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前动力蛋白2在炎症相关性结直肠肿瘤动物模型中的表达

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中华实验外科杂志 2017年第7期34卷 1149-1151页

作者：汪昕杨俊段栩飞黄茂华卞红强杨虎朱旭华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院(武汉市妇幼保健院)普外科武汉430016 武汉大学人民医院胃肠外Ⅱ科 430060

目的通过构建体内及体外炎症模型，证明前动力蛋白2（PK2）在溃疡性结肠炎中的作用。方法构建促癌剂甲基偶氮甲烷（AOM）／促炎剂葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的炎症相关性结直肠肿瘤模型，在疾病的不同发展阶段，采用实时定量聚合酶链反应... 详细信息

目的通过构建体内及体外炎症模型，证明前动力蛋白2（PK2）在溃疡性结肠炎中的作用。方法构建促癌剂甲基偶氮甲烷（AOM）／促炎剂葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的炎症相关性结直肠肿瘤模型，在疾病的不同发展阶段，采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法检测PK2mRNA表达情况，Western blot法检测其蛋白水平表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测结肠组织匀浆中蛋白表达；脂多糖（LPS）诱导NCM460细胞株激活炎症信号通路，分别从mRNA及蛋白水平检测细胞中PK2的表达。结果在AOM／DSS诱导的炎症相关性结直肠肿瘤模型中，PK2mRNA及蛋白水平随疾病的进展逐步增加；在LPS诱导的细胞炎症模型中，PK2mRNA及蛋白水平均增加[PK2 mRNA升高约3．42倍，P=0．013；PK2蛋白的表达升高约2．10倍，（78．2±5．2）pg/ml比（163．8±8．4）pg／ml；P=0．029]。结论PK2随着炎症的进展表达水平升高，PK2／前动力蛋白受体1（PKR1）信号通路可能在溃疡性结肠炎的发病中发挥重要功能。

关键词：前动力蛋白2 溃疡性结肠炎 NCM460细胞

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前动力蛋白2在羊口疮病毒致炎中的作用研究

前动力蛋白2在羊口疮病毒致炎中的作用研究

作者：葛士坤华南农业大学

学位级别：硕士

羊口疮是由羊口疮病毒（orf virus,ORFV）引起的人兽共患病,能引起山羊、绵羊、多种野生动物和人感染,表现为患病动物的口唇、鼻、舌和乳房等部位出现红肿、丘疹、水泡、脓疱、结痂。羊口疮在世界各地广泛分布,凡是养羊的地方都有该病... 详细信息

羊口疮是由羊口疮病毒（orf virus,ORFV）引起的人兽共患病,能引起山羊、绵羊、多种野生动物和人感染,表现为患病动物的口唇、鼻、舌和乳房等部位出现红肿、丘疹、水泡、脓疱、结痂。羊口疮在世界各地广泛分布,凡是养羊的地方都有该病的发生和流行,我国西北、东北和华南地区均有该病的发生和流行。由于该病对羊群高感染率和感染后易复发,且羊群一旦感染就很难清除,因此该病给我国养羊业造成了严重的危害。目前,关于羊口疮的综合防控几乎处于空白状态,原因是针对该病及其病原基础研究数据缺乏。对ORFV介导炎症发生机制及机体反应的深入了解,是防控该病的科学基础。前动力蛋白2（prokineticin2,PK2）是哺乳动物内源性的小分子分泌蛋白,它与受体G蛋白偶联受体家族作用参与血管生成、炎症反应、免疫调节等重要的生理功能,前动力蛋白2及其介导的下游效应与炎症的发生密切相关。目前,还没有关于PK2在羊口疮病毒感染致炎过程中作用研究,该蛋白在羊口疮病毒介导宿主炎症发生的基本数据是发展基于该蛋白防治方法的基础。本研究对海南黑山羊PK2基因进行了克隆,构建了其真核过表达质粒和RNAi干扰质粒,研究了该蛋白在ORFV致炎中的作用。具体研究内容如下:1.海南黑山羊PK2基因的克隆及序列分析以海南黑山羊组织总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增了海南黑山羊PK2基因,提交至GenBank（登录号为KY655329）。对PK2进行了相关的生物信息学分析,结果显示,山羊PK2基因长度327 bp,编码109个氨基酸,蛋白分子质量为11.74 Ku;核苷酸序列和氨基酸序列的同源性与鹿的最低分别为41.6%和24.8%,氨基酸同源性与牛的最高为96.3%;基于PK2系统进化树显示,海南黑山羊和牛的亲缘性最高;PK2蛋白存在Prokineticin结构域,是结构保守蛋白;该蛋白存在1个跨膜区,含有信号肽。***2真核过表达载体和RNAi干扰载体构建以pMD18-T-PK2质粒为模板,设计含Bgl II和EcoR I两个酶切位点的特异性引物,构建pEGFP-N1-PK2真核过表达质粒。将pEGFP-N1-PK2转染至OFTu细胞,经荧光显微镜观察和IFA检测,可检测到绿色荧光,表明过表达载体构建成功。设计PK2基因的寡核苷酸引物并构建pSUPER-PK2干扰载体,将pSUPER-PK2转染OFTu细胞,荧光显微镜观察和ELISA检测,结果显示转染pSUPER-PK2 24h内PK2 mRNA表达的抑制效率为51%。***2在ORFV感染OFTu细胞致炎中的研究ORFV感染OFTu细胞后,PK2基因表达上调,表明PK2是病毒感染的效应蛋白之一。用ORFV分别感染转入PK2真核过表达质粒和干扰表达质粒的OFTu细胞,结果显示,PK2过表达后,对白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）有明显的抑制作用;PK2被干扰后,IL-1β和白细胞介素18（interleukin-18,IL-18）的表达显著上调,模式识别受体蛋白（NLPR3）也表现出表达上调。说明PK2蛋白可能通过NLRP3信号通路在ORFV的致炎过程中发挥作用。

关键词：羊口疮病毒前动力蛋白2 RNA干扰炎症

垂体柄中断综合征与前动力蛋白受体2和前动力蛋白2基因突变的相关性分析

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中国医学科学院学报 2016年第1期38卷 37-41页

作者：韩白玉李乐乐王成芷郭清华吕朝晖母义明窦京涛中国人民解放军总医院内分泌科北京100853 中国人民解放军264医院内分泌科太原030001

目的分析垂体柄中断综合征(PSIS)与前动力蛋白受体2(PROKR2)和前动力蛋白2(PROK2)基因突变的相关性。方法采用聚合酶链反应和基因测序方法对59例PSIS患者基因组DNA的PROKR2和PROK2基因外显子分别进行测序与突变分析。结果 59例PSIS患者... 详细信息

目的分析垂体柄中断综合征(PSIS)与前动力蛋白受体2(PROKR2)和前动力蛋白2(PROK2)基因突变的相关性。方法采用聚合酶链反应和基因测序方法对59例PSIS患者基因组DNA的PROKR2和PROK2基因外显子分别进行测序与突变分析。结果 59例PSIS患者中,6例发现PROKR2基因突变,其中5例位于第2外显子c.991G>A,1例位于第2外显子c.1057C>T。未发现PROK2基因突变。结论 PROKR2基因可能是PSIS患者的易感基因。

关键词：垂体柄中断综合征前动力蛋白受体2 前动力蛋白2

山羊前动力蛋白2基因的克隆及其在OFTu细胞中的表达

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中国兽医科学 2019年第2期49卷 234-240页

作者：鲁荣葛士坤张凯照任旭皎李慧子张彭涛宁章勇华南农业大学兽医学院广东广州510642

为深入研究前动力蛋白2(prokineticin 2,PK2)在山羊炎症性疾病中的作用,本研究克隆了海南黑山羊的PK2基因,并对其基因序列及编码蛋白进行了分析;构建了过表达载体pEGFP-N1-PK2和干扰表达载体pSUPER-PK2,并转染至羊胚胎鼻甲细胞(ovine fe... 详细信息

为深入研究前动力蛋白2(prokineticin 2,PK2)在山羊炎症性疾病中的作用,本研究克隆了海南黑山羊的PK2基因,并对其基因序列及编码蛋白进行了分析;构建了过表达载体pEGFP-N1-PK2和干扰表达载体pSUPER-PK2,并转染至羊胚胎鼻甲细胞(ovine fetal turbinate,OFTu)中进行表达。结果显示,PK2基因种间同源性低,山羊PK2基因编码的蛋白由109个氨基酸组成,在蛋白序列的第9～25位间存在一个潜在的跨膜区,具有prokineticin结构域,是结构保守蛋白。ELISA检测表明,成功在OFTu细胞中进行了PK2蛋白的过表达和干扰表达。本研究结果为深入研究PK2基因的上下游信号通路及其在山羊疾病中的致炎机制提供了基础数据和工具。

关键词：山羊前动力蛋白2 序列分析真核表达

牦牛睾丸发育过程中前动力蛋白2(PK2)的动态变化

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中国兽医学报 2022年第12期42卷 2543-2548页

作者：李心蕊潘阳阳韩小红蔺蕙张燕燕王立斌余四九崔燕徐庚全甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070

采集幼年期(1~2岁)、性成熟初期(2~3岁)、性成熟后期(3~7岁)和老年期(7~9岁)雄性牦牛的睾丸组织,通过IHC技术检测前动力蛋白2(prokineticin 2,PK2)在睾丸组织中的表达部位,通过qRT-PCR和Western blot技术检测PK2 mRNA及蛋白在牦牛睾丸... 详细信息

采集幼年期(1~2岁)、性成熟初期(2~3岁)、性成熟后期(3~7岁)和老年期(7~9岁)雄性牦牛的睾丸组织,通过IHC技术检测前动力蛋白2(prokineticin 2,PK2)在睾丸组织中的表达部位,通过qRT-PCR和Western blot技术检测PK2 mRNA及蛋白在牦牛睾丸组织中的表达水平。结果显示,不同年龄的牦牛睾丸中PK2均有表达,幼年期主要表达在精子细胞及精子中;在性成熟初期、性成熟后期及老年期的牦牛睾丸中,在初级精母细胞及次级精母细胞中也有表达;PK2在幼年期及性成熟初期mRNA相对表达量最低且显著低于性成熟后期及老年期(P2组mRNA的相对表达量无显著性差异(P>0.05);PK2蛋白在牦牛各发育阶段的睾丸组织中均有表达,在幼年期蛋白表达量最低(P蛋白表达量无显著性差异(P>0.05)。结果表明,PK2在各发育阶段的牦牛睾丸组织中均有表达,且在幼年期牦牛睾丸中主要分布在精子细胞,在性成熟初期、性成熟后期及老年期牦牛睾丸的初级精母细胞、次级精母细胞及精子细胞也有分布,其表达量随牦牛年龄变化而呈现逐渐升高并维持在较高水平的趋势,提示PK2参与了牦牛睾丸发育与精子发生过程的调节。

关键词：牦牛睾丸前动力蛋白2

前动力蛋白2与中枢神经系统疾病发生发展的研究进展

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赣南医学院学报 2023年第12期43卷 1296-1302页

作者：王天赟禹云玲廖星澜刘瑞珍赣南医学院第一临床医学院赣南医学院基础医学院江西赣州341000

前动力蛋白2(Prokinetic 2,PROK2)是一种含多个半胱氨酸的多功能蛋白,参与调节机体生理功能。PROK2与其受体前动力蛋白受体1/2(Prokineticin receptor 1/2,PKR1/2)在中枢神经系统中广泛存在,病理损伤可增加受损处或血清中PROK2的表达水... 详细信息

前动力蛋白2(Prokinetic 2,PROK2)是一种含多个半胱氨酸的多功能蛋白,参与调节机体生理功能。PROK2与其受体前动力蛋白受体1/2(Prokineticin receptor 1/2,PKR1/2)在中枢神经系统中广泛存在,病理损伤可增加受损处或血清中PROK2的表达水平,表明PROK2可能参与多种中枢神经系统疾病的发病过程。目前研究表明高表达PROK2对中枢神经系统疾病同时具有保护和损伤双重作用,具体作用机制尚未完全研究清楚。本文结合近年来国内外研究文献,从PROK2对多种中枢神经系统疾病的影响进行综述。文献复习表明,PROK2参与了中枢神经系统疾病的发生发展,包括缺血性脑卒中、蛛网膜下腔出血、创伤性脑损伤、帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病、多发性硬化症、癫痫和嗅觉异常等,而PKR的拮抗剂已被证实可减缓中枢神经系统疾病的进展。这些结果表明PROK2可能是治疗中枢神经系统疾病的关键靶点,为治疗神经系统疾病的研究方向提供参考。

关键词：前动力蛋白2 中枢神经系统保护作用损伤作用

前动力蛋白2/前动力蛋白受体2基因杂合突变小鼠表型特征

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生殖医学杂志 2012年第5期21卷 465-471页

作者：肖玲周闻白周群勇胡仁明复旦大学附属金山医院内分泌科上海200540 复旦大学附属华山医院内分泌科上海200040 美国加州大学欧文分校医学院药理部美国加州92697

目的观察前动力蛋白(PK2)、前动力蛋白受体2(PKR2)基因单拷贝丢失后小鼠生长发育及生殖系统发育情况。方法对比观察PK2+/-、PKR2+/-、以及PK2+/-:PKR2+/-复合杂合突变小鼠与野生型小鼠体重增长、外生殖器发育情况;免疫荧光染色法观察四... 详细信息

目的观察前动力蛋白(PK2)、前动力蛋白受体2(PKR2)基因单拷贝丢失后小鼠生长发育及生殖系统发育情况。方法对比观察PK2+/-、PKR2+/-、以及PK2+/-:PKR2+/-复合杂合突变小鼠与野生型小鼠体重增长、外生殖器发育情况;免疫荧光染色法观察四组小鼠颅内促性腺激素释放激素(GnRH)神经元分布;阴道冲洗细胞涂片评估法观察小鼠动情周期。结果三组杂合突变小鼠体重增长、外生殖器发育及颅内GnRH神经元分布与野生型小鼠相比均无显著差异,但杂合突变小鼠动情周期延长、无规律,双基因杂合突变小鼠表现最明显。结论 PK2、PKR2基因单拷贝丢失后虽不影响小鼠生殖系统和GnRH神经元发育,但雌鼠表现出动情周期紊乱。因此PK2/PKR2通路对生殖系统功能有调节作用。

关键词：前动力蛋白2 前动力蛋白受体2 杂合突变外生殖器 GnRH神经元动情周期

前动力蛋白2介导躯体疼痛的外周与中枢神经敏化

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药学实践杂志 2021年第5期39卷 395-398页

作者：刘静徐熠徐玲玲吴铁军黄瑾上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院药剂科上海200437

前动力蛋白2(prokineticin 2,PK2)是新近发现的一种趋化因子,通过与受体PKR1和PKR2结合,参与机体多种生理功能。PK信号通路是近年来新发现的组织损伤和神经损伤后疼痛发生和维持的重要调节通路,其在调节伤害性事件方面起着关键作用,是... 详细信息

前动力蛋白2(prokineticin 2,PK2)是新近发现的一种趋化因子,通过与受体PKR1和PKR2结合,参与机体多种生理功能。PK信号通路是近年来新发现的组织损伤和神经损伤后疼痛发生和维持的重要调节通路,其在调节伤害性事件方面起着关键作用,是众多疾病的潜在治疗靶点。PKRs的激活可以引起痛觉感受,参与痛觉感受器对不同刺激的敏感性。PK系统(PKs和PKRs)是在免疫细胞中参与炎症发生和疼痛传递的重要环节。PK2通过激活初级传入神经元上的PKR1和PKR2参与调节痛觉感知,在大鼠初级感觉神经元中,PK2还通过PKC信号通路增强门控离子通道电流,抑制γ-氨基丁酸(GABA)激活电流,敏化嘌呤核苷酸P2受体(P2X)。本文围绕PK2在躯体疼痛中的研究进展进行述评,以期在未来的研究中,有望找到以PK信号通路为靶点的炎性疼痛治疗的新药。

关键词：前动力蛋白2 躯体痛前动力蛋白受体1 前动力蛋白受体2 外周敏化中枢敏化

子痫前期患者胎盘中EG-VEGF及其PROKR1和PROKR2的表达情况

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国际检验医学杂志 2024年第7期45卷 818-823页

作者：李琼王永红刘淼张桂玲陈瑶赵晨阳郴州市第一人民医院/湘南学院第一附属学院妇产科湖南郴州423000

目的探讨子痫前期(PE)患者血清、胎盘中内分泌腺源性血管内皮生长因子(EG-VEGF)、前动力蛋白1(PROK1)、前动力蛋白2(PROK2)的表达情况及其临床意义。方法选取2019年1月至2022年1月该院收治的100例PE患者作为研究组,依据病情严重程度分... 详细信息

目的探讨子痫前期(PE)患者血清、胎盘中内分泌腺源性血管内皮生长因子(EG-VEGF)、前动力蛋白1(PROK1)、前动力蛋白2(PROK2)的表达情况及其临床意义。方法选取2019年1月至2022年1月该院收治的100例PE患者作为研究组,依据病情严重程度分为轻度组和重度组,各50例。同时,选取同期行剖宫产手术的50例健康孕妇作为对照组。比较两组临床指标[γ-谷氨酰转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿酸(UA)、收缩压、舒张压、血小板计数、新生儿体重、螺旋动脉管壁厚度、螺旋动脉管腔面积、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)]。对比分析不同组、不同病情严重程度患者血清、胎盘组织中EG-VEGF、PROKR1、PROKR2 mRNA水平。采用免疫组化法检测两组胎盘组织中EG-VEGF、PROKR1、PROKR2阳性表达率,分析研究组血清各指标与临床特征、病情严重程度相关性,以及检测不同新生儿结局的孕妇血清中各指标水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清各指标水平对PE的诊断价值。结果与对照组比较,研究组收缩压、舒张压、血小板计数、螺旋动脉管壁厚度升高,GGT、LDH、UA、ALT、AST、MDA水平升高,新生儿体重、螺旋动脉管腔面积降低,BUN、SOD水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,研究组血清、胎盘组织中EG-VEGF、PROKR1、PROKR2 mRNA水平降低(P<0.05),且其水平与新生儿体重、螺旋动脉管腔面积、BUN、SOD呈正相关,而与收缩压、舒张压、螺旋动脉管壁厚度、GGT、LDH、ALT、MDA、病情严重程度呈负相关(P<0.05)。研究组EG-VEGF、PROKR1、PROKR2阳性表达率低于对照组(P<0.05);研究组发生新生儿不良结局的孕妇血清中EG-VEGF、PROKR1、PROKR2水平低于对照组(P<0.05)。EG-VEGF、PROKR1、PROKR2联合诊断PE的曲线下面积大于单项诊断(P<0.05)。结论PE患者血清、胎盘中EG-VEGF、PROKR1、PROKR2呈低表达,且与临床特征、病情严重程度、新生儿不良结局存在相关性,联合检测其水平可提高PE的诊断效能。

关键词：子痫前期内分泌腺源性血管内皮生长因子前动力蛋白1 前动力蛋白2 不良结局