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PI3Kp110beta和前强啡肽在人肝癌组织中的表达

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中华实验外科杂志 2008年第11期25卷 1399-1400页

作者：周业庭吴柏华徐本文钱建民江苏省沭阳县人民医院外科 223600 复旦大学附属华山医院外科

目的观察人肝癌中磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K）p110beta和前强啡肽的表达。方法应用半定量逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中PI3Kp110beta和前强啡肽mRNA基因的相对表达量。结果PI3Kp110beta和... 详细信息

目的观察人肝癌中磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K）p110beta和前强啡肽的表达。方法应用半定量逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中PI3Kp110beta和前强啡肽mRNA基因的相对表达量。结果PI3Kp110beta和前强啡肽在中晚期肝癌中的表达高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（90％比10％；80％比20％，P〈0．05）。结论中晚期肝癌中PI3Kp110beta和前强啡肽处于过度表达状态，参与肝癌的发生、发展。

关键词：癌肝细胞 PI3Kp110beta 前强啡肽免疫组织化学

慢病毒介导的大鼠前强啡肽基因在骨髓间充质干细胞中的表达

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医学研究生学报 2017年第2期30卷 138-144页

作者：张创强孙柯马珏赵国栋汕头大学医学院汕头医学硕士515041 广东省人民医院(广东省医学科学院)麻醉科广州510080

目的强啡肽镇痛效应强、安全性好、无呼吸抑制和成瘾性等优势,是目前生物镇痛研究的重点。探讨慢病毒介导的大鼠前强啡肽(PDYN)基因在骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)中的表达,为后续研究大鼠癌痛模型的生物镇痛提供条件。方法采用贴壁筛选... 详细信息

目的强啡肽镇痛效应强、安全性好、无呼吸抑制和成瘾性等优势,是目前生物镇痛研究的重点。探讨慢病毒介导的大鼠前强啡肽(PDYN)基因在骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)中的表达,为后续研究大鼠癌痛模型的生物镇痛提供条件。方法采用贴壁筛选法分离和扩增BM-MSCs,流式细胞学和体外成脂、成骨细胞诱导分化实验鉴定。构建大鼠PDYN慢病毒载体并感染BM-MSCs,倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达和Western blot法筛选最适感染复数(MOI);实验分为空白组(BM-MSCs)、实验组(PCDH-CMV-PDYN-EF1-cop GFP)、空载体组(PCDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测PDYN表达变化,采用免疫细胞化学染色法检测强啡肽蛋白表达。结果BM-MSCs呈长梭形纤维细胞样贴壁生长,多数表达CD29、CD44、CD90,少数表达CD45。成脂诱导培养后油红O染色为阳性;成骨诱导培养后出现矿化结节,经茜素红染色呈橘红色。流式细胞仪检测示BM-MSCs细胞中CD29、CD90、CD44、CD45阳性率分别为(99.80±0.19)%、(99.62±0.24)%、(96.86±1.27)%、(0.82±0.06)%,转染PDYN基因后BM-MSCs表面标记CD29、CD90、CD44、CD45阳性率分别为(99.59±0.34)%、(98.06±1.51)%、(95.23±0.71)%、(10.23±0.59)%,转染前后BM-MSCs干细胞特性差异无统计学意义(P>0.05)。经PCR扩增克隆测序鉴定慢病毒载体PCDH-CMV-PDYN-EF1-cop GFP构建成功,重组慢病毒滴度为5×106IU/m L。绿色荧光蛋白的表达和Western blot结果示慢病毒MOI=100为最佳病毒感染复数。qPCR、Western blot检测到经慢病毒载体感染后的BM-MSCs中PDYN基因表达均上调(P强啡肽蛋白表达显著增强。结论成功培养BM-MSCs和构建大鼠PDYN基因过表达慢病毒载体,在BM-MSCs中能高效稳定表达PDYN基因和分泌强啡肽蛋白。

关键词：前强啡肽强啡肽骨髓间充质干细胞载体构建慢病毒

慢性束缚应激模型大鼠海马脑啡肽mRNA和前强啡肽mRNA的表达及中药复方的影响

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中华中医药杂志 2006年第4期21卷 209-212页

作者：李伟陈家旭中国药品生物制品检定所国家药物安全评价监测中心北京100176 北京中医药大学北京100029

目的:探讨中药复方逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸抗慢性束缚性应激的机理。方法:采用单纯束缚的方法建立慢性束缚性应激的大鼠模型,提取海马总RNA,采用RT-PCR反应扩增脑啡肽和前强啡肽基因,比较二者在海马中的表达情况。结果:显示慢性... 详细信息

目的:探讨中药复方逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸抗慢性束缚性应激的机理。方法:采用单纯束缚的方法建立慢性束缚性应激的大鼠模型,提取海马总RNA,采用RT-PCR反应扩增脑啡肽和前强啡肽基因,比较二者在海马中的表达情况。结果:显示慢性束缚应激时大鼠海马内脑啡呔mRNA和前强啡肽mRNA的表达明显增强,并且时间越长增强越明显。逍遥散和四君子汤都能降低海马内脑啡肽mRNA的表达,三个复方都能降低前强啡肽mRNA的表达,逍遥散的作用明显优于金匮肾气丸。结论:脑啡肽和前强啡肽都参与了海马对应激的调控,对内源性阿片系统的调节是三个中药复方调节应激的重要途径之一。

关键词：慢性束缚性应激中药脑啡肽前强啡肽

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携带前强啡肽基因重组质粒的构建及鉴定

中华实验外科杂志 2008年第2期25卷 142-142页

作者：肖建斌程飚项红兵招伟贤戴双华广东省中医院麻醉科广州510120 广州军区广州总医院整形外科

强啡肽（dynorphin）是作用于κ-阿片受体的神经肽，广泛分布于外周和中枢神经系统，涉及到许多生理和病理变化如吗啡耐受和依赖等。我们利用前强啡肽基因（prodynorphin gene）构建pUC57-prodynorphin重组质粒为下一步探讨其在吗啡耐... 详细信息

强啡肽（dynorphin）是作用于κ-阿片受体的神经肽，广泛分布于外周和中枢神经系统，涉及到许多生理和病理变化如吗啡耐受和依赖等。我们利用前强啡肽基因（prodynorphin gene）构建pUC57-prodynorphin重组质粒为下一步探讨其在吗啡耐受和依赖中的作用奠定了基础。

关键词：基因重组质粒前强啡肽鉴定 κ-阿片受体中枢神经系统吗啡耐受病理变化神经肽

脊髓背角中强啡肽A表达的上调对福尔马林引起的大鼠炎性水肿的影响

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中国康复医学杂志 2006年第6期21卷 510-513页

作者：祁文秀卢崇让山西医科大学汾阳学院生理教研室汾阳032200 山西省太原市中心医院麻醉科

目的:利用鞘内注射前强啡肽mRNA的反义寡聚核苷酸,观察由福尔马林引起的大鼠后脚炎性水肿程度的变化,来证明脊髓背角中强啡肽(dynorphin,Dyn)A的量可能影响外周炎症反应的大小。方法:在3组成年Wistar大鼠(每组5只)预先在鞘内分别注入对... 详细信息

目的:利用鞘内注射前强啡肽mRNA的反义寡聚核苷酸,观察由福尔马林引起的大鼠后脚炎性水肿程度的变化,来证明脊髓背角中强啡肽(dynorphin,Dyn)A的量可能影响外周炎症反应的大小。方法:在3组成年Wistar大鼠(每组5只)预先在鞘内分别注入对抗前强啡肽mRNA的反义寡聚核苷酸(AS-ODN)、生理盐水(NS)、和反序的反义寡聚核苷酸(RS-ODN);4h后,再给各组动物一侧后脚掌皮下注射福尔马林(0.5%,100μl),并分别在注射后的1h、2h、3h三个时间点,各以5只动物先检查后脚掌直径,以福尔马林注射前的直径为对照,算出直径增加的百分数,作为炎性水肿变化的指标,并在脚掌检测后立即处死动物作免疫组化检测,确定各时间点大鼠两侧脊髓背角浅层中DynA(1—8)免疫反应样物质的光密度值。结果:①3组动物在福尔马林注射后的3个时间点,注射侧后脚掌的炎性水肿均呈进行性的加重,但在鞘内注入AS-ODN的实验组,各个时间点的水肿程度均明显地小于注射了生理盐水和RS-ODN的两个对照组;而在两个对照组相应的各时间点之间无显著性差异。②在免疫组化检测中,可看到三组动物注射侧脊髓背角中都出现DynA(1-8)的光密度值随测定值时间推后而增加,实验组各时间点的测定值均明显地小于两个对照组相应时间点的测定值,但后两组的各相应时间点的测定值之间无显著性差异。结论:鞘内注射反义核苷酸后福尔马林引起的脊髓中强啡肽A的表达上调被阻止,并且平行地出现了局部炎性水肿发展的被阻止。

关键词：前强啡肽反义寡聚核苷酸强啡肽A 炎性水肿脊髓背角大鼠