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茶多酚中EGCG单体的制备纯化及其抑制铜绿假单胞菌生物膜的研究

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茶多酚中EGCG单体的制备纯化及其抑制铜绿假单胞菌生物膜的研究

作者：王伟涛江南大学

学位级别：硕士

表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是茶多酚中主要的功能活性成分，具有消炎、抑菌、防突变、抗癌、抗病毒、抗氧化、神经保护等特性。本文以EGCG含量50%的茶多酚为原料，研究了吸附柱色谱法制备纯化EGCG... 详细信息

表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是茶多酚中主要的功能活性成分，具有消炎、抑菌、防突变、抗癌、抗病毒、抗氧化、神经保护等特性。本文以EGCG含量50%的茶多酚为原料，研究了吸附柱色谱法制备纯化EGCG单体的方法，以及制备出的EGCG单体对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa, P. a）生物膜的抑制效果，为其在医药领域的应用提供一些参考。首先，考察选用的吸附填料对儿茶素的选择吸附性，筛选出适合选择性分离儿茶素的极性吸附填料LX-8和中极性吸附填料LSA-10。研究了儿茶素在LSA-10树脂上的吸附行为，为开展动态柱色谱研究提供参考，结果表明：吸附过程在120min后到达平衡，属中速吸附，拟二级动力学模型拟合效果优于拟一级模型，总儿茶素速率常数为0.0019g/mg/min，稍低的温度利于儿茶素在LSA-10树脂上的吸附，较高的儿茶素浓度利于实现酯化和非酯化形式儿茶素的选择性吸附，其吸附行为更符合Freundlich模型，得到EGCG的kF大于43.0473mg(n-1)/n/g/mL-1/n，较其他儿茶素高，说明LSA-10树脂对各儿茶素的吸附有选择性。其次，优化吸附柱色谱法制备纯化EGCG单体的工艺，确定如下工艺条件：先经极性树脂LX-8树脂柱色谱实现非酯化和酯化儿茶素分离，柱体积600mL，300mg/mL茶多酚上样，流速1.5BV/h，上样量60mL，1.5BV/h流速下采用蒸馏水、10%乙醇、25%乙醇和80%乙醇洗脱，体积为4BV、6BV、6BV、4BV，25%乙醇组分干燥后产品中EGCG纯度达(73.13±0.64)%，收率为(61.21±0.48)%。再经中极性树脂LSA-10柱色谱法实现EGCG与ECG分离，柱体积210mL，LX-8柱25%乙醇组分上样，流速1.5BV/h，浓度20mg/mL，上样量1.5BV，1.5BV/h流速下采用5%乙醇、15%乙醇、80%乙醇洗脱，体积为3BV、5BV、3BV，15%乙醇组分干燥产品中EGCG纯度达(93.16±1.04)%，收率为(89.82±0.82)%，结晶后可制备出纯度95.37%的EGCG单体，总收率为49.58%。经放大试验后，得到EGCG单体纯度也可达95%，说明此生产工艺具有放大应用前景，工业化生产可操作性。最后，研究了EGCG对P. a生物膜的抑制效果，结果表明：EGCG对P. a的最小抑菌浓度MIC值为0.125mg/mL，最小抑制生物膜浓度MBIC值为0.0625mg/mL，经MBIC浓度EGCG处理后，P. a毒力因子弹性蛋白酶活性、鼠李糖酯以及绿脓菌素产生被抑制率分别达(37.73±1.25)%、(41.70±1.92)%、(35.98±1.34)%，菌体数量感应信号分子C4-HSL和3-oxo-C12-HSL被抑制率分别达(31.98±1.26)%和(15.91±0.82)%，EGCG可通过抑制菌体数量感应信号分子的产生进而抑制其毒力因子的释放以及生物膜的形成。

关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯吸附柱色谱制备纯化铜绿假单胞菌生物膜

金针菇黄酮的制备、纯化及对PC12神经细胞的保护作用

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中国食品学报 2017年第3期17卷 46-56页

作者：杨文建俞杰裴斐张梦甜许姿李志啸胡秋辉南京财经大学食品科学与工程学院江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心南京210023

优化了金针菇黄酮超声辅助提取的工艺条件,比较了D101,D103,NKA-9,AB-8和HPD100 5种大孔树脂对金针菇黄酮静态吸附率和解吸率的影响,筛选出适合分离金针菇黄酮的大孔树脂,并优化分离纯化参数。评价金针菇黄酮的体外抗氧化能力,同时考察... 详细信息

优化了金针菇黄酮超声辅助提取的工艺条件,比较了D101,D103,NKA-9,AB-8和HPD100 5种大孔树脂对金针菇黄酮静态吸附率和解吸率的影响,筛选出适合分离金针菇黄酮的大孔树脂,并优化分离纯化参数。评价金针菇黄酮的体外抗氧化能力,同时考察金针菇黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用。结果表明:金针菇黄酮的最佳提取工艺条件是:乙醇含量70%(v/v),提取温度60℃,超声功率200 W,料液比1∶40(g/m L);AB-8大孔树脂为分离纯化金针菇黄酮的最佳树脂,其分离纯化金针菇黄酮的动态吸附和解吸最佳工艺参数为上样质量浓度1.6 mg/m L、上样流速2.0 BV/h、洗脱剂为90%乙醇,洗脱流速2.0 BV/h。纯化的金针菇黄酮对DPPH、ABTS和羟基自由基的半数有效质量浓度值分别为(38.7±0.08)μg/m L、(33.4±0.12)μg/m L和(30.2±0.05)μg/m L,具有一定的铁离子还原能力。金针菇黄酮预处理能明显改善H_2O_2诱导PC12细胞损伤的细胞形态,并浓度依赖性抑制H_2O_2诱导的PC12细胞损伤。与模型组(37.73%)相比,金针菇黄酮预处理组(10~50μg/m L)明显提高了H_2O_2诱导的PC12细胞存活率(45.7%~82.6%)。金针菇黄酮预处理能显著降低细胞LDH的泄漏率,与模型组(388.0%)相比,30,40μg/m L和50μg/m L金针菇黄酮预处理组细胞LDH泄露率分别为249.2%,179.3%和134.3%,表明金针菇黄酮对H_2O_2诱导损伤的PC12细胞有显著的神经保护作用。

关键词：金针菇黄酮制备纯化抗氧化能力神经保护作用

新型EGFR靶点化合物氟代厄洛替尼的合成及制备纯化研究

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云南化工 2021年第6期48卷 26-28页

作者：李伟林山西省化工研究所(有限公司) 山西晋中030600

探索电化学方法合成氟代厄洛替尼的最优条件,在最优条件下大批量合成氟代厄洛替尼,再经过制备色谱纯化分离氟代厄洛替尼,最后经LC-MS和核磁共振对其纯度及结构进行确认。实验最后得到氟代厄洛替尼12.8 mg。

关键词：氟代厄洛替尼合成制备纯化

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胶体制备与纯化

信息记录材料 2019年第1期20卷 28-29页

作者：魏天酬重庆交通大学材料科学与工程学院重庆400074

胶体是指分散相颗粒线度在1～100nm范围,且具有许多特殊物理和化学性质的分散体系。这种体系的形成有一定的规律,只有用特定的方法创造出适合胶体形成的条件,才能制备出胶体。就此对近年来国内外胶体制备与纯化技术领域现有胶体制备方... 详细信息

胶体是指分散相颗粒线度在1～100nm范围,且具有许多特殊物理和化学性质的分散体系。这种体系的形成有一定的规律,只有用特定的方法创造出适合胶体形成的条件,才能制备出胶体。就此对近年来国内外胶体制备与纯化技术领域现有胶体制备方法作了详细的介绍,并论述了其应用前景。

关键词：胶体均分散胶体制备纯化

壮药拟草果中3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮候选化学对照品的制备及其质量控制研究

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药物分析杂志 2024年第2期44卷 333-339页

作者：赖克道柴玲陈明生冯军袁健童刘布鸣广西壮族自治区中医药研究院、广西中药质量标准研究重点实验室南宁530022

目的:从壮药拟草果中制备纯化3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮候选化学对照品并建立其质量分析方法。方法:采用硅胶柱色谱、重结晶和高效制备液相色谱等,从拟草果中制备纯化得到高纯度的3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮,通过红外、紫外、... 详细信息

目的:从壮药拟草果中制备纯化3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮候选化学对照品并建立其质量分析方法。方法:采用硅胶柱色谱、重结晶和高效制备液相色谱等,从拟草果中制备纯化得到高纯度的3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮,通过红外、紫外、核磁共振等综合波谱解析方法及质谱确定其化学结构,采用薄层色谱法、高效液相色谱法检测色谱纯度,炽灼残渣法测定灰分,质量平衡法计算3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮的含量。采用高效液相色谱法对建立的3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮候选化学对照品质量分析方法进行方法学考察。结果:3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮候选化学对照品用高效液相色谱法面积归一化法测定的含量均值为99.85%,炽灼残渣法测得灰分值为0.02%,以质量平衡法计算的含量为99.83%。建立的含量测定方法专属性强,精密度良好。结论:制备得到的3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮候选化学对照品符合化学对照品的质量标准要求,可作为拟草果及其他含有此成分的药材与制剂质量控制的对照品。建立的质量分析方法准确、可靠,可为该对照品质量标准研究与制定提供科学依据。

关键词：壮药拟草果 3,5-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮候选化学对照品制备纯化结构鉴定纯度检查含量测定

畜禽内脏源生物活性肽的制备、活性分析及构效关系的研究进展

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现代食品科技 2024年第7期40卷 343-352页

作者：张昱婷牛占占黄玉清宁亚维苑博华王志新河北科技大学食品与生物学院河北工程大学生命科学与食品工程学院

禽畜内脏富含蛋白质、脂肪、维生素和矿物质，具有优良的抗氧化、抗炎以及抗衰老等作用，受到国内外研究人员的关注，但我国畜禽内脏资源利用率很低，造成了资源的极大浪费。利用禽畜副产物生产高附加值产品，可减少废弃物处理不当造成... 详细信息

禽畜内脏富含蛋白质、脂肪、维生素和矿物质，具有优良的抗氧化、抗炎以及抗衰老等作用，受到国内外研究人员的关注，但我国畜禽内脏资源利用率很低，造成了资源的极大浪费。利用禽畜副产物生产高附加值产品，可减少废弃物处理不当造成的环境污染，提高副产物综合利用价值，有助于畜禽资源的可持续利用。生物活性肽主要来源于植物、动物和微生物，具有降血压、抗氧化、抗菌、抗炎等多种功效，在食品、医药以及保健品等领域有着广阔的应用前景。目前国内外有关生物活性肽的报道主要源于乳制品、植物蛋白等，以畜禽类内脏为原料的研究报道较少，部分研究者对构效关系进行了较为深入的研究。该文归纳总结了畜禽类内脏制备生物活性肽的方法，讨论了禽畜内脏来源的降血压肽、抗氧化肽、抗炎肽、抗菌肽的活性及其构效关系，为未来更深层次的研究提供新的思路与方法，并对现存的技术问题以及今后的研究方向做出了展望。

关键词：畜禽内脏生物活性肽制备纯化结构鉴定活性分析构效关系

花生粕多糖的制备、结构表征及功能评价研究进展

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中国粮油学报 2013年第12期28卷 119-123页

作者：姜楠刘红芝刘丽王强农业部农产品加工与质量控制重点开放实验室中国农业科学院农产品加工研究所北京100193

花生粕多糖作为花生的主要活性成分之一,近年来对其研究备受瞩目。对花生粕多糖的研究文献进行了统计分析,并在文献统计分析的基础上综述了花生粕多糖的提取制备方法,包括热水法提取、酸法提取、碱法提取、酶法提取、超声波辅助法提取等... 详细信息

花生粕多糖作为花生的主要活性成分之一,近年来对其研究备受瞩目。对花生粕多糖的研究文献进行了统计分析,并在文献统计分析的基础上综述了花生粕多糖的提取制备方法,包括热水法提取、酸法提取、碱法提取、酶法提取、超声波辅助法提取等,花生粕多糖不同组分的柱层析纯化方法,以及花生粕多糖一级结构表征与抗氧化活性及护肝活性评价研究进展。对目前花生粕多糖研究中存在的问题和今后对其研究的重点方向进行了总结和展望。

关键词：花生粕多糖制备纯化结构表征生物活性

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核桃饼粕蛋白质及其开发利用

食品与发酵工业 2016年第6期42卷 265-270页

作者：金子纯张润光韩军岐马乐杨曦王旭琳张有林陕西师范大学食品工程与营养科学学院陕西西安710119

核桃饼粕中蛋白质含量很高,其中谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸等对人体有重要保健功能的氨基酸含量丰富。但核桃饼粕常被废弃或作为饲料低价出售,造成资源极大浪费。因此高效提取核桃饼粕蛋白质并广泛应用于工业生产中对核桃资源综合利用具... 详细信息

核桃饼粕中蛋白质含量很高,其中谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸等对人体有重要保健功能的氨基酸含量丰富。但核桃饼粕常被废弃或作为饲料低价出售,造成资源极大浪费。因此高效提取核桃饼粕蛋白质并广泛应用于工业生产中对核桃资源综合利用具有重要意义。文中重点综述了核桃饼粕蛋白质及其制备纯化方法、功能特性,并讨论了核桃饼粕蛋白质的开发利用。

关键词：核桃饼粕蛋白质制备纯化功能特性开发利用

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对照提取物在中药整体质量控制中的应用

药物分析杂志 2016年第2期36卷 185-195页

作者：陈沛金红宇孙磊逄瑜马双成中国食品药品检定研究院北京100050

基于中医理论指导下的全面药效物质基础研究是中药质量标准体系构建的基石,对照提取物法为其提供了一种新的分析思路。本文综述了定性和定量对照提取物在中国药典2010年版、美国药典36版、欧洲药典8.0和日本药局方16版中的应用,提出了... 详细信息

基于中医理论指导下的全面药效物质基础研究是中药质量标准体系构建的基石,对照提取物法为其提供了一种新的分析思路。本文综述了定性和定量对照提取物在中国药典2010年版、美国药典36版、欧洲药典8.0和日本药局方16版中的应用,提出了对照提取物的制备流程,分析了该方法在研究中存在的问题,并以大黄定性对照提取物和重楼总皂苷定量对照提取物为例,阐述了对照提取物在中药整体质量控制中的应用,为对照提取物法的后续研究及实现中药整体质量控制提供了有益的参考。

关键词：中药整体质量控制替代对照品法标准物质定性对照提取物定量对照提取物药典应用制备纯化