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制枳壳HPLC指纹图谱与小肠推动作用的谱效关系

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中成药 2021年第3期43卷 750-754页

作者：王红阳钟佩芸梁家怡周敏贤陈康夏荃广州中医药大学广东广州510006 暨南大学广东广州510632

目的研究制枳壳HPLC指纹图谱与小肠推动作用的谱效关系。方法HPLC法建立生、制枳壳指纹图谱,以小鼠小肠推进率为药效指标,通过灰色关联分析、正交偏最小二乘法(OPLS)进行研究,并采用HPLC⁃Q⁃TOF⁃MS法鉴定药效活性成分。结果与空白组比较... 详细信息

目的研究制枳壳HPLC指纹图谱与小肠推动作用的谱效关系。方法HPLC法建立生、制枳壳指纹图谱,以小鼠小肠推进率为药效指标,通过灰色关联分析、正交偏最小二乘法(OPLS)进行研究,并采用HPLC⁃Q⁃TOF⁃MS法鉴定药效活性成分。结果与空白组比较,生、制枳壳对小鼠小肠推动均有促进作用(P枳壳中有7种成分与药效密切相关(关联度>0.75),变量投影重要性(VIP)均>1.0的成分有6种,其中X_(5)(新圣草苷)、X_(8)(橙皮苷)、X_(9)(新橙皮苷)与药效呈正相关;制枳壳中与药效高相关的成分有13种,其中X_(3)(柚皮黄素)、X_(15)(伞形花内酯)、X_(16)(异牡荆素)、X_(17)(新圣草苷)、峰19、峰26与小肠推动呈高度正相关性。结论生、制枳壳均可显著促进小鼠小肠推动,但前者主要活性成分为黄酮苷类,而后者集中在黄酮苷元、香豆素类。

关键词：制枳壳 HPLC指纹图谱小肠推动作用谱效关系灰色关联分析正交偏最小二乘法(OPLS)

基于AHP-熵权法结合正交试验设计优选岭南特色饮片制枳壳的发酵工艺及发酵前后成分对比研究

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中草药 2022年第20期53卷 6443-6450页

作者：杨婷黄莹莹方杨冰龙江玲李沁如徐启键黄爱华张英夏荃广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的建立枳壳发酵品中多个成分的含量测定方法,优化岭南特色饮片制枳壳的发酵工艺,并比较枳壳发酵前后的成分变化。方法通过UHPLC测定枳壳发酵品中特征成分含量,在单因素实验的基础上,采用正交试验法考察发酵温度、发酵时间、发酵湿... 详细信息

目的建立枳壳发酵品中多个成分的含量测定方法,优化岭南特色饮片制枳壳的发酵工艺,并比较枳壳发酵前后的成分变化。方法通过UHPLC测定枳壳发酵品中特征成分含量,在单因素实验的基础上,采用正交试验法考察发酵温度、发酵时间、发酵湿度等影响因素,以枳壳发酵品中的10种特征黄酮类成分(包括黄酮苷及苷元)的含量和发酵品的外观性状作为指标,采用层次分析法(analytic hierarchy process,AHP)结合熵权法对这些指标设置不同的权重,并计算复合评分来优选其发酵工艺。结果枳壳的最佳发酵工艺为浸泡时间4 h,发酵时间48 h,发酵温度37℃,发酵湿度90%;枳壳发酵后,黄酮苷类成分的含量下降,黄酮单糖苷和苷元类成分的含量均大幅度增加。结论建立的UHPLC多成分含量测定方法操作简单、准确,优选的枳壳发酵工艺简便、稳定可行,可规范枳壳的发酵工艺,为制枳壳的工业化生产奠定基础。

关键词：枳壳制枳壳中药发酵工艺优化圣草次苷新北美圣草苷芸香柚皮苷柚皮苷橙皮苷新橙皮苷橙皮素-7-O-葡萄糖苷枸橘苷柚皮素橙皮素

岭南特色炮制饮片“制枳壳”行滞消胀作用及炮制机理研究

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岭南特色炮制饮片“制枳壳”行滞消胀作用及炮制机理研究

作者：王红阳广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:“制枳壳”为岭南特色炮制饮片,在广东、香港等地区被普遍应用,经发酵后蒸制而得,具有缓和烈性、行滞消胀的优势。然而目前针对制枳壳的研究仅有少数报道,其炮制机理不明。本课题旨在从胃肠动力及胃肠神经递质的角度评价制枳壳的... 详细信息

目的:“制枳壳”为岭南特色炮制饮片,在广东、香港等地区被普遍应用,经发酵后蒸制而得,具有缓和烈性、行滞消胀的优势。然而目前针对制枳壳的研究仅有少数报道,其炮制机理不明。本课题旨在从胃肠动力及胃肠神经递质的角度评价制枳壳的行滞消胀作用;并以胃肠动力、胃肠神经递质的含量变化为评价指标筛选出制枳壳行滞消胀的活性部位;从Interstitial cells of Cajal（ICCs）和SCF/c-kit信号通路角度入手,探寻制枳壳行滞消胀作用可能的分子机制,从而为制枳壳炮制机理的研究提供科学依据。方法:1.从胃肠动力及胃肠神经递质角度探讨制枳壳行滞消胀作用:采用夹尾刺激复合不规则饮食方法建立功能性消化不良（FD）大鼠病理模型。造模期间密切观察并记录大鼠的体重变化、反应灵敏程度、大便情况、毛色光泽程度等日常表现。制备生、制枳壳水煎液,以枸橼酸莫沙必利为阳性药组（AC）,造模成功后连续干预治疗14天。半固体糊法计算实验大鼠小肠推进率和胃内残留率;HE染色法观察胃窦组织的病理形态学改变;Elisa试剂盒检测大鼠血浆中胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、神经降压素（NT）及生长抑素（SS）的含量。2.制枳壳行滞消胀活性部位（组分）筛选:水蒸气蒸馏法提取收集挥发油。过滤收集挥发油后的水提液,滤渣再加水提取一次,滤液合并。依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等体积萃取,收集不同部位后制备为干浸膏;以80%乙醇为提取溶媒提取总黄酮,大孔树脂法纯化后富集,浓缩干燥。以FD模型大鼠为实验研究对象,从对胃肠动力及MTL、GAS、NT、SS分泌的影响等方面,对制枳壳的各部位（组分）进行活性筛选。3.基于ICCs和SCF/ckit信号通路初步探讨制枳壳分子作用机制:在药效研究基础上,透射电镜下观察ICCs细胞超微形态结构;Q-PCR法和Western blot法分别考察制枳壳对SCF、c-kitmRNA及蛋白水平的表达,进而从SCF/c-kit信号通路的角度初步阐释制枳壳行滞消胀作用的分子机制。4.制枳壳的HUPLC-Q-TOF-MS谱效关系研究:HPLC法建立10批生、制枳壳特征指纹图谱,以小鼠小肠推动作用为药效学评价指标,采用灰色关联及正交偏最小二乘法（OPLS-DA）进行谱-效关联分析;利用HUPLC-Q-TOF-MS初步指认生、制枳壳与胃肠动力相关的活性成分。结果:1.制枳壳对FD大鼠胃窦组织病理及胃肠动力的影响:体内动物实验结果显示,模型组大鼠胃壁四层结构（黏膜层、黏膜下层、肌层、浆膜层）清楚,仅黏膜层、黏膜下层有轻微水肿与充血,无器质性损伤,符合功能性消化不良的病理学表现,说明FD模型成功。给药干预后,与模型组比较,各给药组胃窦组织病理现象改善;各剂量生、制枳壳水煎液对FD大鼠胃排空率均有所降低,小肠推进率有所升高,与模型组比较P＜0.05,差异有统计学意义,其中制枳壳高剂量组的改善作用最为明显。2.制枳壳对大鼠血浆中SS、NT、MTL、GAS等含量的影响:药物干预治疗后,各组大鼠血浆中抑制类神经递质含量均有所降低。与模型组比较,各给药组的SS含量均降低,阳性对照组（AC）、生品高剂量组（RFA-H）、制品高（PFA-H）、低剂量组（PFA-L）的差异有统计学意义（P＜0.05）;NT含量均降低,差异有统计学意义（P＜0.01）;分别对生、制枳壳不同剂量组进行两两比较,结果发现,制品低剂量组（PFA-L）与生品低（RFA-L）、高剂量（PFA-H）均有差异,且差异具有统计学意义（P＜0.01）,制枳壳的作用更显著。药物干预治疗后,各组大鼠血浆中激动性神经递质MTL含量均有所增高,与模型组比较,制枳壳高、低剂量组的差异有统计学意义（P＜0.05）,生枳壳组差异无统计学意义（P＞0.05）,提示制枳壳对于MTL的调控作用更强。各组大鼠血浆中GAS明显受到抑制,与模型组比较有统计学意义（P＜0.05）;生、制枳壳组对比无显著性差异,提示生、制枳壳对GAS的调控作用基本一致。3.制枳壳行滞消胀作用的活性部位（组分）筛选:不同部位给药干预后,挥发油组（VO）的大鼠胃内残留率明显减低,与模型组（MOD）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,其他实验组大鼠的胃内残留率组呈现出轻微下降趋势,但无统计学意义,提示制枳壳的挥发油部位对胃排空功能的促进作用优于其他部位;总黄酮部位（FLAs）以及萃余部位（RAF）干预下的大鼠小肠推进率均呈现上升趋势,差异具有统计学意义（P＜0.05）,提示总黄酮部位、萃余部位均可能为小肠推动的主要活性部位。4.作用机制初步探讨:Western blot结果表明,与模型组比较,制枳壳高、低剂量组和总黄酮部位均上调了 SCF和c-kit在蛋白水平的表达;Q-PCR结果显示,与模型组相比,制枳壳低剂量组和总黄酮部位促进了 c-kit mRNA

关键词：制枳壳炮制功能性消化不良行滞消胀 SCF/c-kit信号通路

岭南饮片制枳壳不同化学部位对功能性消化不良大鼠的影响

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今日药学 2021年第11期31卷 839-843页

作者：龙江玲黄莹莹杨婷王红阳赵婷秀夏荃广州中医药大学中药学院广东广州510006 河南省中医药研究院河南郑州450004 广州中医药大学基础医学院广东广州510006

目的探究岭南特色饮片制枳壳不同化学部位对功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)大鼠胃肠动力和脑肠肽含量的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组、石油醚-乙酸乙酯组、正丁醇组、萃余组、挥发油组和... 详细信息

目的探究岭南特色饮片制枳壳不同化学部位对功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)大鼠胃肠动力和脑肠肽含量的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组、石油醚-乙酸乙酯组、正丁醇组、萃余组、挥发油组和总黄酮组,除正常组外,其他实验组大鼠采用"夹尾+不规则饮食"法制备FD模型。持续给药2周后,测定大鼠胃残留率和小肠推进率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中生长抑素(SS)、神经降压素(NT)、胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)水平。结果与模型组相比,挥发油部位可降低大鼠胃残留率(P制枳壳可改善功能性消化不良相关症状,不同化学部位的作用机制不同,这与胃肠道动力改变及脑肠肽SS、NT、GAS和MTL的分泌异常有关。

关键词：制枳壳功能性消化不良胃肠动力脑肠肽化学部位

从“脾之液为涎”探讨岭南特色炮制枳壳的减燥作用及机制研究

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中国中医基础医学杂志 2022年第12期28卷 1964-1968页

作者：龙江玲黄莹莹杨婷李沁如徐启键赵婷秀夏荃广州中医药大学中药学院广州510006 广州中医药大学基础医学院广州510006

目的基于“脾之液为涎”理论比较生枳壳和岭南特色炮制品制枳壳对健康大鼠唾液腺功能的影响,进一步探讨枳壳炮制缓和燥性的作用机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为空白组、生枳壳低剂量组和高剂量组、制枳壳低剂量组和高剂量组,每日... 详细信息

目的基于“脾之液为涎”理论比较生枳壳和岭南特色炮制品制枳壳对健康大鼠唾液腺功能的影响,进一步探讨枳壳炮制缓和燥性的作用机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为空白组、生枳壳低剂量组和高剂量组、制枳壳低剂量组和高剂量组,每日灌胃1次,持续给药4周,测定给药后各组大鼠饮水量、唾液流率、颌下腺指数,采用Elisa法检测大鼠颌下腺组织中血管活性肠肽(vasoactive peptide, VIP)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、P物质(substance P,SP)和水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)的含量,免疫组化法观察大鼠颌下腺AQP5的表达,HE染色观察颌下腺组织病理形态学变化。结果与空白组比较,生枳壳组大鼠饮水量明显升高(P枳壳高剂量组比较,制枳壳组大鼠饮水量降低(P枳壳组大鼠颌下腺腺泡数量减少、大小不一、血管轻微扩张,而制枳壳组大鼠颌下腺组织形态有所改善。结论生枳壳的燥性可表现为大鼠唾液腺生理功能的紊乱且作用效果呈剂量依赖性,制枳壳可缓和生枳壳的燥性,其作用机制可能与调控颌下腺神经肽VIP、5-HT的含量和AQP5的表达有关。

关键词：枳壳制枳壳唾液腺神经肽水通道蛋白5

枳壳炮制前后指纹图谱及主要黄酮类成分含量的变化

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中国实验方剂学杂志 2020年第2期26卷 113-118页

作者：刘雅莉邓桂珠贤明华葛跃伟王淑美广东药科大学国家中医药管理局中药数字化质量评价技术重点实验室广东省高校中药质量工程技术研究中心

目的:建立枳壳及其不同炮制品的HPLC指纹图谱,并对其所含的4种黄酮类成分进行定量分析。方法:采用HPLC,Inertsil ODS-3 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长283 nm,流速1.0 m L·min^-1,建立生... 详细信息

目的:建立枳壳及其不同炮制品的HPLC指纹图谱,并对其所含的4种黄酮类成分进行定量分析。方法:采用HPLC,Inertsil ODS-3 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长283 nm,流速1.0 m L·min^-1,建立生枳壳、麸炒枳壳和制枳壳的HPLC指纹图谱,通过相似度评价、聚类分析对枳壳炮制前后指纹图谱进行分析,并对芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷进行含量测定。结果:建立了枳壳及其炮制品的指纹图谱,以柚皮苷为参照峰,生枳壳标定了8个共有峰,麸炒枳壳标定了15个共有峰,制枳壳标定了11个共有峰,与各自对照指纹图谱的相似度均>0.95。芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷在炮制前的质量分数分别为0.574 7%,5.986 3%,0.302 2%,3.574 7%;经炮制后,上述4种成分在麸炒枳壳中的质量分数分别为0.948 4%,5.103 4%,0.549 3%,3.533 7%,在制枳壳中的质量分数分别为0.605 3%,4.762 3%,0.404 7%,3.264 9%。结论:枳壳的HPLC指纹图谱在炮制前后发生了显著变化。4种黄酮类成分含量在炮制前后均发生了一定程度的变化,样品中芸香柚皮苷、橙皮苷含量排序为麸炒枳壳>制枳壳>生枳壳,样品中柚皮苷、新橙皮苷含量排序则为生枳壳>麸炒枳壳>制枳壳。

关键词：枳壳麸炒枳壳制枳壳指纹图谱聚类分析黄酮类成分含量测定

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枳壳及其炮制品色差值与化学成分的相关性

中成药 2017年第6期39卷 1228-1231页

作者：邓桂珠蓝文煜窦佩丹赵燕燕王尚金梁生旺王淑美广东药科大学国家中医药管理局中药数字化质量评价技术重点研究室广东高校中药质量工程技术研究中心广东广州510006

目的考察枳壳Aurantii Fructus、麸炒枳壳、制枳壳(枳壳发酵后蒸制)色差值与化学成分的相关性。方法色差计测定样品的颜色亮度(L*)、红绿色品坐标(a*)、黄蓝色品坐标(b*),HPLC法测定柚皮苷、新橙皮苷含有量,通过SPSS20.0软件进行相关性... 详细信息

目的考察枳壳Aurantii Fructus、麸炒枳壳、制枳壳(枳壳发酵后蒸制)色差值与化学成分的相关性。方法色差计测定样品的颜色亮度(L*)、红绿色品坐标(a*)、黄蓝色品坐标(b*),HPLC法测定柚皮苷、新橙皮苷含有量,通过SPSS20.0软件进行相关性分析。结果各色差值与枳壳炮制程度均呈显著相关性,以L*最明显。枳壳L*与柚皮苷含有量呈显著正相关关系,a*与其呈显著负相关关系,而各色差值与新橙皮苷含有量均无显著相关性。2种炮制品与柚皮苷含有量呈显著负相关关系,以制枳壳更明显,而与新橙皮苷含有量均无显著相关性。结论枳壳炮制前后颜色明显变化可能与柚皮苷含有量有关。

关键词：枳壳麸炒枳壳制枳壳色差值柚皮苷新橙皮苷相关性分析