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浒苔模拟肠胃液消化水解液中血管紧张素转化酶抑制肽的分离纯化与鉴定

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食品与发酵工业 2023年第12期49卷 194-201页

作者：张迪罗威梁海娣王宇晗郭天赋广东海洋大学食品科技学院广东湛江524088 湛江幼儿师范专科学校广东湛江524084 岭南师范学院基础教育学院广东湛江524037 广东省水产品加工与安全重点实验室广东湛江524088 广东省海洋食品工程技术研究中心广东湛江524088 广东普通高等学校水产品深加工重点实验室广东湛江524088

为从浒苔模拟胃肠道消化产物中制备血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽,并鉴定其结构,该研究以浒苔为原料,模拟肠胃液消化条件对其进行水解,以体外ACE抑制率为指标,并采用超滤、凝胶色谱、离子色谱和反向色谱... 详细信息

为从浒苔模拟胃肠道消化产物中制备血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽,并鉴定其结构,该研究以浒苔为原料,模拟肠胃液消化条件对其进行水解,以体外ACE抑制率为指标,并采用超滤、凝胶色谱、离子色谱和反向色谱对浒苔模拟肠胃消化水解液进行分离纯化和筛选,以期获得纯度较高的ACE抑制肽,同时采用高效液相-四级杆飞行时间串联质谱对ACE抑制肽的氨基酸序列进行分析鉴定。结果表明,浒苔模拟肠胃液消化水解液中的ACE抑制活性肽主要分布在分离纯化筛选得到一种新型ACE抑制肽,其分子质量为348.1 Da,肽序列为Leu-Tyr,半数抑制浓度IC_(50)值为(0.12±0.01)mg/mL,与模拟消化产物相比,ACE抑制肽的IC_(50)值纯化了11.17倍。该研究利用浒苔模拟肠胃液消化水解液制备ACE抑制肽,可以为浒苔的高值化利用提供理论参考。

关键词：浒苔模拟胃肠道消化血管紧张素转化酶抑制肽分离纯化

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南极磷虾主要过敏原的分离纯化及性质研究

水产学报 2022年第3期46卷 445-456页

作者：林娜马德蓉刘志东倪玲段蕊张俊杰中国水产科学研究院东海水产研究所江苏海洋大学食品科学与工程学院

为了探究南极磷虾致敏问题，从南极磷虾中筛选、鉴定、分离纯化其主要过敏原，并对过敏原的性质进行研究，实验通过缓冲盐溶液提取南极磷虾蛋白；采用SDS-PAGE和Western blot (WB)筛选南极磷虾过敏原；使用高效液相色谱-串联质谱鉴定过... 详细信息

为了探究南极磷虾致敏问题，从南极磷虾中筛选、鉴定、分离纯化其主要过敏原，并对过敏原的性质进行研究，实验通过缓冲盐溶液提取南极磷虾蛋白；采用SDS-PAGE和Western blot (WB)筛选南极磷虾过敏原；使用高效液相色谱-串联质谱鉴定过敏蛋白；通过等电点沉淀、硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析分离纯化过敏原；采用SDS-PAGE及WB分析南极磷虾主要过敏原的耐热性及对模拟胃肠液的消化稳定性。结果显示，南极磷虾肌浆蛋白(SP)和肌原纤维蛋白(MF)电泳条带丰富且分子量范围广。南极磷虾蛋白与虾蟹过敏患者血清能发生免疫反应，其中至少有4个蛋白条带发生了阳性反应；免疫反应最强烈的蛋白分子量约为35 ku，能够被所有的患者血清识别，经液质联用鉴定此过敏蛋白为南极磷虾原肌球蛋白(TM)。硫酸铵分级盐析纯化TM的最佳饱和度为50%；分离纯化后得到了纯度较高的TM，其等电点为4.4，热稳定性好，能与虾蟹过敏患者血清发生强烈的免疫反应。TM随着模拟胃液消化时间的延长，主条带分子量逐渐降低，最后稳定在33 ku左右，并且分子量为15和12 ku的降解片段含量逐渐增多且稳定存在；这些降解条带仍然能与过敏患者血清发生较强的免疫反应。随着模拟肠液消化时间的延长，TM原始片段逐渐减少直至消失，最后完全降解成分子量更小的多肽；TM经肠液消化后其降解产物免疫活性大大降低。研究表明，南极磷虾中存在过敏原，TM是其最主要的过敏原，且具有免疫反应性。TM还具备了过敏原的一般特性，比如耐高温、耐胃蛋白酶消化、对胰蛋白酶消化部分稳定。研究结果对于阐明南极磷虾潜在致敏问题的预警和防控具有现实意义，也为南极磷虾加工利用及过敏原消减技术构建提供基础信息。

关键词：南极磷虾过敏原原肌球蛋白(TM) 分离纯化免疫反应性消化稳定性

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草菇子实体多肽的分离纯化及其结构分析

菌物学报 2023年第8期42卷 1775-1784页

作者：张芳艺张瑜萍罗小芳刘培培林晓彤邓优锦江玉姬陈炳智福建农林大学食品科学学院福建福州350002 福建农林大学菌物研究中心福建福州350002 农业农村部亚热带特色果蔬菌加工重点实验室(部省共建) 福建福州350002

采用碱性蛋白酶酶解提取草菇子实体多肽,透析法对其进行分离纯化得到3−10、1–3及1 kDa以下3种多肽组分,比较3种组分的体外抗氧化活性。用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)、紫外吸收光谱、傅里叶红外光谱和氨基酸的测定方法表征纯化后多肽... 详细信息

采用碱性蛋白酶酶解提取草菇子实体多肽,透析法对其进行分离纯化得到3−10、1–3及1 kDa以下3种多肽组分,比较3种组分的体外抗氧化活性。用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)、紫外吸收光谱、傅里叶红外光谱和氨基酸的测定方法表征纯化后多肽结构。结果表明,1–3 kDa组分的抗氧化活性最强,其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率达到99.81%,铁离子自由基还原能力为1.47,2,2′-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS+]自由基和羟自由基的清除能力分别达到99.15%、99.34%。此分子量的草菇抗氧化肽的总蛋白含量为71.12%,灰分含量为12.75%,水分含量为8.44%,其他为7.69%。经鉴定表明草菇子实体多肽是一种优质蛋白质。

关键词：草菇子实体多肽分离纯化透析抗氧化活性氨基酸

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山楂多糖的分离纯化及其对粪便菌群的影响

食品与发酵工业 2023年第12期49卷 54-61页

作者：廖强邓志扬刘佳张文静邵淑娟吴姗刘军中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083 菏泽市食品药品检验检测研究院山东菏泽274000 西安银桥乳业(集团)有限公司陕西西安710075

多糖是山楂中重要功能活性成分,具有免疫调节、抗炎、调节糖脂代谢、抗糖基化等多种有益于人体健康的功能活性。该研究采用水提醇沉法从新鲜山楂中提取多糖,经大孔吸附树脂AB-8脱色后先后通过Q-sepharose^(TM)Fast Flow阴离子交换树脂及... 详细信息

多糖是山楂中重要功能活性成分,具有免疫调节、抗炎、调节糖脂代谢、抗糖基化等多种有益于人体健康的功能活性。该研究采用水提醇沉法从新鲜山楂中提取多糖,经大孔吸附树脂AB-8脱色后先后通过Q-sepharose^(TM)Fast Flow阴离子交换树脂及Sephadex^(TM) G-500凝胶对山楂多糖进行分离纯化,收集得到组分HFP-2并对其单糖组成及结构特征进行分析。结果表明,HFP-2的总糖与蛋白质含量分别为(93.84±0.58)%和(5.41±0.05)%,其分子质量为2.60×10^(5)kDa,主要由半乳糖醛酸(36.91 mol%)、阿拉伯糖(28.11 mol%)、葡萄糖(15.02 mol%)、半乳糖(13.06 mol%)、鼠李糖(7.49 mol%)构成。结合傅里叶变换红外光谱分析HFP-2结构中官能团推测该组分为类似半乳糖醛酸为主链的果胶结构。体外粪便菌群发酵实验表明,HFP-2能够显著增加Phascolarctobacterium、Bacteroides、Prevotella、Roseburia等菌属的相对丰度(P<0.05)且促进乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸等短链脂肪酸的生成。HFP-2能够通过调节肠道菌群多样性及代谢发挥益生作用,可作为益生元应用于功能食品。

关键词：山楂多糖分离纯化体外发酵短链脂肪酸粪便菌群

DA201-C大孔吸附树脂对乳铁蛋白抗菌肽的分离纯化

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食品与发酵工业 2022年第22期48卷 213-219页

作者：张林蔡寅川郝刚胡婷蒋思雨西南民族大学食品科学与技术学院四川成都610041 四川阿坝州工业经济研究所四川汶川623000

该研究以吸附量、树脂动态吸附和不同乙醇浓度(体积分数)梯度洗脱为考察指标,优化了DA201-C大孔树脂对超滤处理后的乳铁蛋白抗菌肽溶液(分子质量<3000 Da)分离纯化的工艺条件。静态吸附结果表明,当树脂吸附12 h后,吸附量为479.7 mg/g、... 详细信息

该研究以吸附量、树脂动态吸附和不同乙醇浓度(体积分数)梯度洗脱为考察指标,优化了DA201-C大孔树脂对超滤处理后的乳铁蛋白抗菌肽溶液(分子质量分离纯化的工艺条件。静态吸附结果表明,当树脂吸附12 h后,吸附量为479.7 mg/g、吸附率为95.94%;对吸附饱和的树脂使用不同浓度的乙醇静态解吸,结果显示,75%(体积分数)乙醇解吸率达到95.35%。该研究还确定了最优吸附条件:NaCl浓度0.6 mol/L、上样流速1.5 mL/min和上样质量浓度20 mg/mL。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌率为指标,用不同浓度乙醇对乳铁蛋白抗菌肽进行梯度洗脱,结果表明,75%乙醇洗脱组分抑菌活性最强,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率分别达到80.95%和74.42%,与未纯化前相比提高了12.2%左右。对不同洗脱组分的氨基酸分析,结果显示,抗菌肽的疏水性及正电荷性越大,抗菌活性越强。

关键词：乳铁蛋白抗菌肽大孔吸附树脂超滤分离纯化

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黄粉虫凝乳蛋白酶的分离纯化及结构预测

食品与发酵工业 2022年第14期48卷 93-99页

作者：杨祥乔海军杨晓丽文鹏程汪月张卫兵张忠明甘肃农业大学食品科学与工程学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学理学院甘肃兰州730070 甘肃省商业科技研究所有限公司甘肃兰州730000

黄粉虫资源丰富、蛋白含量高,具有很高的开发价值,然而关于黄粉虫凝乳蛋白酶鲜有报道。该研究采用连续柱层析的方法从黄粉虫肠道中分离纯化出了一种凝乳蛋白酶。利用液相色谱串联质谱和Edman降解等方法比对得到该酶的氨基酸序列。使用... 详细信息

黄粉虫资源丰富、蛋白含量高,具有很高的开发价值,然而关于黄粉虫凝乳蛋白酶鲜有报道。该研究采用连续柱层析的方法从黄粉虫肠道中分离纯化出了一种凝乳蛋白酶。利用液相色谱串联质谱和Edman降解等方法比对得到该酶的氨基酸序列。使用生物信息学方法预测和分析了其理化性质和结构。结果表明,黄粉虫凝乳蛋白酶的分子质量约为29.68 kDa,凝乳活力为173.8 SU/mg,C/P(clotting activity/proteolytic activity)值为104.7。该酶的等电点为4.22;疏水性氨基酸比例为43.37%,不稳定性指数31.49,理化性质稳定。与小牛皱胃酶和骆驼凝乳酶比对发现,三者在N端序列和二级结构等方面具有较大差异;该酶64.8%的氨基酸残基的归一化B因子(normalized B-factor,BFP)值<0,说明其三级结构具有良好的稳定性。该研究可为昆虫凝乳蛋白酶的研究提供理论依据。

关键词：黄粉虫凝乳蛋白酶分离纯化理化性质结构

刺五加新品种‘紫加1号’多糖分离纯化及抗氧化活性分析

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广西植物 2024年第2期44卷 362-372页

作者：周锦燕张芸刘良燕张慧阮流洋曾千春云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201

‘紫加1号’为该课题组选育的刺五加(Acanthopanax senticosus)新品种,嫩茎叶灰紫色且味甘。为分离纯化‘紫加1号’嫩茎叶多糖,并测定各组分的单糖组成和分子量大小、评价各组分的抗氧化活性。该研究以‘紫加1号’嫩茎叶为材料,采用水... 详细信息

‘紫加1号’为该课题组选育的刺五加(Acanthopanax senticosus)新品种,嫩茎叶灰紫色且味甘。为分离纯化‘紫加1号’嫩茎叶多糖,并测定各组分的单糖组成和分子量大小、评价各组分的抗氧化活性。该研究以‘紫加1号’嫩茎叶为材料,采用水提醇沉工艺,经大孔树脂吸附法除杂脱色得到粗多糖(A.polysaccharides,ASPS);通过DEAE-Cellulose 52离子柱和Sephadex G-100凝胶柱分离纯化得多糖组分;采用离子色谱和凝胶色谱-示差-多角度激光光散射色谱,测定各均一组分的单糖组成和分子量;通过测定均一组分清除羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_(2)^(-·))、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)的能力,分析其体外抗氧化活性强弱。结果表明:ASPS经分离纯化得到4种多糖组分,即酸性多糖ASPA-1-1、ASPA-2-1、ASPA-3-1和中性多糖ASPN-1,其分子量依次为8.10、26.15、0.91、0.89 kDa,主要是由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、核糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等按不同比例组成的杂多糖。ASPA-1-1、ASPA-2-1、ASPA-3-1、ASPN-1均具有明显的抗氧化活性,其中ASPA-2-1清除·OH、DPPH的能力高于ASPA-1-1、ASPA-3-1、ASPN-1,而ASPA-3-1清除O_(2)^(-·)的能力最强。综上认为,从‘紫加1号’中分离纯化得到的多糖具有较好的抗氧化活性。该研究结果为‘紫加1号’作为天然抗氧化剂的深度研究和进一步开发与利用提供了一定的科学理论依据。

关键词：紫加1号嫩茎叶多糖分离纯化单糖组成分子量抗氧化活性

芪归多糖的分离纯化及体外抑制肿瘤细胞增殖研究

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天然产物研究与开发 2023年第10期35卷 1651-1658页

作者：刘文娟马善波鹿纹菲崔东晓徐顶巧乐世俊曹蔚唐于平陕西中医药大学陕西中医药管理局中药配伍重点研究室咸阳712046 空军军医大学第一附属医院药剂科西安710032 西北农林科技大学化学与药学院杨凌712100

黄芪-当归配伍为经典补气养血药对,多糖是其重要药效物质。本研究从芪归药对中分离纯化获得6种芪归多糖,CCK-8实验筛选发现其中两种AAPS-1a和AAPS-3a对人结肠癌细胞HCT116和肺癌细胞A549抑制作用显著,对HCT116增殖抑制作用最强,IC_(50)... 详细信息

黄芪-当归配伍为经典补气养血药对,多糖是其重要药效物质。本研究从芪归药对中分离纯化获得6种芪归多糖,CCK-8实验筛选发现其中两种AAPS-1a和AAPS-3a对人结肠癌细胞HCT116和肺癌细胞A549抑制作用显著,对HCT116增殖抑制作用最强,IC_(50)值分别为(47.59±1.3)μg/mL和(18.33±2.5)μg/mL;对A549增值抑制作用次之,IC_(50)值分别为(52.12±1.1)μg/mL和(170.21±2.3)μg/mL。同时,AAPS-1a和AAPS-3a显著诱导HCT116和A549细胞发生凋亡,HCT116细胞凋亡率分别为31.4%和46.5%;A549细胞凋亡率分别为19.3%和33.0%。结构特征分析表明,AAPS-1a和AAPS-3a为分子量分别为7.3×10^(5)、8.5×10^(4)Da的均一多糖。本研究从芪归药对中筛选获得具有肿瘤细胞增殖抑制活性的芪归均一多糖,为阐明芪归多糖抗肿瘤结构基础研究提供重要实验依据。

关键词：黄芪-当归药对芪归多糖分离纯化增殖凋亡

牦牛酥油乳脂肪球膜蛋白分离纯化和蛋白组鉴定及功能分析

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食品与发酵工业 2022年第13期48卷 163-172页

作者：谈婷罗毅皓孙万成青海大学农牧学院青海西宁810016

为探究牦牛酥油脂肪球膜(milk fat globule membrane,MFGM)蛋白纯化前后的组成及功能差异,通过表面活性剂聚乙二醇辛基苯基醚溶液和钠离子磷酸盐缓冲溶液提取牦牛酥油中MFGM蛋白,利用AKTA pure 25M蛋白质纯化系统结合阴离子交换层析柱DE... 详细信息

为探究牦牛酥油脂肪球膜(milk fat globule membrane,MFGM)蛋白纯化前后的组成及功能差异,通过表面活性剂聚乙二醇辛基苯基醚溶液和钠离子磷酸盐缓冲溶液提取牦牛酥油中MFGM蛋白,利用AKTA pure 25M蛋白质纯化系统结合阴离子交换层析柱DEAE-Sepharose FF(DEAE琼脂糖凝胶),对MFGM蛋白脂肪酸结合蛋白3(fatty acid binding protein 3,FABP 3)纯化工艺进行优化,得出最优条件:洗脱体积50 mL,缓冲液pH 7.4,洗脱速度1.6 mL/min,洗脱液浓度0.50 mol/L,该条件下,FABP 3得率达83.19%。以牦牛酥油MFGM蛋白粗提物和纯化物为研究对象,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和液相色谱质谱联用技术,结合无标记相对定量分析,得出主要MFGM蛋白为FABP 3,共定量到31种MFGM蛋白,其中纯化MFGM蛋白和粗提MFGM蛋白差异蛋白20种,并通过基因本体功能注释、KEGG代谢通路分析对鉴定到的蛋白进行功能及作用的生物学途径探讨。

关键词：牦牛酥油脂肪球膜蛋白分离纯化蛋白组成功能分析