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人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂的制备与质量评价

微生物学免疫学进展 2024年第3期52卷 45-51页

作者：郭玉婷付艳丽孔涛马亚茹梁凌宇陈勇兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗技术创新中心

目的建立一种从废弃的Cohn法组份IV沉淀中提取制备人抗凝血酶Ⅲ浓缩制剂的工艺，并通过与国外已上市人抗凝血酶-Ⅲ产品进行质量及相关药代动力学参数对比，评价制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂的质量情况。方法对制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓... 详细信息

目的建立一种从废弃的Cohn法组份IV沉淀中提取制备人抗凝血酶Ⅲ浓缩制剂的工艺，并通过与国外已上市人抗凝血酶-Ⅲ产品进行质量及相关药代动力学参数对比，评价制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂的质量情况。方法对制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂和国外已上市人抗凝血酶-Ⅲ产品Thrombate Ⅲ?进行活性、纯度、肝素亲和力等关键质量属性的检测对比，并进行小鼠体内消除半衰期对比研究，评价2种制品的质量相似性。结果制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂活性为56.7 IU/mL,Thrombate Ⅲ?活性为53.4 IU/mL;制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂的纯度为99.1%,Thrombate Ⅲ?的纯度为97.3%;制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂中具肝素亲和活性的分子约为89.1%,Thrombate Ⅲ?分子中具肝素亲和活性的分子约为84.6%;制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂的比活为10.98 IU/mg, Thrombate Ⅲ?的比活为9.98 IU/mg;制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂在小鼠体内的消除半衰期为5.19 h, Thrombate Ⅲ?在小鼠体内的消除半衰期为4.85 h;经t检验分析，制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂中的hAT-Ⅲ与Thrombate Ⅲ?中的hAT-Ⅲ在小鼠血清中的药物消除速率差异无统计学意义（P=0.253 1）。结论与国外已上市同类产品Thrombate Ⅲ?相比，制备的人抗凝血酶-Ⅲ浓缩制剂的各项关键质量指标均非劣于Thrombate Ⅲ?,说明本文所述人抗凝血酶-Ⅲ的制备工艺能有效从废弃的Cohn法组份IV沉淀中提取高质量的人抗凝血酶-Ⅲ制剂，能有效提高人血浆综合利用效率。

关键词：人抗凝血酶-Ⅲ 质量控制半衰期分离和纯化血浆

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苦葫芦总糖的分离纯化和含量测定

药物分析杂志 2008年第7期28卷 1121-1123页

作者：李爱英尹艳连河北工程大学附属医院邯郸056029

目的:从苦葫芦中分离纯化总糖,并建立苦葫芦总糖的含量测定方法。方法:以水提醇沉法提取苦葫芦总糖,用 Sepha-dex G-100凝胶柱色谱法纯化总糖;并用改良的苯酚一硫酸法测定总糖含量。结果:测得苦葫芦粗总糖的含量为30.61%;精制总糖的含量... 详细信息

目的:从苦葫芦中分离纯化总糖,并建立苦葫芦总糖的含量测定方法。方法:以水提醇沉法提取苦葫芦总糖,用 Sepha-dex G-100凝胶柱色谱法纯化总糖;并用改良的苯酚一硫酸法测定总糖含量。结果:测得苦葫芦粗总糖的含量为30.61%;精制总糖的含量为80.18%;测定方法的平均回收率(n=5)为99.42%,RSD=0.64%。结论:本法操作简便,结果准确,重复性好,可用于苦葫芦中总糖成分的分离纯化和含量测定。

关键词：苦葫芦总糖分离和纯化分光光度法

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紫花芸豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化

安徽农业科学 2009年第15期37卷 6869-6871页

作者：刘盈盈洪江杨玲张高贵州科学院蛋白质工程实验室贵州贵阳550008

[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝... 详细信息

[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝胶过滤法测定其表观分子量约为59 kD。SDS电泳结果显示它有3个亚基,分子量分别为341、61、5 kD。等电聚焦法测定其等电点为5.25。动力学的方法检测PVTI与胰蛋白酶发生不可逆抑制作用。[结论]离子交换层析和凝胶过滤层析法能快速地分离纯化紫花芸豆中的胰蛋白酶抑制剂。

关键词：紫花芸豆胰蛋白酶抑制剂分离和纯化

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大米抗氧化活性肽的分离纯化和性质研究

大米抗氧化活性肽的分离纯化和性质研究

作者：申衍豪中南林业科技大学

学位级别：硕士

自从Harman提出自由基理论以来,人们认识到人体内氧化产生的自由基与人体衰老和许多疾病有关,因此人们越来越关注抗氧化剂。但目前大多数抗氧化剂都是化学合成物,如叔丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）;这些化学类抗氧化剂... 详细信息

自从Harman提出自由基理论以来,人们认识到人体内氧化产生的自由基与人体衰老和许多疾病有关,因此人们越来越关注抗氧化剂。但目前大多数抗氧化剂都是化学合成物,如叔丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）;这些化学类抗氧化剂虽然效果好,但是对人体具有潜在毒性。近年来,人们把目光转到天然性的抗氧化剂,如抗坏血酸、α-生育酚、茶多酚、大豆蛋白酶解得到的大豆肽等。近年来研究发现,大米源抗氧化活性肽（antixox-idative peptide）也具有较强的抑制生物大分子过氧化和清除体内自由基的功能,而且这些抗氧化活性肽往往强于蛋白质和氨基酸,并且具有低毒、高效等特点,有望利用这些抗氧化活性肽开发新功能食品和保健品。本文对大米抗氧化活性肽的制备工艺进行了优化,通过响应面分析法优化了超声波处理工艺参数的最佳组合;通过不同的体外体系,研究大米碱性蛋白酶酶解产物的抗氧化活性,然后进一步分离和纯化,得到了几段抗氧化活性高的片段;并通过体外模拟人体消化,评价分析了消化对大米抗氧化活性肽抗氧化活性的影响。现将主要结果和结论归纳如下： 1、选取超声功率、超声处理时间、超声处理初始温度做3因素3水平响应面分析实验,采用SAS程序对实验数据进行回归分析,得出模型中最佳提取工艺参数：超声功率1750W、超声处理时间30min、超声处理初始温度40℃,其DPPH·清除率预测可达到78.2%。对以上工艺参数进行验证实验,经3次平行测定,各抗氧化肽的DPPH·清除率分别为：76.0%、75.8%和77.4%,此时抗氧化肽的浓度分别为1.5037、1.5163和1.5085mg/mL, DPPH清除率的平均值为76.4%,抗氧化肽的平均浓度为1.5095mg/mL,实验结果较理想。在优化工艺条件下,抗氧化肽得率由31.6%提高到42.2%。 2、本章采用了5种抗氧化活性检测的方法,其中包含了脂类物质氧化抑制能力的方法、清除自由基能力的方法和还原能力的测定方法,较全面地反映了大米多肽的抗氧化能力。并和Vc的抗氧化能力做了比较,在高浓度20.00～50.00mg/mL,大米多肽和Vc对·OH清除能力相当,但是在其他浓度和清除其他自由基的情况时,大米多肽的能力都低于Vc。总的来说,大米多肽的抗氧化能力在一定范围内,与浓度呈一定的量效比。 3、使用葡聚糖凝胶SephadexG-25初步分离纯化后,发现分子量在132.7-1153.9的小肽占得相当大的比例,为下一步纯化分离打下了基础。 4、利用SP-Sephadex C-25作为离子交换层析介质,pH4.0,0.02mol/LHAc-NaAc为起始缓冲液,流速120mL/h, NaCl（0～1mol/L）梯度洗脱,大米碱性蛋白酶水解产物NHREP得到了较好的分离,混合肽组分被分离出七个组分（A-G）,组分F的DPPH·清除能力最强（80.09±1.22%）。 5、利用Sephadex G-15凝胶色谱又将组分F分成了4个组分F1、F2、F3和F4。并分别检测了各组分的DPPH·清除能力。结果发现,组分F3表现出最强的DPPH·清除能力（达到77.64%）。组分F3经RP-HPLC分离后,分成五个主要组分,其中组分F3b的DPPH·清除能力最强,达到了89.53%;组分F3c次之,其对DPPH·的清除能力为76.21%。 6、通过体外模拟人体消化过程,测定大米活性多肽清除DPPH·的能力,来评价体外模拟人体消化过程对大米多肽抗氧化能力影响的情况。经过人体模拟消化后,最后在透析液中,大米多肽清除DPPH·的清除率最高可以达到45.53%。这为后续大米多肽在体内实验提供了良好的基础,并建立了大米多肽体外模拟消化的实验流程图。

关键词：大米抗氧化活性肽响应面优化体外模拟实验分离和纯化

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紫羊茅根中铜结合肽的分离和纯化

应用与环境生物学报 1998年第4期4卷 335-339页

作者：黄玉山邱国华香港九龙城市大学生物及化学系中山大学生物工程研究中心

利用１次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０凝胶过滤和２次ＱＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换层析的方法，从最后６ｄ用ＣｕＣｌ２处理（ρ＝２０ｍｇ／Ｌ）、２０ｄ龄的紫羊茅（Ｆｅｓｔｕｃａｒｕｂｒａｃｖ．Ｍｅｒｌｉｎ）根中分离纯... 详细信息

利用１次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０凝胶过滤和２次ＱＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换层析的方法，从最后６ｄ用ＣｕＣｌ２处理（ρ＝２０ｍｇ／Ｌ）、２０ｄ龄的紫羊茅（Ｆｅｓｔｕｃａｒｕｂｒａｃｖ．Ｍｅｒｌｉｎ）根中分离纯化了１个铜结合肽（ＣｕＢＰ２ａ），该肽在ＳｕｐｅｒｄｅｘＰｅｐｔｉｄｅＨＲ１０／３０预装柱的ＦＰＬＣ凝胶过滤中在λ２５４ｎｍ处只出现一个峰，经分子量标准曲线估计，其Ｍｒ约为１４００，在ＤｅｌｔａＰａｋＣ１８的反相ＨＰＬＣ中，在λ２５４ｎｍ处也只有１个紫外吸收峰值，这都说明该肽已经达到了较高的的纯度．通过光谱分析，发现该肽的最大紫外吸收值在２４８．１ｎｍ处．对Ｃｕ结合物在植物体内的存在状态进行了讨论．

关键词：紫羊茅铜诱导铜结合肽分离和纯化

大鼠肝脏溶酶体中新的铜结合蛋白的分离和纯化

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中国医科大学学报 2005年第1期34卷 14-15页

作者：具英花于占武中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110001 辽宁省肿瘤医院胸外科

目的:分离大鼠肝脏溶酶体中铜结合蛋白质,并分析其氨基酸序列。方法:G25液相层析,铜结合层析,高效液相色谱,氨基酸序列测定。结果:G25和铜结合液相层析得到溶酶体中蛋白质成分。SDS-PAGE电泳分析铜结合蛋白质,得到两条主要蛋白带,这些... 详细信息

目的:分离大鼠肝脏溶酶体中铜结合蛋白质,并分析其氨基酸序列。方法:G25液相层析,铜结合层析,高效液相色谱,氨基酸序列测定。结果:G25和铜结合液相层析得到溶酶体中蛋白质成分。SDS-PAGE电泳分析铜结合蛋白质,得到两条主要蛋白带,这些蛋白质的分子量分别为 58kDa, 40kDa。两种主要蛋白质的氨基酸序列测定Band1(分子量 58kDa):AFQILYLTHNL。同源性分析表明蛋白质与哺乳动物蛋白质无同源性。结论:从大鼠肝脏溶酶体中分离纯化得到的蛋白质是一种新的蛋白质。

关键词：鼠肝溶酶体大鼠肝脏结合蛋白蛋白质层析氨基酸序列分离和纯化 SDS-PAGE电泳

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大鼠精原干细胞的高效分离和纯化方法

中国细胞生物学学报 2011年第5期33卷 543-547页

作者：张岩罗奋华刘林洪萨初拉于泊洋吴应积内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

精原干细胞是精子发生的基础，是永久分化成精子的克隆源，它既可以自我更新维持体内干细胞的数量，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟精子。本文以22～25日龄Wistar．Iamichi大鼠为研究对象，利用两步酶消化法分离得到睾丸... 详细信息

精原干细胞是精子发生的基础，是永久分化成精子的克隆源，它既可以自我更新维持体内干细胞的数量，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟精子。本文以22～25日龄Wistar．Iamichi大鼠为研究对象，利用两步酶消化法分离得到睾丸曲细精管细胞悬液，根据精原干细胞与曲细精管细胞悬液中体细胞（支持细胞及少量的管周细胞）及各级分化的生精细胞贴壁能力及对细胞外基质粘附力的不同，将大鼠精原干细胞进行纯化。经纯化后，5只大鼠的睾丸可以得到约3×10’个精原干细胞，该精原干细胞在体外培养可形成克隆，并且该克隆可表达精原干细胞特异的标记基因GFRal和CDHl。本文所介绍的高效分离和纯化大鼠精原干细胞的方法，操作简便，且得到的精原干细胞具有很高的活力和增殖能力，该方法为今后大鼠精原干细胞的长期培养及操作研究奠定了基础。

关键词：大鼠皋丸精原干细胞分离和纯化

海洋链霉菌GB-2抗细菌物质的溶解性质和分离纯化

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食品科学 2008年第7期29卷 306-310页

作者：陆颖健董昕刘姝别小妹南京农业大学食品科技学院江苏南京210095

本实验主要对海洋链霉菌株GB-2产生的抗菌物质的溶解性进行了研究,并将其分离纯化。通过对GB-2的发酵液中抗菌物质的溶解性测定,可推知是一种极性较大的水溶性物质。超滤实验发现,抗细菌组分能通过截留分子量(COMW)≤1kD的超滤膜。Sepha... 详细信息

本实验主要对海洋链霉菌株GB-2产生的抗菌物质的溶解性进行了研究,并将其分离纯化。通过对GB-2的发酵液中抗菌物质的溶解性测定,可推知是一种极性较大的水溶性物质。超滤实验发现,抗细菌组分能通过截留分子量(COMW)≤1kD的超滤膜。Sephadex LH-20色谱柱分离后,经抗菌活性检测发现两个活性峰,其中第1个峰对蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性最强。将第1个峰的收集液进一步用高效液相色谱(HPLC)纯化,在图谱上出现两个峰,其中第2个峰具有抑菌活性,表明该物质得到了纯化。

关键词：海洋链霉菌GB-2 抗细菌物质溶解性分离和纯化

贵州中药雪里见化学成分分离和纯化的初步研究

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山地农业生物学报 2005年第3期24卷 265-267页

作者：周杰国兴明徐裕彬金辉乐贵州大学生化营养研究所贵州贵阳550025

雪里见Rhizomatum 是天南星科天南星属植物,为我国特有药材[1].其分布于西藏东南部、云南、四川南部、贵州、湖南西南部.

关键词：化学成分分离和纯化贵州中药心脑血管疾病西藏东南部天南星属天南星科跌打损伤毒蛇咬伤治疗效果抑制肿瘤研究结果西南部皮肤癌宫颈癌药材劳伤胰腺