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药物生物技术 2013年第3期20卷 203-206页

作者：曹婉璐张娟涂孝洁许卓斌金海珍王旻中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

血管内皮生长因子(VEGF)是一种重要的血管生成调节因子。血管内皮生长因子受体2(VEGFR2,人VEGFR2也称为Kinase insert domain-containing receptor,KDR)是VEGF的特定膜受体之一。血管内皮生长因子阻断剂可以通过阻断VEGF-VEGFR2信号通... 详细信息

血管内皮生长因子(VEGF)是一种重要的血管生成调节因子。血管内皮生长因子受体2(VEGFR2,人VEGFR2也称为Kinase insert domain-containing receptor,KDR)是VEGF的特定膜受体之一。血管内皮生长因子阻断剂可以通过阻断VEGF-VEGFR2信号通路来调节重要的抑癌过程。目前尚没有研究VEGFR2胞外3区(KDR3)抑制血管活性的文献。因此,该研究旨在用大肠杆菌表达可溶性KDR3,并研究其抑制血管生成的活性。采用表面等离子体共振(SPR)技术检测到可溶性表达KDR3与VEGF16 5之间的平衡解离常数为54 nmol/L。采用划痕损伤修复实验来证明KDR3能够显著抑制***926细胞的迁移能力。最后通过鸡胚尿囊膜实验表明,KDR3在体内同样能够抑制新生血管生成。因此,该文初步论证外源性KDR3作为一种血管内皮生长因子阻滞剂的能力。

关键词：血管内皮生长因子受体血管抑制能力鸡胚尿囊膜模型表面等离子共振技术划痕修复实验血管阻断剂

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黄芪注射液作用于肺癌A549细胞的初步研究

黄芪注射液作用于肺癌A549细胞的初步研究

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作者：吴忧广西医科大学

学位级别：硕士

目的:应用黄芪注射液作用于肿瘤细胞,观察其增殖情况,以选取实验细胞。方法:通过CCK-8法检测黄芪注射液作用肿瘤细胞后24h、48h和72h的生长抑制率。结果:计算各肿瘤细胞被黄芪注射液处理后的抑制率,发现药物处理肺癌A549细胞后,细胞在... 详细信息

目的:应用黄芪注射液作用于肿瘤细胞,观察其增殖情况,以选取实验细胞。方法:通过CCK-8法检测黄芪注射液作用肿瘤细胞后24h、48h和72h的生长抑制率。结果:计算各肿瘤细胞被黄芪注射液处理后的抑制率,发现药物处理肺癌A549细胞后,细胞在低药物浓度时被促进生长,而在高药物浓度时生长被抑制,且各时间点具有良好的一致性。对于肝癌HepG2细胞、肝癌Hep3B细胞和神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞而言,被黄芪注射液长时间(超过24h)处理后,细胞增殖明显受到抑制,且少见有促生长效应。但在作用24h时,大多数药物浓度组均显现出明显的细胞促生长效应,与其他时间点展现的效应不一致。结论:从黄芪注射液作用肿瘤细胞后所展现出来的效应一致方面考虑,选择肺癌A549细胞作为本次后续实验的实验对象。目的:利用黄芪注射液处理肺癌A549细胞以探索其对该细胞生物学行为的影响。方法:通过显微镜观察黄芪注射液作用细胞后的细胞形态变化;利用前期实验得到的细胞抑制率,通过改良寇氏法计算黄芪注射液作用A549细胞的半抑制浓度(IC50);通过划痕修复实验和Transwell迁移实验观察细胞水平和垂直迁移能力的变化;通过细胞侵袭实验观察细胞侵袭能力的变化;通过流式细胞术检测细胞凋亡观察细胞凋亡的变化;结果:A549细胞受到高浓度黄芪注射液作用后,出现细胞皱缩逐渐脱离贴壁;计算IC50得药物作用后24h,48h,72h的IC50分别为:776mg/ml,851mg/ml,616mg/ml;在划痕修复实验中,对照组、100mg/ml和200mg/ml浓度组中划痕愈合明显,但在400mg/ml、600mg/ml和800mg/ml组中,由于细胞脱离贴壁较多,无法进行划痕宽度测量;Transwell小室迁移和侵袭实验中,100mg/ml组中的细胞穿膜数量较对照组多,但随着浓度的增加,细胞数量逐渐减少;在细胞凋亡实验中,随着药物浓度的增加,凋亡细胞所占的比例逐渐增多。结论:黄芪注射液在低浓度时有促进肺癌A549细胞生长的效应,随着浓度的增加,生长抑制效应才逐渐显现。

关键词：黄芪注射液肺癌A549细胞肝癌HepG2细胞肝癌Hep3B细胞神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞黄芪注射液 A549细胞改良寇氏法 IC50 划痕修复实验 Transwell 侵袭流式细胞术

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Parafibromin在结直肠癌中的表达及其机制研究

Parafibromin在结直肠癌中的表达及其机制研究

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作者：赵爽承德医学院

学位级别：硕士

结直肠癌是世界上最常见的癌症之一，全世界每年的新发结直肠癌病例占所有新发癌症病例的10%。虽然在病理学和遗传学方面研究表明结肠腺瘤先发于大多数腺癌，但我们对结直肠癌发生和不良预后的分子机制了解甚少。Parafibromin是由HRPT2... 详细信息

结直肠癌是世界上最常见的癌症之一，全世界每年的新发结直肠癌病例占所有新发癌症病例的10%。虽然在病理学和遗传学方面研究表明结肠腺瘤先发于大多数腺癌，但我们对结直肠癌发生和不良预后的分子机制了解甚少。Parafibromin是由HRPT2基因编码的肿瘤抑制因子，在甲状旁腺癌、乳腺癌、胃癌及结直肠癌中，均发现parafibromin表达下调，并与肿瘤恶性病理生物学行为关系密切。Parafibromin蛋白可与剪切多聚腺苷酸特异性因子(cleavage and polyadenylation specificity factor，CPSF)、剪切刺激因子(leavage stimulation factor，CStF)及偶对蛋白(symplekin)形成复合物，还可以与组蛋白甲基转移酶(HMT)和多聚腺苷化元件结合蛋白1(CPEB1)相互作用，这些复合体可结合于核酸序列后调节启动子活性或mRNA成熟，进而参与细胞周期、细胞增殖、凋亡、分化、迁徙和转移等生物学活动。第一部分结直肠癌组织中parafibromin的表达及其临床病理意义目的:研究parafibromin在结直肠癌组织中的定位和表达及其与临床病理特征的相关性,以初步探讨parafibromin在结直肠癌中表达的临床病理意义。方法:1.采用RT-PCR方法检测15例冰冻结直肠癌及癌旁组织中的parafibromin mRNA的表达;2.采用Western蛋白印迹方法检测15例冰冻结直肠癌及癌旁组织中的parafibromin蛋白的表达;3.构建组织芯片，利用免疫组织化学SP方法检测结直肠癌（n=306）及癌旁组织（n=279）中parafibromin蛋白表达,分析结直肠癌组织中parafibromin蛋白表达的临床病理意义。4.所有数据用SPSS13.0软件进行统计分析，Spearman秩相关系数检验分析parafibromin表达与临床病理资料关系。Kaplan-Meier法建立生存曲线，Cox比例风险回归分析建立多因素生存分析数据的比例危险模型。P0.05）。15例癌旁组织样本中，有2例蛋白样品未出现目的条带;15例结直肠癌组织样本均有parafibromin表达，结直肠癌组织中的parafibromin蛋白表达水平与癌旁组织无明显差异（P>0.05）。2.结直肠癌组织中parafibromin蛋白表达与临床病理参数的关系。应用免疫组化方法检测parafibromin蛋白在结直肠癌及癌旁组织中的表达情况，结果显示parafibromin蛋白表达于细胞核。Parafibromin蛋白在癌和癌旁组织中阳性表达率分别为53.9%（165/306）和91.4%（255/279）。统计学分析显示，在结直肠癌组织中parafibromin蛋白表达低于癌旁正常粘膜（P﹤0.05）。Parafibromin蛋白表达与患者性别（P=0.292）、年龄（P=0.758）及静脉侵袭（P=0.173）因素无关，parafibromin蛋白表达与肿瘤直径（P=0.019）、UICC分期（P=0.017）及淋巴结转移（P=0.009）呈负相关。Kaplan-Meier法建立生存曲线，显示parafibromin蛋白表达阳性患者累积生存率明显高于阴性患者（P﹤0.05）。COX比例风险回归分析表明parafibromin蛋白表达是结直肠癌患者独立的预后因素（P>0.05）。结论:1.结直肠癌组织中parafibromin mRNA和蛋白表达水平与癌旁正常黏膜组织无明显差异。2.临床病理分析结果显示parafibromin在结直肠癌中的表达降低可能参与结直肠癌的生长和转移。3. Parafibromin表达降低可能影响结直肠癌患者的生存时间，可以作为评估预后的有效生物学标志物。第二部分parafibromin重组载体转染细胞的生物学效应及其机制研究目的:研究外源基因parafibromin对结肠癌细胞株DLD-1的影响及其可能机理。方法:1.选取结肠癌细胞株DLD-1稳定转染parafibromin真核表达质粒，通过western和RT-PCR检测单克隆中parafibromin的转录和翻译水平

关键词：结直肠癌 parafibromin 预后 Western-blot RT-PCR 免疫组化 parafibromin 细胞周期划痕修复实验 Transwell 细胞侵袭实验 DLD-1

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