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粘球菌孤立分泌素基因的功能研究

粘球菌孤立分泌素基因的功能研究

作者：李杰山东大学

学位级别：硕士

以DKl622为模式菌株的黄色粘球菌（Myxococcus xanthus）是一类具有复杂发育周期和多细胞行为如细胞密度依赖性生长、群体运动和捕食、子实体形态发生等的G-细菌（Shimkets,1990）。这些特性不仅受到包括胞外基质和细胞间信号等在内的... 详细信息

以DKl622为模式菌株的黄色粘球菌（Myxococcus xanthus）是一类具有复杂发育周期和多细胞行为如细胞密度依赖性生长、群体运动和捕食、子实体形态发生等的G-细菌（Shimkets,1990）。这些特性不仅受到包括胞外基质和细胞间信号等在内的胞外功能的调控,也同时依赖于M. xanthus细胞间或M. xanthus细胞与其他底物间的直接接触。M. xanthus可以向环境中分泌大量的胞外降解酶类,如蛋白酶、溶菌酶、酰胺酶和葡糖胺酶等（Hart ＆ Zahler,1966;Sudo ＆ Dworkin,1972）,但却尚未鉴定出相应的基因和蛋白信息。序列分析显示,*** DK1622基因组编码有蛋白穿越质膜所需的所有分泌系统及一套完整的型蛋白分泌系统（T2SS）（Goldman et al,2006;Konovalova et al.,2010）,提示其拥有蛋白分泌的巨大潜力。但迄今为止尚没有关于粘细菌胞外蛋白质组成和调控的系统研究报道。 Myxococcus fulvus HW-1是本课题组分离的一株海洋耐盐粘球菌,在陆地和海洋生境下存在不同的生活模式（Zhang YQ et al.,2005）.实验室前期研究中发现,外膜蛋白（Omp）基因Omp031的表达在其不同发育模式下存在显著差异。*** DK1622中其同源基因Mxan3106的缺失导致突变株耐盐能力和生孢率显著提高（Pan HW et al.,2009）.生物信息学分析显示,Omp031及Mxan3106均是T2SS中的分泌素（secretin）编码基因,但却是独立于各自基因组中T2SS编码基因簇之外的孤儿基因（orphan gene）。鉴于DKl622中Mxan3106的多功能性,我们推测Omp031可能负责HW-1在特殊生长条件下特殊蛋白的分泌,进而在其不同生长发育模式的转换间发挥作用。对其功能的深入研究将成为粘球菌分泌蛋白质组研究的良好切入点。基于以上分析,本论文主要开展了以下工作： 1、对M. fulvus HW-1的电转化条件进行了优化,证实外源DNA的摄取并非限制该菌株遗传操作的瓶颈因素。在实验室前期建立的基于随机转座质粒pMiniHimar 1-lacZ的HW-1电转化体系的基础上（Zhang CY et al,2007）,以基于pBJl13的同源重组载体为材料,分别从电压、质粒浓度及构象、培养基及培养条件等多方面进行了优化。在所研究的条件下,均未能获得相关基因的敲除突变体,但却均可以获得HW-l的随机转座突变体。王静等人也证实粘球菌可以通过自然转化方式摄取外源DNA （Wang J et al.,2011）。据此推测,限制HW-1遗传操作的瓶颈不是由于其对外源DNA的转化能力低,而是由于其本身DNA重组或限制修饰系统的限制,使得电转化进入胞内的敲除载体无法通过同源重组整合入细菌染色体。但目前仅限于推测,具体的机制还需要系统的深入研究。 2、在DK1622中构建了Mxan3106的全基因缺失突变株YLl601,并对比分析了其与部分缺失突变株YL0401的基本性质。与野生株DKl622相比,YLl601的运动能力没有显著变化,但耐盐生长能力提高、捕食能力降低,这些特征与YL0401的表现一致;但在子实体发育能力上,两株突变株却出现了明显差异：YLl601无论是在普通TPM平板上还是在海水TPM平板上的发育能力都明显弱于野生菌DKl622,而YL0401则正好相反。其中的原因尚待进一步研究。 3、建立了粘球菌胞外蛋白制备方法,利用2-DE技术分离并比较分析了DKl622与YLl601的胞外蛋白质组,筛选鉴定7个Mxan3106特异的分泌蛋白。通过对文献中报道方法的改进,建立了适于粘球菌胞外蛋白提取和纯化的三氯乙酸（TCA）-丙酮沉淀法;利用优化的双向电泳参数,对不同培养条件下野生株DKl622及突变体YLl601的胞外蛋白样品进行了分离。通过图谱比较分析,筛选23个DKl622中特有的蛋白点进行质谱鉴定。其中21个蛋白点得到鉴定。初步分析表明在已经鉴定的18个蛋白中,有7个蛋白预测为胞外蛋白,包括肽酶和金属磷酸酯酶。以上结果不仅证实了Mxan3106的分泌素功能,也为粘球菌胞外蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。

关键词：粘球菌 Ⅱ型蛋白分泌系统分泌素胞外蛋白质组

脐带间充质干细胞来源的分泌素对牙龈组织修复和再生的研究

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脐带间充质干细胞来源的分泌素对牙龈组织修复和再生的研究

作者：李美慧吉林大学

学位级别：硕士

实验目的:本实验研究目的是从细胞和动物两方面探讨脐带间充质干细胞来源的分泌素(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells Secretomes,h UCS)对牙龈组织修复和再生的影响,为脐带间充质干细胞来源的分泌素应用在口腔领域中对牙龈... 详细信息

实验目的:本实验研究目的是从细胞和动物两方面探讨脐带间充质干细胞来源的分泌素(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells Secretomes,h UCS)对牙龈组织修复和再生的影响,为脐带间充质干细胞来源的分泌素应用在口腔领域中对牙龈退缩的临床治疗提供理论支持。实验方法:组织块法提取SD大鼠的原代牙龈成纤维细胞(Gingival Fibroblasts,GFs)并进行传代扩增、冻存与复苏,通过免疫组织化学染色鉴定其来源。运用CCK-8法、细胞划痕法,检测不同浓度的h UCS对GFs的生物学作用,并选择适宜浓度进行后续实验。采用钢丝结扎法建立牙龈退缩的动物模型,将适宜浓度的h UCS局部注射在退缩部位的牙龈,分析组织学染色,q RT-PCR检测纤维相关因子Col-1、Col-3、血管生长因子VEGF表达的结果。实验结果:1、原代大鼠的牙龈成纤维细胞,为长梭形、纺锤形。冻存并复苏牙龈成纤维细胞,两代后其生物学特性与原代细胞相似。免疫组化染色的结果是抗波形蛋白阳性,抗角蛋白阴性,证明是中胚层起源的成纤维细胞。2、细胞实验结果显示h UCS能够促进GFs的增殖和迁移(P分泌素促进牙龈组织的修复和再生的效果显著,hUCS能促进牙龈中纤维相关因子Col-1、Col-3、血管生长因子VEGF表达,因此h UCS具有优异的促进牙龈修复和再生的能力,以及良好的口腔临床治疗潜力。

关键词：脐带间充质干细胞分泌素牙龈成纤维细胞软组织再生

胰分泌素选择性动脉刺激对胃泌素瘤定位的作用

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国际外科学杂志 1991年第1期 47-47页

作者：徐垠

随着H;受体拮抗剂的问世,卓艾综合征的标准治疗方法曾趋向缩小手术的适应证和应用阻滞剂药物,但由于胃泌素瘤有潜在恶变的可能,治疗的重点又回到了胃泌素瘤的切除。这里需要对肿瘤作出定位诊断,才能完成根治性切除。实际上在很多病例较... 详细信息

随着H;受体拮抗剂的问世,卓艾综合征的标准治疗方法曾趋向缩小手术的适应证和应用阻滞剂药物,但由于胃泌素瘤有潜在恶变的可能,治疗的重点又回到了胃泌素瘤的切除。这里需要对肿瘤作出定位诊断,才能完成根治性切除。实际上在很多病例较难做到这点,特别在合并多发性内分泌瘤综合征（MEN-1）以及联合使用降酸手术和H;受体拮抗剂的病例。

关键词：胃泌素瘤手术受体拮抗剂定位诊断卓艾综合征分泌素肠促胰液肽

根据选择性动脉胰分泌素注射试验和术中胰分泌素试验作治愈性多发胃泌素瘤切除

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国际外科学杂志 1990年第2期 113-113页

作者：张延令

作者在术前作选择性动脉胰分泌素注射试验(SASI)以定位胃泌素瘤,并在术中根据胰分泌素试验(IOS)来判断切除范围是否彻底.共收治11例卓艾氏综合征患者,入院前曾按胃溃疡或十二指溃疡治疗,其中2例还做了全胃切除、5例做了胃次全切除,术后... 详细信息

作者在术前作选择性动脉胰分泌素注射试验(SASI)以定位胃泌素瘤,并在术中根据胰分泌素试验(IOS)来判断切除范围是否彻底.共收治11例卓艾氏综合征患者,入院前曾按胃溃疡或十二指溃疡治疗,其中2例还做了全胃切除、5例做了胃次全切除,术后发生吻合口溃疡5例、黑粪8例,诊断卓艾氏综合征的标准为:胃酸过高,血清胃泌素>200pg/ml,肘静脉注射3u/kg胰分泌素后血清胃泌素增加100pg/ml以上.术前作超声、CT、腹腔动脉造影、采门脉血样以及***的检查方法:将导管插入邻近胰腺的动脉,如胃十二指肠动脉、脾动脉、肠系膜上动脉,注射胰分泌素20～30u,在注射后20、

关键词：胃泌素瘤动脉十二指肠小肠术中分泌素肠促胰液肽

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第一个合成的分泌素

国外医学情报 1984年第5期 84-84页

作者：戴玉华

从1983年9月起Hoechst股分公司用Sekretolin首次获得完全合成的分泌素(Sekretin)。此种胃肠道激素的生理作用使其有可能用于治疗胃肠道出血及诊断胰腺外分泌功能。在输注Sekretolin时,胃的基础胃酸及胃泌素刺激后分泌的酸均受到抑止,并... 详细信息

从1983年9月起Hoechst股分公司用Sekretolin首次获得完全合成的分泌素(Sekretin)。此种胃肠道激素的生理作用使其有可能用于治疗胃肠道出血及诊断胰腺外分泌功能。在输注Sekretolin时,胃的基础胃酸及胃泌素刺激后分泌的酸均受到抑止,并促使胰腺的碱性分泌液倾出,使胃液的pH值处于中性范围。在三个对照研究

关键词：分泌素肠促胰液肽功能

11例1型发作性睡病睡眠结构的多导睡眠图分析

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福建医科大学学报 2020年第1期54卷 29-32页

作者：吴美娜林芳王小勇陈海泓季晓林严金柱福建省级机关医院福建卫生职业技术学院附属医院神经内科睡眠医学中心福州350003

目的探讨1型发作性睡病夜间睡眠的结构特点。方法收集1型发作性睡病患者11例和有日间嗜睡但排除相关睡眠疾病的儿童20例。使用多导睡眠监测仪进行整夜(>7 h)连续包括16导脑电图的视频多导睡眠监测(PSG),并于次日进行5次多次小睡潜伏期试... 详细信息

目的探讨1型发作性睡病夜间睡眠的结构特点。方法收集1型发作性睡病患者11例和有日间嗜睡但排除相关睡眠疾病的儿童20例。使用多导睡眠监测仪进行整夜(>7 h)连续包括16导脑电图的视频多导睡眠监测(PSG),并于次日进行5次多次小睡潜伏期试验(MSLT)。结果与对照组比较,1型发作性睡病组在入睡后觉醒时间占总卧床时间的百分比(WASO%)、非快速眼球运动(NREM)1期睡眠期比例(N1%)增加[17.60(13.10)vs 5.00(12.80),P<0.05;(19.93±12.00)vs(10.12±5.63),P<0.05],入睡潜伏期、快速眼球运动(REM)睡眠潜伏期缩短[5.50 min(11.50 min)vs 13.50 min(22.87 min),P<0.05;(93.50±106.61)min vs(157.47±65.74)min,P<0.05],NREM 3期睡眠期比例(N3%)减少[(17.50±5.60)vs(24.48±7.60),P<0.05];但睡眠效率、NREM 2期睡眠期比例(N2%)、REM睡眠期比例(R%)、醒觉指数、睡眠期周期性腿动指数、睡眠呼吸暂停/低通气指数等差别无统计学意义。结论1型发作性睡病患者存在夜间睡眠结构紊乱、睡眠片段化现象。

关键词：发作性睡病睡眠分泌素下丘脑

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“睡不醒”也是病

科学生活 2009年第7期 12-13页

李女士的女儿经常吐舌头、多梦、四肢无力,而且整天打瞌睡,上课、吃饭,甚至连走路都犯困,上五节课能睡四节,严重影响了学习。一高兴就浑身发软,有时甚至倒在地上。这可把李女士给急死了,带女儿去医院看病,可女儿在候诊大厅的椅子上又睡... 详细信息

李女士的女儿经常吐舌头、多梦、四肢无力,而且整天打瞌睡,上课、吃饭,甚至连走路都犯困,上五节课能睡四节,严重影响了学习。一高兴就浑身发软,有时甚至倒在地上。这可把李女士给急死了,带女儿去医院看病,可女儿在候诊大厅的椅子上又睡着了。

关键词：发作性睡病嗜睡症睡眠质量睡眠障碍睡眠时间病理性生理性生活习惯分泌素失眠

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胃肠道激素与有关肽类对胆道运动功能之作用

国际外科学杂志 1977年第4期 173-178页

作者：丁虎林

历史概述本世纪以来,对肝外胆道的生理知识有所进展,主要由于以下几方面: 研究方法和仪器的改进如颈血管交叉循环(carotid to carotid circulation),活体灌注(viviperfusion),灵敏的传感器(Transducer)等。采用麻醉或清醒的各种动物,如:... 详细信息

历史概述本世纪以来,对肝外胆道的生理知识有所进展,主要由于以下几方面: 研究方法和仪器的改进如颈血管交叉循环(carotid to carotid circulation),活体灌注(viviperfusion),灵敏的传感器(Transducer)等。采用麻醉或清醒的各种动物,如:狗,豚鼠,猫等以至人体进行研究。在胆囊、胆总管等脏器,用气囊、导管、或造瘘等不同方法以测定肠胃道激素对它们的各种反应。在体外,用各种激素及其拮抗剂测定在受纳部位的相互影响等等。

关键词：促胰酶素 CCK 分泌素肠促胰液肽胆总管括约肌促胃泌素

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肠肽激素和肠肽激素肿瘤——Ⅰ.肠肽激素

国外医学.创伤与外科基本问题分册 1980年第2期 14-19页

作者：何亮家上海第一医学院附属中山医院外科

1.最近二十多年来,由于研究方法的改进,肠肽激素的研究已进入飞速发展的阶段,肠肽激素的数目逐日增加,它的研究已渗透至基础和临床医学的各个预域,引起各一方面的重视和兴趣。2.肠肽激素是由APUD细胞分泌的多肽化合物,它有各种特异的生... 详细信息

1.最近二十多年来,由于研究方法的改进,肠肽激素的研究已进入飞速发展的阶段,肠肽激素的数目逐日增加,它的研究已渗透至基础和临床医学的各个预域,引起各一方面的重视和兴趣。2.肠肽激素是由APUD细胞分泌的多肽化合物,它有各种特异的生物活性,广泛存在于胃肠道胰腺(GEP)组织、中枢和外周神经。肠肽激素与胃肠道功能和全身很多器官的功能有密切关系。它参与胃肠道和全身各器官功能的调节和控制,形成神经、内分泌、旁分泌三重控制的神经内分泌控制系统。3.肠肽激素分为脑肠肽激素和循环肠肽激素二大类,在胃肠道疾病,神经精神疾病的诊断和治疗上带来崭新的进步和希望。4.本文对广泛性内分泌系统,APUD概念,肠肽激素的功能和作用机制作了扼要的说明,并对脑肠肽激素和肠肽激素逐一作了简要的介绍。

关键词：高血糖素胃酸分泌功能 APUD 肽激素胃泌素促胃液素多肽胃肠道疾病胆囊收缩素抑素神经紧张素分泌素肠促胰液肽