感性的聚合物胶束用于负载STAT3-siRNA到达肿瘤相关树突状细胞(TADCs),下调STAT3蛋白的表达,调控肿瘤相关树突状细胞的功能,发挥其体内免疫抗肿瘤效果。方法:通过酰胺键反应合成壳聚糖... 详细信息

目的:将负载前胸腺素(ProTα)多肽片段,具有温度敏感性的聚合物胶束用于负载STAT3-siRNA到达肿瘤相关树突状细胞(TADCs),下调STAT3蛋白的表达,调控肿瘤相关树突状细胞的功能,发挥其体内免疫抗肿瘤效果。方法:通过酰胺键反应合成壳聚糖接枝的泊洛沙姆(PO-CS)载体,采用FT-IR和1H-NMR进行结构验证,并用芘探针测量其形成胶束后的临界胶束浓度。在溶液中形成胶束后,利用马尔文粒径电位测定仪中测量其粒径和电位大小,同时测量15℃,25℃和37℃条件下胶束的粒径变化考察其温度敏感性。本实验还分别测量了泊洛沙姆(PO)、壳聚糖(CS)以及PO-CS载体在不同温度下的粒径变化情况来考察该胶束的温度敏感性来源。将制备好的胶束置于透射电镜(TEM)中观察其表面形态,并通过琼脂糖凝胶电泳验证胶束对siRNA的保护作用。利用MTT的方法考察胶束对树突状细胞(DCs)、脾脏细胞(Spleen Cells)和293T细胞的安全性;并使用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜考察PO-CS胶束负载ProTα和siRNA进入DCs的情况及聚合物胶束温度敏感性的考察。利用Western Blot方法检测负载STAT3胶束与TADCs共培养后STAT3蛋白的下调情况,同时使用流式细胞仪检测STAT3-siRNA发挥沉默效果后,ProTα促进TADCs表达CD40,CD86及IL-12的情况。采用IVIS Lumina II小动物成像仪观察胶束负载Cy5-siRNA的体内动态情况,使用红外热成像仪考察胶束体内冷刺激所需的时间。建立B16黑色素瘤肿瘤模型考察负载ProTα和STAT3-siRNA的ProTα-PO-CS载体的体内药效学效果。结果:本实验所构建PO-CS载体容易形成胶束,CMC较低(5.0μg/ml)。TEM结果表明,PO-CS胶束外观圆整,粒径为231.7±4.6nm,电位为17.3±0.3mV,PI值较小,对siRNA的包封率达90%以上,且具有一定的温度敏感性。MTT结果显示,PO-CS胶束的DCs细胞毒性低,并且其负载的siRNA在树突状细胞中的摄取(81%)要比巨噬细胞(25%)高。激光共聚焦显微镜结果表明,ProTα/PO-CS胶束能很好地将siRNA转运到TADCs中,并且具有很好的温度敏感性,能在冷刺激的作用下实现siRNA的释放。Western Blot结果表明,胶束负载的STAT3-siRNA能有效沉默TADCs中STAT3蛋白的表达,并且能在流式细胞仪中观察到ProTα促进TADCs中表面成熟因子CD40,CD86的上调,而未加STAT3-siRNA处理组并无此功能。该结果表明共负载STAT3-siRNA和ProTα处理后,TADCs的功能得到恢复,能向成熟树突状细胞分化。IL-12因子的上调结果也证明经共负载STAT3-siRNA和ProTα胶束治疗后,TADCs恢复正常的功能。体内小动物成像结果表明,胶束负载siRNA后,持续长时间观察到Cy5-siRNA的体内动态情况。红外热成像结果表明,体内达到冷刺激效果温度所需的时间为20-25min。体内肿瘤生长抑制实验结果表明,与PBS组相比,负载ProTα和STAT3-siRNA的ProTα-PO-CS冷刺激胶束组能很好地调控TADCs的功能,发挥免疫抗肿瘤效果,抑制肿瘤的生长,同时释放更多的IL-12,共同抑制肿瘤的生长。结论:ProTα-PO-CS温度敏感性胶束能将siRNA递送到TADCs中,沉默STAT3蛋白的表达,调控TADCs的功能,恢复ProTα促进树突状细胞向成熟树突状细胞分化的功能,发挥联合免疫抗肿瘤的治疗效果。

关键词：胶束温度敏感性肿瘤相关树突状细胞 STAT3-siRNA 前胸腺素α

β族胸腺素和前胸腺素α在人膀胱移行细胞癌中的表达和意义

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β族胸腺素和前胸腺素α在人膀胱移行细胞癌中的表达和意义

作者：郑杨天津医科大学

学位级别：硕士

目的前胸腺素α是一种存在于所有哺乳动物组织中并且高度保守的天然无结构、强酸性小分子蛋白质,具有重要的生物学功能。β族胸腺素是一种刺激细胞运动的物质。它在多种肿瘤组织中表达明显升高,其表达上调与转移潜在性正相关。国内外... 详细信息

目的前胸腺素α是一种存在于所有哺乳动物组织中并且高度保守的天然无结构、强酸性小分子蛋白质,具有重要的生物学功能。β族胸腺素是一种刺激细胞运动的物质。它在多种肿瘤组织中表达明显升高,其表达上调与转移潜在性正相关。国内外对于前胸腺素α和β族胸腺素在膀胱癌中的表达及相关性的研究甚少。本次实验就是通过免疫组织化学方法来研究前胸腺素α和β族胸腺素在膀胱癌中的表达,并对其在膀胱癌的诊断和治疗中的意义进行展望。对象和方法 1.材料实验标本选用天津医科大学第二附属医院1995年4月至2001年4月手术切除的86例膀胱粘膜组织存档蜡块,并经病理证实。 2.临床及病理资料患者术前均未行放疗、化疗与免疫治疗。其中膀胱移行细胞癌76例,男56例,女20例;年龄35-86岁,平均54.8岁。按照WHO膀胱肿瘤组织学分类标准(1999)分级:G24例,G28例,G24例;TNM分期:T26例;T50例。正常膀胱粘膜10例,均为前列腺增生开放性手术时留取,均为男性,年龄48-72岁,平均58.4岁。2组间年龄(F=3.72)、性别(F=2.63)差异无统计学意义。 3.主要试剂胸腺素β4、胸腺素β10、胸腺素β15、前胸腺素α和CD34的兔抗人多克隆抗体(一抗),购自天津润泰科技发展有限公司。 4.方法免疫组织化学染色,采用SABC法检测了76例膀胱移行细胞癌组织及10例正常膀胱粘膜的Tβ4、Tβ10、Tβ15、ProTα和CD34蛋白表达,并计数微血管密度。用PBS代替一抗作阴性对照。结果判定:细胞浆中出现棕黄色为阳性显色,用染色强度和阳性细胞指数进行综合判定。 5.统计与分析采用SPSS13.0统计软件对实验数据进行统计处理,三组样本以上计量资料用方差分析,多样本均数间的多重比较用Dunnett-t检验,计量资料用Pearson相关分析,计数资料用卡方检验分析。以P＜0.05为差异有显著性。检验水准:双侧α=0.05。结果 1.76例膀胱移行细胞癌组织中:Tβ4、Tβ10、Tβ15和ProTα蛋白表达阳性物质呈棕黄色细颗粒状,主要定位于膀胱癌癌细胞和膀胱粘膜上皮细胞胞浆,也见于脉管内皮细胞及间质细胞。全部的76例膀胱移行细胞癌组织,Tβ4、Tβ10、Tβ15和ProTα高表达率分别为88.2%(67/76)、28.9%(22/76)、76.3%(58/76)和86.8%(66/76)。10例正常膀胱粘膜组织中均无表达或低表达。 2.Tβ4、Tβ15和ProTα在膀胱癌组织的高表达率与膀胱癌的分期分级有明显相关性,Tβ10只与膀胱癌的分期有相关性。ProTα在复发的膀胱癌和未复发的膀胱癌两者间差异有意义(p＜0.05)。Tβ4、Tβ10、Tβ15和ProTα的蛋白表达,在膀胱移行细胞癌组织年龄、性别和肿瘤数目上均差异无意义(p＞0.05)。 3.膀胱癌组织内微血管在同一肿瘤内也存在分布与数量的差异,其中肿瘤边缘组显著高于肿瘤中心组和肿瘤浅表组(P＜0.05)。76例膀胱癌总的微血管密度显著高于正常膀胱微血管密度(P＜0.05),且肿瘤边缘区微血管密度均值与正常膀胱比较相差非常显著(P＜0.05)。微血管密度与膀胱癌的分期分级和复发呈正相关(p＜0.05)。 4.血管内皮细胞Tβ10、Tβ15的蛋白表达在正常膀胱组织和膀胱癌组织中都呈低表达或无表达,提示Tβ10、Tβ15无促进膀胱癌边缘血管生成的作用。血管内皮细胞中Tβ4与ProTα阳性的膀胱癌中,其微血管密度较阴性组显著增加,尤以癌组织边缘区微血管密度增加更为显著。结论 1.Tβ4、Tβ15和ProTα蛋白表达与膀胱癌的TNM分期分级正相关: 2.膀胱癌微血管密度与膀胱癌TNM分期分级和复发呈正相关: ***α蛋白表达与膀胱癌的复发正相关,Tβ4、Tβ10和Tβ15与膀胱癌的复发无关。 4.Tβ4与ProTα蛋白在直接促进膀胱肿瘤细胞增殖转移的同时,也可能通过促进肿瘤周围血管新生的方式进一步促进肿瘤细胞增殖转移。

关键词：胸腺素β4 胸腺素β10 胸腺素β15 前胸腺素α 膀胱癌微血管密度

膀胱移行细胞癌组织中前胸腺素α的表达及其临床意义

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临床泌尿外科杂志 2012年第8期27卷 598-600页

作者：林哲邓玮明何娅娣李辽源中山大学附属佛山医院佛山市第一人民医院泌尿外科广东佛山528000 中山大学附属第三医院泌尿外科中山大学附属第三医院体检中心

研究前胸腺素α(PTMA)在膀胱移行细胞癌组织中的表达情况,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系。方法:选择96例膀胱移行细胞癌标本,10例癌旁正常膀胱组织标本。采用免疫组化检测膀胱癌和癌旁正常组织中PTMA蛋白的表达。癌标本中非肌层... 详细信息

研究前胸腺素α(PTMA)在膀胱移行细胞癌组织中的表达情况,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系。方法:选择96例膀胱移行细胞癌标本,10例癌旁正常膀胱组织标本。采用免疫组化检测膀胱癌和癌旁正常组织中PTMA蛋白的表达。癌标本中非肌层浸润性癌51例,肌层浸润性癌45例;单发肿瘤57例,多发肿瘤39例;G122例、G231例、G343例;非肌层浸润性癌中未复发29例,复发22例。结果:随病理分级和临床分期增加,PTMA相对表达量逐渐增高。G1、G2、G3膀胱癌PTMA蛋白表达阳性率分别为13.6%、32.3%,62.8%,均差异有统计学意义(P<0.05)。正常膀胱组织中无PTMA蛋白表达。非肌层浸润性肿瘤和肌层浸润性肿瘤中PTMA蛋白表达阳性率为37.3%和77.8%,差异有统计学意义(P=0.0002)。随访12～60个月,非肌层浸润性膀胱癌中,复发组与未复发组中PTMA蛋白高表达阳性率为68.2%和31.0%,差异有统计学意义(P<0.001))。结论:检测膀胱移行细胞癌组织中PTMA有助于膀胱癌的诊断及评估判断,PTMA蛋白高表达与膀胱尿路上皮癌的恶性程度及预后相关。

关键词：膀胱移行细胞癌前胸腺素α 复发

梅花鹿前胸腺素对小鼠成骨细胞生物活性影响及机制研究

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梅花鹿前胸腺素对小鼠成骨细胞生物活性影响及机制研究

作者：薛东明长春中医药大学

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目的:以梅花鹿前胸腺素α(PTMA)为研究对象,探究其对成骨细胞生长的作用,明确PTMA促进成骨细胞增殖的作用机制,为阐明PTMA生物活性及其机制提供理论支持。方法:以初生期(PS)、快速生长期(RG)和骨化期(OS)三个不同生长时期的梅花鹿鹿茸... 详细信息

目的:以梅花鹿前胸腺素α(PTMA)为研究对象,探究其对成骨细胞生长的作用,明确PTMA促进成骨细胞增殖的作用机制,为阐明PTMA生物活性及其机制提供理论支持。方法:以初生期(PS)、快速生长期(RG)和骨化期(OS)三个不同生长时期的梅花鹿鹿茸作为样品,分别提取鹿茸的总RNA和总蛋白;利用Illumina Hi Seq2000数据平台和i TRAQ技术对样本进行转录组和蛋白组测序;对转录组和蛋白组数据进行联合分析;根据PTMA核酸和蛋白序列对其进行了结构预测分析;构建了PTMA基因过表达载体;在体外合成靶向PTMA基因的si RNA序列;根据CCK-8、流式细胞术、线粒体膜电位检测法(JC-1)等实验的结果,检测了过表达和敲除PTMA基因对小鼠成骨细胞活性的影响;对过表达和敲除PTMA基因的小鼠成骨细胞进行转录组测序,筛选候选基因及其信号通路;检测候选基因及蛋白的表达量。结果:1.建立了不同时期鹿茸的转录组和蛋白组数据库,共获得210,437个Unigene和2,261个蛋白质。以初生期为对照,进行差异基因和差异蛋白分析,PS vs RG组获得11,294个差异基因及236个差异蛋白;PS vs OS组获得4,924个差异基因和211个差异蛋白。2.对转录组和蛋白组数据进行联合分析,结果显示转录组与蛋白组数据呈弱相关。进一步筛选差异基因/蛋白得到了8个与鹿茸生长发育相关的候选基因/蛋白。其中,PTMA基因可作为进一步研究的候选基因。3.对梅花鹿PTMA的结构分析显示,其编码110个氨基酸,分子量为12071.81Da,理论等电点为3.68;与野猪(Sus scrofa)、环尾狐猴(Lemur catta)和非洲跳鼠(Jaculus jaculus)PTMA的氨基酸亲缘关系最近。4.优化了PTMA序列后成功构建了真核过表达载体pc DNA3.1(-)-PTMA;针对成骨细胞合成并筛选得到沉默效率最高的si RNA-PTMA片段;确定了过表达和沉默PTMA基因的最佳条件。5.在成骨细胞过表达PTMA基因,细胞的存活率显著上升(p前胸腺素α对骨生长发育具有重要的调节作用。

关键词：鹿茸前胸腺素α 成骨细胞多组学联合分析细胞凋亡

40Hz光照对中风小鼠海马区各类细胞的影响及其神经保护机制的探究

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40Hz光照对中风小鼠海马区各类细胞的影响及其神经保护机制的探究

作者：王梦珍哈尔滨工业大学

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中风是肆虐中国的第一健康杀手,是造成中国人民寿命损失的第一大病因。当血凝块阻塞或堵塞通向大脑的动脉时,血管流向后面的脑组织就会失去氧气和营养,就会发生缺血性中风。中风最终涉及到脑细胞的死亡和功能障碍,以及反映受损脑区位置... 详细信息

中风是肆虐中国的第一健康杀手,是造成中国人民寿命损失的第一大病因。当血凝块阻塞或堵塞通向大脑的动脉时,血管流向后面的脑组织就会失去氧气和营养,就会发生缺血性中风。中风最终涉及到脑细胞的死亡和功能障碍,以及反映受损脑区位置和大小的神经缺陷。在过去的十年里,中风在治疗和预防方面取得了重大的进展。很多研究都在重强调中风后不可逆损伤脑细胞的基本机制。研究方向主要集中在什么使神经元容易死亡,以及什么策略使神经元能够抵抗缺血性损伤。已有研究发现驱动40Hz的伽马波振荡可能会引起一种全面的神经保护反应。本文借助小鼠双侧颈总动脉阻塞模型,通过免疫组化的方法通过比较小鼠中风后和40Hz光照治疗前后大脑海马中小胶质细胞,星形胶质细胞,神经元细胞,中间神经元和新生神经元的不同,研究40Hz光照对缺血性中风后大脑的神经保护作用。结合体外培养神经元,探究抑制凋亡蛋白前胸腺素α的表达,发现神经元保护的新途径,探索卒中治疗的新型方案。研究表明40Hz光照可以有效缓解卒中后小鼠大脑的小胶质细胞和星形胶质细胞的炎症反应,增加大脑中新生神经元的数目,修复受损的神经系统,还可以促进抗凋亡蛋白Pro Tα在大脑中的表达,抑制组织缺血后细胞坏死引发的进一步凋亡和神经系统的进一步损坏,在一定程度上可以抵抗缺血性卒中带来的损伤。不同于传统的手术治疗,通过光照治疗也可以缓解损伤,促进大脑的再生,保护脑组织的功能。通过刺激凋亡抑制剂的表达来抑制卒中后脑组织坏死及其扩展过程,有望成为治疗神经损伤的新手段。

关键词：脑卒中 2VO模型 40Hz 神经保护前胸腺素α