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作者：崔胜楠陕西中医药大学

学位级别：硕士

目的:别欧前胡素是一种从中草药白芷中提取出来的香豆素,研究发现中药白芷及其单体在多种癌症模型中均表现出抗肿瘤活性,如肺癌,胃癌,乳腺癌等,然而,据我们所知,别欧前胡素对HL-60细胞的作用及其机制尚未明确。本研究旨在探讨别欧前胡素... 详细信息

目的:别欧前胡素是一种从中草药白芷中提取出来的香豆素,研究发现中药白芷及其单体在多种癌症模型中均表现出抗肿瘤活性,如肺癌,胃癌,乳腺癌等,然而,据我们所知,别欧前胡素对HL-60细胞的作用及其机制尚未明确。本研究旨在探讨别欧前胡素对HL-60细胞的体外抗肿瘤作用及机制。方法:1.采用CCK-8和台盼蓝拒染法,明确别欧前胡素对HL-60细胞增殖能力的影响。2.采用流式细胞仪检测别欧前胡素对HL-60细胞凋亡及周期的影响。3.采用western blot及RT-PCR法检测在别欧前胡素诱导HL-60细胞凋亡过程中Bcl-2,Bax,cleaved-caspase8,-9,-3蛋白及Bcl-2,Bax mRNA的表达情况。4.采用Oncomine分析差异基因IARS2在AML患者骨髓及非AML患者骨髓中的表达情况。5.用Ualcan数据库分析,在AML患者骨髓中IARS2表达量的高低与患者生存率之间的相关性。6.采用Western blot及RT-PCR法验证差异基因IARS2在别欧前胡素组及DMSO组中的表达情况。7.采用微阵列分析,别欧前胡素组与DMSO组差异基因;8.用Western blot分析不同浓度及不同作用时间的别欧前胡素处理HL-60细胞后MAPK相关蛋白:P-JNK、JNK、P-P38、P38、P-ERK、ERK表达情况;并分别使用SP600125、SCH772984、SB203580抑制HL-60细胞中P-JNK、P-P38、P-ERK的表达,观察别欧前胡素作用后每组Cleaved-caspase3的表达情况,明确P-JNK、P-P38、P-ERK在别欧前胡素诱导HL-60细胞凋亡中的作用;9.别欧前胡素处理HL-60细胞后,HL-60细胞中PML-RARA的表达情况。结果:***-8检测结果提示别欧前胡素处理后的HL-60细胞增殖明显受限,且抑制作用随着用药浓度的增加逐渐增加,当药物浓度为50μg/ml时其抑制作用最明显;别欧前胡素作用后的HL-60细胞台盼蓝染色率增高。2.随着别欧前胡素用药浓度的增加,HL-60细胞的凋亡率明显增加,以晚期凋亡为主,将HL-60细胞阻滞于S期。***-PCR的检测结果提示药物组BAX的表达较对照组明显增加,而抑制凋亡因子Bcl-2的表达受抑;Western blot检测结果与RT-PCR一致,且cleaved-caspase-8,-9,-3的蛋白表达显著增加。***数据库的分析表明,与非-AML患者的骨髓相比较,AML患者骨髓中的IARS2基因的表达明显增加(P=2.11E-4),IARS2表达越高患者的预后越差。*** blot及RT-PCR分析表明别欧前胡素处理后的HL-60细胞中IARS2蛋白及mRNA的表达逐渐减少,差异具有显著的统计学意义。6.微阵列分析提示,IARS2,IER3,HK3,ETV1,NTHL1,SOX4,PAOX在别欧前胡素组与DMSO组之间存在差异表达,且差异均具有显著的统计学意义;*** blot的分析结果提示P-JNK/JNK,P-ERK/ERK,P-P38/P38比值随着用药浓度的增加逐渐增加(P别欧前胡素组相比无显著的差异;8.别欧前胡素处理HL-60细胞后,细胞内PML-RARA的表达明显下降。结论:1.别欧前胡素可抑制HL-60细胞增殖,并诱导凋亡;2.别欧前胡素主要通过死亡受体途径及线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡;***2在AML患者骨髓中高表达,且IARS2表达量越高患者的预后越差;4.别欧前胡素可通过抑制IARS2的表达提高AML患者的生存率;***及P38 MAPK信号通路的激活在别欧前胡素诱导HL-60细胞凋亡的过程中起重要作用;6.别欧前胡素可诱导HL-60细胞进一步分化。

关键词：急性髓系白血病别欧前胡素线粒体及死亡受体途径 P-ERK/P-P38 MAPK IARS2

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别欧前胡素诱导急性髓系HL-60细胞凋亡机制研究

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中华实用诊断与治疗杂志 2018年第12期32卷 1153-1156页

作者：崔胜楠李玮周智辉白英英翟冬芝晁旭董昌虎李宏陕西中医药大学第二临床医学院2016级陕西咸阳712046 陕西中医药大学第二附属医院血液病科陕西咸阳712000

目的探讨别欧前胡素诱导急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的机制。方法对数生长期HL-60细胞随机分为对照组(普通培养液)、10mg/L别欧前胡素组(10mg/L别欧前胡素+培养液)、30mg/L别欧前胡素组(30mg/L别欧前胡素+培养液)、50mg/L别欧前胡素组(... 详细信息

目的探讨别欧前胡素诱导急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的机制。方法对数生长期HL-60细胞随机分为对照组(普通培养液)、10mg/L别欧前胡素组(10mg/L别欧前胡素+培养液)、30mg/L别欧前胡素组(30mg/L别欧前胡素+培养液)、50mg/L别欧前胡素组(50mg/L别欧前胡素+培养液),培养48h时行锥虫蓝染色检测4组HL-60细胞增殖抑制率,应用流式细胞仪检测细胞周期,采用实时荧光定量PCR法检测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-8蛋白相对表达量。结果培养48h,对照组及10、30、50mg/L别欧前胡素组细胞增殖抑制率[(1.53±0.18)%、(15.20±0.10)%、(32.80±0.10)%、(72.20±0.06)%]逐渐增加(P别欧前胡素组G1期细胞比率[(40.26±3.80)%、(41.91±5.60)%、(48.79±9.70)%、(60.42±6.30)%]逐渐增加(P别欧前胡素组Bcl-2mRNA相对表达量(1.00±0.06、0.82±0.03、0.53±0.02、0.24±0.01)、Bcl-2蛋白相对表达量(1.13±0.04、1.09±0.10、0.85±0.04、0.55±0.10)逐渐降低(P别欧前胡素可抑制急性髓系白血病HL-60细胞增殖,阻滞细胞于G1期,通过外源性和内源性途径诱导HL-60细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

关键词：急性髓系白血病别欧前胡素凋亡

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基于网络药理学探究防风中生物活性成分及对类风湿关节炎的作用机制

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中草药 2023年第17期54卷 5601-5618页

作者：蒋勇钟淑欣何升华梁家彬张浩宇叶裕丰陈汉威广州中医药大学番禺区中心医院广东广州510006 广州市番禺区中心医院中心实验室广东广州511486 暨南大学基础医学院广东广州510632 广州中医药大学第四临床医学院广东深圳518033 广州市番禺区健康管理中心广东广州511495

目的通过以网络药理学为基础的策略研究防风治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的分子生物学机制。方法采用网络药理学方法收集防风活性成分和治疗RA的潜在靶点,并评估活性成分的药理和毒理学等相关参数;构建蛋白质相互作用网... 详细信息

目的通过以网络药理学为基础的策略研究防风治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的分子生物学机制。方法采用网络药理学方法收集防风活性成分和治疗RA的潜在靶点,并评估活性成分的药理和毒理学等相关参数;构建蛋白质相互作用网络筛选核心靶点,并通过生物信息学方法进一步验证核心靶点和疾病的关联;对核心成分和相应靶点进行分子对接。体外通过CCK-8实验、细胞迁移和侵袭、细胞凋亡、qRT-PCR和Western blotting分析,阐明别欧前胡素对MH7A细胞磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路的调控作用。结果从防风中共鉴定出18种活性成分和66个与筛选出的RA疾病靶基因相交的潜在靶基因,最终获得了汉黄芩素、β-谷甾醇、5-O-甲基维斯阿米醇和别欧前胡素等核心成分。防风治疗RA的潜在机制可能是通过调控PI3K/Akt、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、凋亡等信号通路和多种生物过程来实现,以发挥抗炎和免疫调节作用。分子对接证实了所有的核心成分和关键靶点均具有很好的对接活性。别欧前胡素抑制MH7A细胞的活力、迁移和侵袭(P别欧前胡素通过抑制PI3K/Akt通路发挥对MH7A的调控作用。结论成功预测了防风治疗RA的有效成分和潜在靶点,为进一步探究其分子机制提供了新的理论基础。揭示了别欧前胡素通过PI3K/Akt通路抑制RA成纤维样滑膜细胞的活力、迁移、侵袭及细胞因子和MMPs的表达,并诱导细胞凋亡。

关键词：防风类风湿关节炎网络药理学发病机制别欧前胡素汉黄芩素 5-O-甲基维斯阿米醇成纤维样滑膜细胞 PI3K/Akt信号通路

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明党参根皮化学成分研究

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中草药 2014年第12期45卷 1673-1676页

作者：白钢钢袁斐毛坤军李富强陈建伟李祥南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省方剂研究重点实验室江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210029

目的研究明党参Changium smyrnioides根皮的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、反相柱色谱以及LH-20凝胶柱色谱等多种技术进行分离纯化,并根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果从明党参根皮95%乙醇提取物中分离得到了15个化合物,分别... 详细信息

目的研究明党参Changium smyrnioides根皮的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、反相柱色谱以及LH-20凝胶柱色谱等多种技术进行分离纯化,并根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果从明党参根皮95%乙醇提取物中分离得到了15个化合物,分别鉴定为欧前胡素（1）、珊瑚菜内酯（2）、花椒毒酚（3）、5-羟基8-甲氧基补骨脂素（4）、香草酸（5）、别欧前胡素（6）、补骨脂素（7）、佛手柑内酯（8）、5-甲氧基-8-O-β-D-葡萄糖基补骨脂素（9）、异茴芹内酯（10）、咖啡酸（11）、橙黄胡椒酰胺乙酸酯（12）、vaginatin（13）、β-谷甾醇（14）、琥珀酸（15）。结论化合物6~13为首次从党参属植物中分离得到。

关键词：明党参别欧前胡素补骨脂素佛手柑内酯异茴芹内酯咖啡酸橙黄胡椒酰胺乙酸酯

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