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镰孢属几种植物病原真菌分子核型的研究

菌物系统 1999年第4期18卷 379-384页

作者：尚晓冬郑小波陆家云南京农业大学植保系农业部病虫监测与治理重点开放实验室南京210095

利用脉冲电场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄ－ｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＦＧＥ），研究了４株串珠镰孢（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）、１株尖镰孢（F．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、１株茄镰孢（Ｆ．ｓ... 详细信息

利用脉冲电场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄ－ｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＦＧＥ），研究了４株串珠镰孢（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）、１株尖镰孢（F．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、１株茄镰孢（Ｆ．ｓｏｌａｎｉ）和１株Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．的分子核型以及不同地域和寄主来源的串珠镰孢种内菌株间的分子核型差异。以凝胶包埋法（不破除分生孢子细胞壁）制备供试菌株电泳样本，采用３组条件组合进行电泳，分离出供试串珠镰孢完整染色体ＤＮＡ１０～１３条，分子量分布范围０．７Ｍｂ～６．９Ｍｂ，基因组大小为４２．２６Ｍｂ～４７．７５Ｍｂ；尖镰孢８条，分子量分布范围１．２Ｍｂ～６．７Ｍｂ，基因组大小为３２．２５Ｍｂ；茄镰孢６条，分子量分布范围２．４Ｍｂ～６．３Ｍｂ，基因组大小为２５．２Ｍｂ；Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．９条，分子量分布范围０．８Ｍｂ～６．８Ｍｂ，基因组大小为３６．４５Ｍｂ。结果表明，供试４种镰孢菌染色体数目、ＤＮＡ分子量及基因组大小都有较大不同，分子核型差异较大。不同来源的串珠镰孢种内菌株间分子核型亦有明显差异。

关键词：镰孢属植物病原真菌脉冲电泳分子核型

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四种假丝酵母与其有性型的分子核型比较

菌物系统 2001年第4期20卷 471-474页

作者：白逢彦贾建华中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学开放研究实验室北京100080

用脉冲电泳对四种假丝酵母及各自的有性型,包括Candida guilliermondii—Pichia guilliermondii, Candida krusei—Issatchenkia orientalis, Candida naganishii—Debaryomyces nepalensis和Candida valida—Pichia membranaefaciens,进行了分子核型比较分析, 发现每对无性型-有性型酵母菌均具有相同或相似的染色体DNA分子带型, 而各对之间却具有显著差异,显示了脉冲电泳核型分析在寻找及确证酵母菌无性型-无性型关联中的应用价值。

关键词：假丝酵母属分子核型无性型-有性型关联

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黄花苜蓿和紫花苜蓿分子核型比较

草地学报 2012年第4期20卷 718-723页

作者：窦全文雷云霆王海庆中国科学院西北高原生物研究所青海西宁810008

黄花苜蓿(Medicago falcata L.2n=32)是一种重要的野生豆科牧草,由于其突出的抗逆特性,被认为是用来进行苜蓿改良的优异遗传资源。本研究利用染色体荧光原位杂交技术(FISH),以不同荧光物标记的3种重复序列(5SrDNA,45SrDNA和C0t-1DNA),... 详细信息

黄花苜蓿(Medicago falcata L.2n=32)是一种重要的野生豆科牧草,由于其突出的抗逆特性,被认为是用来进行苜蓿改良的优异遗传资源。本研究利用染色体荧光原位杂交技术(FISH),以不同荧光物标记的3种重复序列(5SrDNA,45SrDNA和C0t-1DNA),对黄花苜蓿和和紫花苜蓿(Medicago sativa L.2n=32)染色体进行了FISH分析和分子核型比较,以期在染色体水平上揭示二者之间的亲缘关系。结果表明:利用上述重复序列可以较好的将苜蓿32条染色体区分为16对特征不同的染色体。黄花苜蓿和紫花苜蓿绝大多数染色体FISH杂交特征表现一致或高度相似性,分子核型无显著区别,因此二者间在遗传上具有高度的相似性。

关键词：黄花苜蓿紫花苜蓿分子核型染色体荧光原位杂交技术

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植物染色体分子核型技术研究进展

北方园艺 2014年第8期 179-183页

作者：张力鹏刘博陈成彬南开大学生命科学学院天津300071

近年来,荧光原位杂交及荧光分带等细胞遗传学技术的发展,提供了更多的染色体信息,使科研工作者能从更精细水平上对植物进行核型分析,更好地分辨基因组内各条非同源染色体,以及进行分化程度小的基因组间的比较。这种核型分析技术为研究... 详细信息

近年来,荧光原位杂交及荧光分带等细胞遗传学技术的发展,提供了更多的染色体信息,使科研工作者能从更精细水平上对植物进行核型分析,更好地分辨基因组内各条非同源染色体,以及进行分化程度小的基因组间的比较。这种核型分析技术为研究染色体行为和变异,单个基因及转基因在基因组内的定位等开辟了新的途径。现在阐述以多色荧光原位杂交(mFISH)、基因组原位杂交(GISH)、染色体绘染(chromosome painting,CP)等荧光原位杂交为基础的染色体分子核型基础上,分析了荧光分带技术(fluorochrome banding)在分子核型中的应用,并对染色体分子核型技术在植物基因组功能研究领域的应用进行了展望。

关键词：分子核型染色体荧光原位杂交荧光分带重复序列

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脉冲电场凝胶电泳与寄生原虫的分子核型研究

国外医学（寄生虫病分册） 1992年第4期19卷 165-168页

作者：陈晓光江静波中山大学生物系

本文简介了脉冲电场凝胶电泳的工作原理和操作程序以及一些寄生原虫(疟原虫、利什曼原虫、锥虫、贾第鞭毛虫和内阿米巴原虫)的分子核型研究概况。

关键词：原虫分子核型脉冲电场凝胶电泳

基于SSR分子标记及qPCR枇杷非整倍体分子核型分析体系的建立

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基于SSR分子标记及qPCR枇杷非整倍体分子核型分析体系的建立

作者：温国西南大学

学位级别：硕士

枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)(2n=2x=34)属于蔷薇科枇杷属植物,是我国南方的主要果树之一,其中枇杷非整倍体对其遗传育种研究具有重要意义。在生物体中,不同基因剂量之间存在微妙而敏感的平衡。通常,整倍体不会改变染色体类型或基... 详细信息

枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)(2n=2x=34)属于蔷薇科枇杷属植物,是我国南方的主要果树之一,其中枇杷非整倍体对其遗传育种研究具有重要意义。在生物体中,不同基因剂量之间存在微妙而敏感的平衡。通常,整倍体不会改变染色体类型或基因的相对剂量。而非整倍体染色体之间的相对剂量是不平衡。非整倍体通常具有特定于分子核型的新表型。当前,检测植物非整倍体分子核型的技术较少,部分现有的技术成本较高,程序也较为繁琐。因此,建立一种快速、简便的枇杷非整倍体分子核型检测技术十分必要。为此,基于非整倍体染色体之间相对剂量的不平衡,本研究开发了一种新方法用于枇杷非整倍体分子核型的检测,命名为“基于SSR分子标记和qPCR组合(SSR-qPCR)的枇杷非整倍体检测方法”。该方法在三倍体枇杷后代中进行了应用,为枇杷非整倍体的快速检测和分子核型的构建提供了技术支撑。主要试验结果如下:1、qPCR引物的筛选(1)以23个不同倍性枇杷株系(品种)(包括22个整倍体和1个非整倍体H39)的基因组DNA为模板,对209对SSR引物进行PCR扩增,筛出无多态性且扩增稳定的SSR引物17对,该17对引物分别位于枇杷的17个连锁群(根据一个已知的枇杷高密度遗传连锁图谱)。(2)将17对SSR引物进行qPCR检测,发现17对SSR引物在22个整倍体枇杷材料中扩增效率相同,溶解曲线均为单一峰,CT值在15至25之间,均是特异性SSR引物,可用于本次试验研究。2、基于SSR-qPCR枇杷非整倍体分子核型分析体系的初步建立以前述筛选的17对SSR引物,利用qPCR对3个整倍体枇杷株系(‘软条白沙’(2x)、‘无核国玉’(3x)、H424(4x))和1个非整倍体枇杷株系H39(2n=39)的基因组DNA进行扩增。在qPCR扩增的指数增长阶段(Ct值在16至24之间)检测PCR扩增产物的量(ΔRn值),在3个整倍体枇杷株系中17个SSR标记的ΔRn比值相近,而H39在5个连锁群的ΔRn值均发生变化。H39在LG3、LG8、LG10、LG16、LG17的ΔRn均值比整倍体高出约41.8%。表明H39在LG3、LG8、LG10、LG16、LG17上分别比二倍体‘软条白沙’多一条染色体。H39的SSR-qPCR结果与染色体制片结果一致,均表明H39有39条染色体。可见,基于该17对SSR引物进行qPCR扩增能检测H39的分子核型。3、其他材料的分子核型鉴定三倍体株系能产生一些非整倍体后代,故本研究以三倍体枇杷株系(品种)的后代为材料,对上述方法进行验证和改进。(1)染色体计数通过染色体制片对部分三倍体自然结果的后代和三倍体与二倍体杂交的后代进行染色体计数。材料主要为:Q24(3x)×‘华白1号’(2x)的9个杂交后代、三倍体枇杷A313的7个开放授粉后代和三倍体枇杷A322的9个开放授粉后代。结果显示:这些三倍体后代中22个为非整倍体,3个为四倍体。(2)SSR-qPCR检测(1)Q24(3x)×‘华白1号’(2x)的后代为了量化SSR-qPCR准确率,使用SSR-qPCR对Q24×‘华白1号’的9个杂交后代进行非整倍化检测,以4个整倍体枇杷株系‘华白1号’(2x)、‘常白1号’(2x)、Q24(3x)、‘华玉无核1号’(3x)为对照。对照材料的ΔRn值在0.84-1.08之间,8个杂交后代的SSR-qPCR结果与染色体制片结果一致,SSR-qPCR检测准确率为88.9%。在枇杷的17个连锁群中均发现三体,8个杂交后代的三体主要分布于LG1,LG2,LG7,LG10,LG13,LG14。(2)三倍体枇杷株系A313、A322的开放授粉后代使用SSR-qPCR对三倍体枇杷株系A313、A322的16个开放授粉后代进行非整倍化检测,以‘大五星’(2x)、A313(3x),A322(3x)等22个已知整倍体枇杷材料为对照。对照材料的ΔRn值在0.81-1.15之间,将SSR-qPCR检测结果与染色体制片结果进行比较,发现SSR-qPCR的检测准确率为62.5%。共检出2个四倍体,3个三体材料和5个五体材料。3个三体材料的三体主要分布于LG1、LG4、LG7、LG9、LG10、LG11、LG12、LG14。5个五体材料的五体主要分布于LG1、LG3、LG4、LG5、LG7、LG8、LG9、LG12、LG13、LG14、LG17。综上所述,本研究筛选出位于枇杷17个连锁群的17个特异性非多态SSR标记,并重新设计了其中6个SSR标记的引物,可用于检测枇杷染色体非整倍性。利用SSR-qPCR对三倍体枇杷的杂交后代和开放授粉后代分别进行分子核型检测,与染色体制片结果比较,SSR-qPCR检测准确率分别为88.9%和62.5%。由此可见,SSR-qPCR可用于建立枇杷非整倍

关键词：枇杷非整倍体 SSR qPCR 分子核型

玉米大斑病菌REMI转化体系的建立和分子核型的初步分析

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玉米大斑病菌REMI转化体系的建立和分子核型的初步分析

作者：刘振盼河北农业大学

学位级别：硕士

本文首先以玉米大斑病菌01-23作为供试菌株，优化了玉米大斑病菌原生质体的制备条件。在原生质体制备条件成熟的基础上分别建立了玉米大斑病菌REMI转化体系与核型分析体系。优化的原生质体制备条件包括：(1)以含1％葡萄糖的PDA作为产... 详细信息

本文首先以玉米大斑病菌01-23作为供试菌株，优化了玉米大斑病菌原生质体的制备条件。在原生质体制备条件成熟的基础上分别建立了玉米大斑病菌REMI转化体系与核型分析体系。优化的原生质体制备条件包括：(1)以含1％葡萄糖的PDA作为产孢培养基;(2)酶解前对酶解材料进行短时涡旋处理;(3)酶解液采用1.25％溶壁酶、1.25％蜗牛酶、1.25％崩溃酶混合液，酶解时间为4h。经过优化后，原生质体的产量有了很大的提高，每毫升酶液可制备10个原生质体。在纯化方面，采用3000g的速度离心10min，原生质体损失最少;先用一层擦镜纸过滤掉大量的菌丝碎片，再用50μM尼龙膜过滤收集原生质体，其纯化效果最佳。在再生方面，原生质体先在液体再生培养基中过夜培养，再在固体再生培养基平板上培养，再生率最高，效果最好。此外，试验中还提出了一种利用菌悬液有效制备原生质体的方法，每毫升酶液可制得2×10～5×10个原生质体。本文以菌种01-23为材料首次成功转化玉米大斑病菌，建立了玉米大斑病菌的REMI转化体系，该体系要点包括：(1)收集并纯化原生质体，于100μLSTC缓冲液中分装10个原生质体：(2)每10个原生质体加入2μg线性PAN7-1和20单位HindⅢ;(3)滴加PTC(PEG6000)前后的冰浴时间均为20min;(4)转化后的原生质体先在RPD过夜培养，转到RPDA中培养2～3天后在培养基上层覆盖10mL含潮霉素B的PDA;(5)潮霉素对菌株01-23抑菌浓度为60μg／mL。在此基础上我们共获得了225个菌株01-23的转化子。对以上所得01-23转化子进行菌落形态、生长量、分生孢子形态、产孢量及致病性等五个生物学特性方面进行观察和测定，并与野生型菌株01-23进行比较。结果发现菌株M-55、M-8和M-11的菌落形态与野生型有明显差异;菌株M-14菌落生长速度较野生型有很明显提高，而菌株M-11生长速度有很明显的下降;菌株M-25丧失产孢能力，且致病力完全丧失;比对照的产孢量降低的菌株有M-36和M-42，比对照的产孢量升高的菌株有M-59和M-68。为了建立一套全面的玉米大斑病菌核型分析体系，本文尝试了冷冻液氮研磨法、直接包埋法、原生质体包埋法制备玉米大斑病菌完整染色体。结果发现：原生质体法是最易制备完整染色体的方法。并利用原生质体技术初步建立了适于对玉米大斑病菌进行核型分析的体系。在此基础上，作者利用脉冲场电泳技术首次得到了玉米大斑病菌A交配型菌株F40的三个染色体条带和陌株a交配型F42两个染色体条带，这表明这两种交配型菌株的染色体是有差异的。

关键词：玉米大斑病菌原生质体 REMI 转化子分子核型

不同位置的滋养层细胞与内细胞团分子核型的关系

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福建轻纺 2021年第12期 2-5页

作者：李成龙叶洲杰杜生荣福建师范大学生命科学学院福建福州350117 福建省妇幼保健院福建医科大学附属医院福建福州350117

本研究分别活检废弃囊胚不同位置的滋养层细胞(Tropheetoderm cell,TE)及内细胞团(Inner cell mass,ICM),通过单细胞扩增技术和二代测序技术,比较不同位置的分子核型。结果表明,囊胚内细胞团细胞的分子核型与邻侧、对侧滋养层细胞的分... 详细信息

本研究分别活检废弃囊胚不同位置的滋养层细胞(Tropheetoderm cell,TE)及内细胞团(Inner cell mass,ICM),通过单细胞扩增技术和二代测序技术,比较不同位置的分子核型。结果表明,囊胚内细胞团细胞的分子核型与邻侧、对侧滋养层细胞的分子核型存在差异,一致率分别为90%和86%,不同位置的滋养层细胞也存在差异性,滋养层细胞的分子核型不能完全代表内细胞团的分子核型。

关键词：囊胚滋养层细胞内细胞团细胞分子核型