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基于ITS2序列的吴茱萸属植物亲缘关系及分子鉴别研究

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中华中医药杂志 2013年第12期28卷 3681-3684页

作者：吴波高丹张寿文江西中医药大学江西省中药种质资源工程技术研究中心南昌330004

目的:研究吴茱萸药材3种不同基原植物及伪品楝叶吴茱萸的亲缘关系和真伪鉴别。方法:采用DNA条形码技术,对ITS2区段进行PCR扩增和测序,使用MEGA 5.1软件计算种内、种间Kimura-2-parameter遗传距离,采用邻接(NJ)法构建其系统发育树。使用D... 详细信息

目的:研究吴茱萸药材3种不同基原植物及伪品楝叶吴茱萸的亲缘关系和真伪鉴别。方法:采用DNA条形码技术,对ITS2区段进行PCR扩增和测序,使用MEGA 5.1软件计算种内、种间Kimura-2-parameter遗传距离,采用邻接(NJ)法构建其系统发育树。使用DNAstar 5.0软件比对特异性位点。结果:4个物种共18个样本的ITS2序列长度均为220bp,产生了17个单核苷酸多态性位点,其中特异性位点7个;正品吴茱萸药材的3种基原植物种内最大遗传距离为0.023,种间遗传距离为0.036-0.039,与楝叶吴茱萸的最小种间遗传距离为0.042;NJ系统发育树表明:基于ITS2序列聚类的吴茱萸基原植物可与楝叶吴茱萸有效区分,3种基原植物同一品种样本优先聚类,其次是同一产区聚类。结论:ITS2 DNA条形码可以准确有效地用于吴茱萸属植物亲缘关系研究和真伪品的鉴别。

关键词：吴茱萸 ITS2序列亲缘关系分子鉴别

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中国部分地区赫坎按蚊种团的分子鉴别研究

中国媒介生物学及控制杂志 2013年第2期24卷 92-97页

作者：林琳杨曼尼南春燕伍桐马颖李翔宇马雅军第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433 陕西师范大学生命科学学院第二军医大学研究生管理大队临床1队

目的阐明我国各地赫坎按蚊种团成员种的组成。方法依据形态鉴定赫坎按蚊种团成员,种类应用PCR法和分子特征确认,分析的分子特征为rDNAITS2和rDNA28SD3序列。结果对采自我国12个省20个地点的按蚊样本(n=1259)进行分子鉴别结果显示,该研... 详细信息

目的阐明我国各地赫坎按蚊种团成员种的组成。方法依据形态鉴定赫坎按蚊种团成员,种类应用PCR法和分子特征确认,分析的分子特征为rDNAITS2和rDNA28SD3序列。结果对采自我国12个省20个地点的按蚊样本(n=1259)进行分子鉴别结果显示,该研究样本中包括赫坎按蚊种团成员种(n=1237)和其它按蚊3种(n=22);其中赫坎按蚊种团的成员种为中华按蚊、雷氏按蚊、八代按蚊、贵阳按蚊、筠连按蚊、克莱按蚊、比伦按蚊,以及3个未定名种(LL1、LL2和LL3);中华按蚊在大多数采集点密度最大。结论赫坎按蚊种团非常复杂,综合分析确定其成员种类和分布非常重要。

关键词：赫坎按蚊种团分子鉴别

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砂仁及其混伪品益智仁的ISSR分子鉴别

分子植物育种 2021年第2期19卷 562-567页

作者：王梦圆王霞张典王悦吉林农业科技学院吉林132101

为创建砂仁及其主要混伪品益智仁的ISSR分子鉴别方法,以UBC818为引物,对影响ISSR-PCR反应体系的引物、dNTPs、DNA模板、Taq DNA聚合酶和Mg2+浓度进行5因素4水平正交优化试验,并在此基础上筛选阳春砂ISSR引物及砂仁正伪品的鉴别引物。结... 详细信息

为创建砂仁及其主要混伪品益智仁的ISSR分子鉴别方法,以UBC818为引物,对影响ISSR-PCR反应体系的引物、dNTPs、DNA模板、Taq DNA聚合酶和Mg2+浓度进行5因素4水平正交优化试验,并在此基础上筛选阳春砂ISSR引物及砂仁正伪品的鉴别引物。结果表明,20μL阳春砂ISSR-PCR最佳反应体系包括引物0.5μmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、DNA模板40 ng、Taq DNA聚合酶1.2 U、Mg^2+2.0 mmol/L;从52条ISSR引物中筛选出10条阳春砂ISSR引物,从6条阳春砂和益智的共同引物中,筛选出扩增条带清晰、多态性强的砂仁正伪品的鉴别引物UBC808,利用UBC808对15份样品进行验证试验,结果表明鉴别体系稳定性好,可用于砂仁与益智仁的快速、准确鉴别。

关键词：砂仁益智仁 ISSR 分子鉴别

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竹子种质分子鉴别的联合分析

竹子种质分子鉴别的联合分析

作者：任立宁中国林业科学研究院

学位级别：硕士

竹子是禾本科(Poaceae / Gramineae)竹亚科(Bambusoideae)一类植物，是森林生态系统的重要组成部分，其产业、生态和文化价值高。本实验以毛竹(Phyllostachys edulis)为例，选择10份各异种质(花毛竹、龟甲竹、厚壁毛竹、圣音竹、绿皮花... 详细信息

竹子是禾本科(Poaceae / Gramineae)竹亚科(Bambusoideae)一类植物，是森林生态系统的重要组成部分，其产业、生态和文化价值高。本实验以毛竹(Phyllostachys edulis)为例，选择10份各异种质(花毛竹、龟甲竹、厚壁毛竹、圣音竹、绿皮花毛竹、黄槽毛竹、油毛竹、曲秆毛竹、毛竹-M、毛竹-Q)，1份假毛竹和1份桂竹为研究对象，在分别采用AFLP、ISSR、SRAP，ITS、trnL-F进行分子遗传鉴别基础上，研究探讨使用两种或三种联合的方法，即AFLP+SRAP、ISSR+SRAP、AFLP+ISSR、AFLP+ISSR+SRAP、ITS+trnL-F，进行遗传相似性聚类和遗传距离主坐标分析，以汇集更多遗传信息，提高分子鉴别的支持率和分辨率，主要结论如下： (1)实验采用的AFLP、SRAP、ISSR法，扩增种质位点数量分别为440、214、77个，表明其提供的遗传标记信息数量稳定可靠，是供试种质进行分子鉴别适合的遗传标记方法。ITS序列分析有26个变异位点，20个信息位点，变异率为0.0～1.34%;trnL-F序列分析有40个变异位点，19个信息位点，变异率为0.32%～2.06%，适合作为供试种质进行分子鉴别。研究中根据采用引物的扩增位点、特异位点数量，种质鉴别效果分别为：SRAP>AFLP>ISSR，trnL-F>ITS。 (2)综合比较支持率和分辨率，认为分子联合分析的鉴别效果均优于单种鉴别，供试种质联合鉴别效果为：AFLP+ISSR+SRAP>AFLP+SRAP>ISSR+SRAP>AFLP+ISSR;序列鉴别ITS、trnL-F联合分析的结果也优于单序列鉴别。 (3)研究揭示出这些种质的部分分子遗传背景。10份供试毛竹种质的遗传相似系数范围为0.5997～0.8693，遗传距离为0.2038～0.6764，序列同源性范围97.40%～99.9%，变异率范围为0.0～2.06%。研究中发现：厚壁毛竹ITS序列在位点7有一C碱基插入，与毛竹-M有15个位点差异;厚壁毛竹trnL-F序列在位点869有一A碱基缺失，表现出厚壁毛竹作为毛竹的一份特异种质的部分遗传差异。圣音竹trnL-F序列与毛竹-M有14个位点差异。油毛竹、毛竹-Q有其特殊的遗传基础，分子证据支持江其作为毛竹种下变异类型。花毛竹和绿皮花毛竹未表现特殊遗传关系。 (4)研究中，还首次建立了适宜竹子的SRAP-PCR反应体系：20ng模板DNA，2.0mmo1/L Mg，175μmol/L dNTPs，0.2μmol/L引物，1.5U Taq DNA聚合酶，5μl 10×buffer，反应体积50μl，退火温度52℃。在研究中还发现，这份假毛竹种质无论从3种分子遗传标记，还是从2种序列检测，结果都显示其与毛竹种质聚合在一起，没有表现出“外类群”的性状，其原因有待进一步探讨。此外，本研究未能将分子标记与基因序列数据耦合在一起联合进行鉴别分析，需要寻找方法和软件的支持。

关键词：毛竹种质资源 SRAP 基因序列分子鉴别联合分析

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柴胡干根药材的分子鉴别及遗传多样性分析

柴胡干根药材的分子鉴别及遗传多样性分析

作者：郝媛媛山西大学

学位级别：硕士

本文首先简要概述了柴胡的研究概况,并从形态学、细胞、生化研究、DNA分子标记等水平概括了柴胡遗传多样性的研究进展,重点阐述了本研究的研究内容、创新点和研究意义。柴胡是我国的传统常用中药,具有重要的药用价值和经济价值。2... 详细信息

本文首先简要概述了柴胡的研究概况,并从形态学、细胞、生化研究、DNA分子标记等水平概括了柴胡遗传多样性的研究进展,重点阐述了本研究的研究内容、创新点和研究意义。柴胡是我国的传统常用中药,具有重要的药用价值和经济价值。2005版《中华人民共和国药典》记载柴胡的来源为伞形科植物柴胡（Bupleurum Chinese DC.）和狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的干燥根。而柴胡各栽培地的种植来源复杂,加之诸多因素导致所产的药材质量良莠不齐,药材鉴别困难,这就给柴胡资源的研究、保存、评价、利用以及新种质的开发等带来很大困难。本文以14个柴胡栽培品干根药材为材料进行RAPD分析。首先优化了RAPD反应体系中模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度、Taq酶的用量等参数。然后在优化条件下使用筛选出的RAPD特异引物OPD-8对样品进行扩增,得到了RAPD指纹图谱及遗传聚类图。结果可知：当相似性系数为0.930时,各个柴胡样品单独聚为一类,仅使用一条引物就可将供试样品全部区别开来;并获得了优良品种ZQ-T的稳定存在的RAPD特异性标记,记为OPD-82500。接着本文采用了新的数据处理方法,即利用Gene-Snap软件将RAPD图谱中每个泳道的电泳图谱转换为光密度对Rf的曲线。供试样品所具有的曲线分别不同,每个峰代表一个条带。当Rf值为0.365时,只有样品ZQ-T出现了明显的峰,此峰即代表了ZQ-T的特征条带OPD-82500。它可作为重要的分子性状用于快速鉴别该样品,为从分子水平鉴别柴胡干根药材及建立一种新的中药材鉴别方法提供参考。接着本文利用AFLP分子标记技术研究了柴胡不同种、同种不同栽培品间的遗传多样性及亲缘关系,采用筛选出的E-AAC/M-CTA、E-AGG/M-CTG和E-AGG/M-CAA 3对引物构建了14个柴胡干根样品的AFLP指纹图谱。结果表明：14个样品共扩增出106条清晰可辨的条带,其中90条具有多态性,多态性比率为84.91%,多态率最高的引物组合为E-AGG/M-CTG,多态性比率达到86.96%。14个样品间的相似性系数介于0.326-0.848之间,其中7号（LC-L）和8号（LC-T）的相似系数最大,为0.848,它们分别是陵川当地种种于陵川和太谷,说明它们在遗传上具有相对稳定性。并用UPGMA法对14个样品进行了聚类分析,结果表明：相似性系数在0.480时,14个样聚为2大类,10、11号（红柴胡）聚为一类,其余12个样聚为另一类,其中7号和8号最先聚到一起,它们之间的亲缘关系最近。表明了应用AFLP可将北柴胡与红柴胡区分开,该结果与分类学相一致,且红柴胡与其他12个北柴胡栽培种间的遗传相似性系数最小,两者结果相吻合,表明种间差异大于种内差异。

关键词：柴胡干根 RAPD AFLP 分子鉴别遗传多样性

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我国多斑按蚊复合体的分子鉴别及系统学研究

我国多斑按蚊复合体的分子鉴别及系统学研究

作者：李石柱陕西师范大学

学位级别：硕士

蚊虫是一类重要的医学昆虫，其分类研究已有两百多年的历史，已形成了较为成熟的体系架构，但由于蚊虫中存在许多由形态相似的隐种(cryptic species)组成的种团(group)或复合体(complex)，沿用传统的方法对其分类和鉴别较为困难，因此... 详细信息

蚊虫是一类重要的医学昆虫，其分类研究已有两百多年的历史，已形成了较为成熟的体系架构，但由于蚊虫中存在许多由形态相似的隐种(cryptic species)组成的种团(group)或复合体(complex)，沿用传统的方法对其分类和鉴别较为困难，因此，寻找合适的特征和方法成为新世纪蚊虫分类工作者研究的重点内容之一。上世纪八十年代以来，随着现代分子生物学的迅猛发展，生物分类学也已迈入到一个全新的发展时期。将分子生物学方法和技术应用于生物的分类鉴定，以生物大分子(即遗传本质DNA)的特征为依据进行物种鉴别，具有生物分类的根本性价值和意义，一经应用便显示出比形态学、生物化学和细胞学等更为灵敏、客观和稳定，故受到广大学者的肯定和重视。多斑按蚊(广义)Anopheles maculatus s. 1.以往被认为是单一蚊种，通过形态和细胞遗传学研究，发现它是包括至少8个亲缘种的复合体，我国已记述5种，即多斑按蚊、威氏按蚊、塞沃按蚊、达罗毗按蚊和伪威氏按蚊。由于多斑按蚊复合体成员种形态相似，其鉴别特征常有交叉重叠，种内染色体也有多型现象，因此，分类时常易混淆，各成员种间亲缘关系也无共识。本研究应用分子生物学方法和技术，对我国多斑按蚊复合体5成员种进行鉴别，并从分子水平上阐明该复合体成员种间的遗传变异，进而确立其系统发育关系。本研究通过PCR特异扩增我国多斑按蚊复合体5成员种核糖体DNA 28S-D3区和线粒体DNA-COⅡ基因片段，应用DNA单链构象多态(single strand conformation polymorphisms, SSCP)技术分析了5成员种的28S-D3多态现象，进行分子鉴别;随后又测定了28S-D3区和mtDNA-COⅡ基因序列，运用PCGENE、PHYLIP和MEGA2等软件包分析其一级结构和二级结构的差异;并采用距离法、最大简约法和最大似然法构建了我国多斑按蚊复合体5成员种的系统树。获得以下结果： 1、PCR-SSCP分子鉴别我国多斑按蚊复合体5成员种，显示各成员均具种特异电泳带型，多次重复结果稳定，表明SSCP为有效的鉴别方法。分子鉴别的结果进一步证实了染色体核型研究的结果，纠正了形态鉴别的错误。 2、我国多斑按蚊复合体5成员种的28S-D3序列长度范围为388bp～394bp，GC含量为58.12％～59.79％，在种内保守，种内个体间除达罗毗按蚊的云南样本和四川样本间有1个位点突变（THC）外，其余4种在种内个体问未发现变异，而种问存在较大差异，平均差异率为4．59％，差异最大的是达罗毗按蚊与伪威氏按蚊为6．55％，最小的是达罗毗按蚊与多斑拄蚊为2．58％;二级结构分析结果显示5蚊种根据茎SZ上环的数目可分为二种类型：多斑技蚊与达罗毗按蚊仅有一个顶环（C10），而威氏按蚊、塞沃按蚊和伪威氏按蚊则有一个顶环（Cll）和一个茎环（CIO人 mtDNA－CO 11基因序列长度均为 684hp，为一个完整的阅读框，GC含量范围为24．85％－26．02％，其中多斑按蚊、威氏按蚊和达罗毗按蚊种内个体存在差异，差异范围为 0．15％～0．58％，可分别分为 3、2和 2个单倍型;种hJ序列差异较大，为3石6％～9．63％;比较其椎测的氨基酸序列，威氏按蚊、塞沃按蚊、达罗毗按蚊和多斑按蚊（Macu3．5）种问无差异，而多斑按蚊（MaculZ）和伪威氏按蚊与前者则分别有 1个和 6个氨基酸位点的改变。 3、依据2个分子指标，运用多种构建方法重建我国多斑按蚊复合体5成员种的系统发育关系，结果显示系统树因不同的分子指标和不同的构建方法，存在差异，综合分析所获结果，推测核糖体DNA可以提供较多的系统发育信息。 4、在前人研究成果的基础上，通过网络资源共享和分析软件的运用，首次对多斑按蚊复合体在塞蚊亚属内的系统发生关系进行分析，表明在系级水平上多斑按蚊复合体可能与新迈蚊系和迈蚊系的祖先共同起源后独立进化，而系内种间的关系仍需进一步探讨。

关键词：多斑按蚊复合体分子鉴别系统发育关系

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野生和栽培板桥党参的分子鉴别

时珍国医国药 2010年第12期21卷 3272-3273页

作者：罗洪斌张健胡泽华袁德培湖北民族学院医学院湖北恩施445000 利川市人民医院湖北利川445400

目的通过基因测序技术,分析野生和栽培板桥党参的nrDNA-ITS区序列特征,为野生和栽培种的分子鉴定提供分子依据。方法采用PCR直接测序技术测定板桥党参的nrDNA-ITS片段序列,分析野生种板桥党参和栽培种的板桥党参植株之间的遗传差异。结... 详细信息

目的通过基因测序技术,分析野生和栽培板桥党参的nrDNA-ITS区序列特征,为野生和栽培种的分子鉴定提供分子依据。方法采用PCR直接测序技术测定板桥党参的nrDNA-ITS片段序列,分析野生种板桥党参和栽培种的板桥党参植株之间的遗传差异。结果通过对野生种和栽培种板桥党参Dipsacus asperoidesC.Y.cheng et T.M.Ai叶的nrDNA-ITS区序列进行测序,获得了野生种和栽培种板桥党参nrDNA-ITS序列的两个遗传变异位点,具有遗传差异性。结论 DNA测序技术可作为野生种和栽培种板桥党参鉴定准确而有效的分子方法。

关键词：分子鉴别板桥党参野生种栽培种

应用RAPD标记进行茶树优异种质遗传多态性、亲缘关系分析与分子鉴别

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分子植物育种 2004年第3期2卷 385-390页

作者：陈亮杨亚军虞富莲中国农业科学院茶叶研究所农业部茶叶化学工程重点实验室杭州310008

采用RAPD分子标记技术,对茶树优异种质资源的遗传多态性、亲缘关系和分子鉴别进行了研究。结果表明,20个引物在15份优异资源中得到1050个RAPD位点,平均52.5个位点/引物,70个位点/资源。在所获得的137条可重现谱带中,8条是单态的,129条... 详细信息

采用RAPD分子标记技术,对茶树优异种质资源的遗传多态性、亲缘关系和分子鉴别进行了研究。结果表明,20个引物在15份优异资源中得到1050个RAPD位点,平均52.5个位点/引物,70个位点/资源。在所获得的137条可重现谱带中,8条是单态的,129条是多态的,多态性程度达94.2％;引物的多态性相对频度为0.24～0.83,总平均为0.47;遗传距离在0.16～0.62之间,平均为0.37,这可能与我国是茶树的原产地和起源中心有密切关系。RAPD数据的类平均法聚类结果显示,15份资源可划分为3个类群,从相似性系数讨论了资源间的亲缘关系。应用12个引物产生的20个特异标记的存在和11个特异的缺失,可以鉴别所有15份优异茶树种质资源。RAPD可以作为茶树优异种质资源遗传多态性、系统演化和分子鉴别研究的有效手段之一。

关键词： RAPD标记茶树种质资源遗传多态性亲缘关系分子鉴别

先天感染ALV-J对鸡马立克病疫苗免疫保护效果的影响及不同马立克病疫苗的分子鉴别

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先天感染ALV-J对鸡马立克病疫苗免疫保护效果的影响及不同马立克...

作者：韩妮山东农业大学

学位级别：硕士

鸡马立克病(Marek’s disease,MD)是由鸡马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)引起的一种鸡上最常见的T淋巴细胞增生性疾病。疫苗免疫是防控MD的主要措施。目前,我国使用最广泛的是CVI988/Rispens疫苗。然而近年来,有的鸡群免疫CVI... 详细信息

鸡马立克病(Marek’s disease,MD)是由鸡马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)引起的一种鸡上最常见的T淋巴细胞增生性疾病。疫苗免疫是防控MD的主要措施。目前,我国使用最广泛的是CVI988/Rispens疫苗。然而近年来,有的鸡群免疫CVI988/Rispens疫苗后仍有马立克病的发生,影响了我国养禽业的健康发展,造成经济损失。禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)是一种可以引起多种肿瘤性疾病的免疫抑制性病原,它主要通过垂直感染的方式进行传播。流行病学调查显示,MDV感染鸡群常伴发ALV等免疫抑制性病原的共感染,ALV的先天感染有可能是造成免疫CVI988/Rispens疫苗鸡群仍发生MD的原因之一。为证实这一推论,本文通过动物试验人工模拟先天感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)探究对鸡马立克病疫苗免疫保护效果的影响。此外,针对本实验室研发的新型MD疫苗SC9-1株与市场其他疫苗株尚无特异性鉴别方法的问题,建立了区别SC9-1株与其他株MD疫苗的分子鉴别方法。1.先天感染ALV-J对马立克病疫苗免疫保护效果的影响为研究先天感染ALV-J对CVI988/Rispens疫苗免疫保护效果的影响,将200枚SPF鸡胚分为5组,每组40枚。第1、2组为先天感染ALV-J组,在6胚龄时通过卵黄囊途径接种500 TCID0 ALV-J NX0101株。出壳后,第1、2、3、5组鸡颈部皮下免疫CVI988/Rispens疫苗,6日龄对第2、3、4组鸡均以2000 PFU/只的剂量腹腔注射MDV超强毒GX0101。试验期间,观察并记录各组鸡的病变及死亡情况,统计死亡率和肿瘤发生率,对疑似马立克病特有的病变脏器做病理切片;MDV GX0101攻毒后第1、2、3、4、5、6周称量各组鸡的体重;所有鸡10日龄免疫禽流感、新城疫灭活苗,免疫后第3、4、5周检测相应抗体水平;在GX0101攻毒后第1周每组随机选取5只鸡进行剖检,选取胸腺和法氏囊测定免疫器官指数;第2、3、4组在GX0101攻毒后5、10、14、21、28天,每组各随机选取6只鸡采集抗凝血分离淋巴细胞提取DNA,利用荧光定量PCR方法检测GX0101的拷贝数。研究结果表明,先天感染ALV-J增加了CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒鸡的死亡率和肿瘤率,2组死亡鸡中一只鸡肝脏出现肿瘤,1、2、3、4、5各组鸡的死亡率分别为:5.7%、20%、2.9%、37.1%、0%;先天感染ALV-J、CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组鸡的体重与CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组鸡相比,体重显著降低(P分子鉴别方法的建立为了对马立克病病毒meq基因缺失疫苗株SC9-1与商品化MD疫苗CVI988/Rispens株、814株和HVT Fc-126株进行分子鉴别,根据疫苗株SC9-1与其它MD疫苗株的基因组差异,分别针对I型MDV meq基因以及SC9-1基因组中的禽网状内皮组织增殖症病毒-长末端重复序列(REV-LTR)插入片段,设计三对PCR扩增引物,同时合成针对meq基因和REV-LTR片段的地高辛标记探针,通过PCR扩增和核酸斑点杂交方法区分SC9-1株与其他疫苗株。结果表明,使用针对meq基因的引物F1/R1进行PCR扩增,SC9-1株、CVI988/Rispens株、814株分别扩增出184bp、1297bp、1297bp目的片段,HVT Fc-126株没有条带;使用针对meq基因的引物F2/R2进行PCR扩增,CVI988/Rispens株、814株均扩增出746bp目的片段,SC9-1株、HVT Fc-126株均没有条带;使用针对REV-LTR片段设计的引物F3/R3进行PCR扩增,SC9-1株扩增出512bp目的片段,CVI988/Rispens株、814株、HVT Fc-126株均没有条带。同时,使用针对meq基因的探针进行核酸斑点杂交,CVI988/Rispens株、814株均显示阳性结果,SC9-1株、HVT Fc-126株均为阴性;使用针对REV-LTR的探针进行核酸斑点杂交,SC9-1株显示阳性结果,CVI988/Rispens株、814株、HVT Fc-126株均为阴性。因此,利用本研究设计的特异性PCR引物以及探针,通过PCR

关键词：马立克病疫苗禽白血病病毒感染免疫保护分子鉴别