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Flow—FISH同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原方法的建立与优化

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第3期30卷 267-272页

作者：詹昱冯茹易正山宋兰林南方医科大学南方医院血液科广州510515 广州市第十二人民医院血液科

目的建立流式荧光原位杂交（flowfluorescence／nsituhybridization，Flow-FISH）同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原的实验方法。方法培养HL60、Raji、Molt4等白血病细胞株，对Flow-FISH同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原的实验方... 详细信息

目的建立流式荧光原位杂交（flowfluorescence／nsituhybridization，Flow-FISH）同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原的实验方法。方法培养HL60、Raji、Molt4等白血病细胞株，对Flow-FISH同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原的实验方法和条件进行摸索、优化，制定相关操作规程及分析策略，初步检测14例急性白血病患者化疗缓解前后端粒长度和分化抗原的变化。结果选择新型染料AlexaFluor647标记的抗体在端粒原位杂交前进行表面抗原免疫标记，然后应用BS3交联剂保存抗原抗体信号，再进行端粒原位杂交及DNA复染，最后应用流式细胞仪及适当的设门分析方法同时测定细胞内端粒长度及细胞表面分化抗原的表达。14例患者缓解后端粒延长，相关抗原表达率下降。结论建立了较稳定可靠的Flow-FISH同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原的实验方法，使单纯的流式细胞术（flowcytometry）和荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）技术得到有机结合，可望成为白血病，特别是不具特异性分子生物学标记的自血病患者相关研究的有效手段。

关键词：流式荧光原位杂交(Flow-FISH) 端粒长度分化抗原白血病

免疫分型分化抗原与儿童B-ALL早期微小残留病的相关性研究

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中国实验血液学杂志 2018年第5期26卷 1301-1308页

作者：王月芳张鸽江咏梅高举四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室检验科四川成都610041 四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室儿童血液科四川成都610041

目的:探讨CCCG-ALL-2015方案治疗儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中免疫分型分化抗原与临床特征及早期微小残留病(MRD)的相关性。方法:回顾性分析132例初诊B-ALL患儿临床资料,应用多参数流式细胞术行免疫分型检测;将诱导化疗后d 19和/或... 详细信息

目的:探讨CCCG-ALL-2015方案治疗儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中免疫分型分化抗原与临床特征及早期微小残留病(MRD)的相关性。方法:回顾性分析132例初诊B-ALL患儿临床资料,应用多参数流式细胞术行免疫分型检测;将诱导化疗后d 19和/或46 MRD> 0.1%作为早期治疗效应截点将患儿分为2组;应用秩和、卡方检验行组间差异比较。结果:CD19(100%)、CD22(99.3%)及cCD79a(97.9%)是诊断B-ALL的特异性指标,交叉髓系抗原主要为CD13和CD33; CD45^-与CD45^+在初诊WBC(Z=6.845, P=0.000)、危险度分级(χ2=8.260, P=0.016)、泼尼松敏感试验(χ~2=18.420,P=0.000)间差异有统计学意义;CD10^-与CD10^+在年龄(Z=6.253, P=0.013)、危险度分级(χ2=6.699, P=0.044)、早期MRD(χ~2=4.951,P=0.026)间差异有统计学意义;结论:在CCCG-ALL-2015方案中,CD10^+与早期MRD有相关性,提示有良好预后,并削弱了CD20与交叉髓系抗原对预后的不良影响。

关键词：急性B淋巴细胞白血病免疫分型分化抗原微小残留病儿童

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抗前列腺分化抗原单克隆抗体的研究

中华外科杂志 1998年第4期36卷 234-236,I044页

作者：钭理强俞莉章邢念增丁义邓方明郭应禄北京医科大学泌尿外科研究所

目的为利用单克隆抗体（ＭＡｂ）结合放射性核素对前列腺癌及其转移灶提供诊断和治疗手段。方法以前列腺癌细胞株ＰＣ－３Ｍ作为免疫原，亮氨酸甲基酯处理经免疫后的脾细胞作融合，产生抗前列腺癌ＭＡｂ（ＹＤＰＣ）。结果ＹＤＰＣ在正... 详细信息

目的为利用单克隆抗体（ＭＡｂ）结合放射性核素对前列腺癌及其转移灶提供诊断和治疗手段。方法以前列腺癌细胞株ＰＣ－３Ｍ作为免疫原，亮氨酸甲基酯处理经免疫后的脾细胞作融合，产生抗前列腺癌ＭＡｂ（ＹＤＰＣ）。结果ＹＤＰＣ在正常前列腺腺管上皮、良性前列腺增生和所有前列腺癌组织表达，其它正常组织除肾小管上皮、肾上腺和汗腺腺管上皮外均不表达。另外，３例前列腺癌淋巴结转移和１例前列腺癌膀胱转移染色均呈阳性，而４例前列腺移行上皮癌则为阴性。荷瘤裸鼠的放射免疫检测初步实验表明在肿瘤部位ＹＤＰＣ有放射性浓聚。结论ＹＤＰＣ识别前列腺分化抗原并且在前列腺癌可继续表达，在前列腺癌的导向诊断和导向治疗方面有潜在的应用价值。

关键词：前列腺肿瘤单克隆抗体基因表达分化抗原

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巨幼细胞性贫血患者粒细胞分化抗原表达特征

中国实验血液学杂志 2013年第4期21卷 969-973页

作者：周海涛柯培锋沈文红陈苏宁王国征广东省中医院检验医学部血液室广东广州510120 江苏省血液研究所国家止血与血栓重点实验室江苏苏州215006

本研究探讨巨幼细胞性贫血(megaloblastic anemia,MA)患者骨髓(bone marrow,BM)粒细胞的分化抗原(cell differentiation antigen,CD)变化。结合骨髓象、血象、血清叶酸、Vit B12含量、细胞遗传学以及有关分子生物学检查等资料,对13例MA... 详细信息

本研究探讨巨幼细胞性贫血(megaloblastic anemia,MA)患者骨髓(bone marrow,BM)粒细胞的分化抗原(cell differentiation antigen,CD)变化。结合骨髓象、血象、血清叶酸、Vit B12含量、细胞遗传学以及有关分子生物学检查等资料,对13例MA患者骨髓细胞的流式细胞术检测结果进行回顾分析,总结MA患者骨髓粒细胞相关特异性分化抗原CD13、CD33、CD15的表达及粒细胞前向散射光(forward scattering light,FSC)、侧向散射光(side scat-ter light,SSC)的信号强度变化特点并与正常人群比较。结果表明:MA患者和正常人的粒细胞表面CD13、CD15、CD33的表达率分别为(44.53±16)%、(96.16±2.67)%、(80.81±14.71)%和(62.33±11.02)%、(99.53±0.46)%、(70.00±7.81)%,其中MA粒细胞CD13、CD15表达率下降(P分化抗原的表达也呈现成熟障碍的特征,这对于临床上诊断MA具有一定的意义。

关键词：巨幼细胞性贫血粒细胞分化抗原

编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第3期20卷 248-252页

作者：马凤蓉阎民孟晓燕赵方萄汪燚史耕先刘音王讯朱立平中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学免疫学教研室

目的　编码 5C5分化抗原全长cDNA的克隆及功能探索。方法　构建人活化B细胞株3D5细胞的λgt11cDNA文库 ,以核苷酸杂交法从cDNA文库中筛选阳性克隆 ,作核苷酸序列分析 ,编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析 ,Northernblot测 5C5mRNA转录本... 详细信息

目的　编码 5C5分化抗原全长cDNA的克隆及功能探索。方法　构建人活化B细胞株3D5细胞的λgt11cDNA文库 ,以核苷酸杂交法从cDNA文库中筛选阳性克隆 ,作核苷酸序列分析 ,编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析 ,Northernblot测 5C5mRNA转录本长度 ,用RT PCR检测 5C5mRNA在不同细胞株的表达 ,观察单抗 5C5 G1对 3D5细胞增殖的影响。结果　从人活化B细胞株 3D5的λgt11cDNA文库筛选到长 90 5bp的 5C5 1cDNA及 75 4bp的 5C5 2cDNA。 5C5 1cDNA序列内有 1个开放阅读框架 (19～ 5 37bp) ,编码 179个aa的蛋白质。此蛋白质内有一穿膜螺旋结构 (94～ 114aa) ,其N端在胞内。 5C5 2cDNA从 16 3到 45 9为开放阅读框架 ,编码 99个aa的蛋白质。从Northernblot见0 9kb左右和 0 7kb左右 2条杂交带。由RT PCR见 5C5mRNA在 3D5细胞强表达 ,在Daudi细胞表达次之 ,在Jurkat细胞表达最弱。单抗 5C5 G1有增强cpBCGF诱导 3D5细胞增殖的作用。结论　长90 5bp的 5C5 1cDNA为 1个全长cDNA。编码 1个膜蛋白 ,可能参与 3D5细胞的增殖反应。

关键词： 5C5 cDNA 亮氨酸拉链蛋白 B细胞分化抗原

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人白细胞分化抗原研究进展

免疫学杂志 1989年第3期5卷 141-149页

作者：白炎军事医学科学院基础所

1989年2月22-25日在维也纳举行的第四届国际人白细胞分化抗原研讨会。对1097个提交本届大会的抗体进行了鉴定比较,划分出33个新抗体类别(表1)。经历届研讨会确认抗体已达78类。其中一些抗体组又进一步划分为亚组。根据各类抗体所识别... 详细信息

1989年2月22-25日在维也纳举行的第四届国际人白细胞分化抗原研讨会。对1097个提交本届大会的抗体进行了鉴定比较,划分出33个新抗体类别(表1)。经历届研讨会确认抗体已达78类。其中一些抗体组又进一步划分为亚组。根据各类抗体所识别主要靶细胞,78类抗体可分成识别T细胞、B细胞、粒系细胞、激活细胞、NK及非谱系(non-Lineage)细胞,血小板等六大类(表2)。

关键词：人白细胞分化抗原

人白细胞分化抗原在哺乳类细胞中的高效转移和表达

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免疫学杂志 1993年第3期9卷 145-151页

作者：王建安朱元晓郑建强陈勇白炎沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

本文应用电转移法将CD4、CD19抗原基因转入Cos7细胞获得高效转移和暂短表达,检测96h抗原阳性频率分别为3.7×10^(-3)和2.6×10^(-3)。将含有人IL-2RcDNA(CD25)的逆转录病毒载体pN-TK-IL-2R转染PA317和2病毒包装细胞系,收集病毒上清感染N... 详细信息

本文应用电转移法将CD4、CD19抗原基因转入Cos7细胞获得高效转移和暂短表达,检测96h抗原阳性频率分别为3.7×10^(-3)和2.6×10^(-3)。将含有人IL-2RcDNA(CD25)的逆转录病毒载体pN-TK-IL-2R转染PA317和2病毒包装细胞系,收集病毒上清感染NIH3T3细胞;病毒滴度可至3.3×10~5CFU/ml,细胞传代40次间接免疫荧光及APAAP法均可见阳性转染细胞;RNA点杂交检测转染细胞有IL-2R基因mRNA转录产物表达。应用PCR方法扩增出逆转录病毒载体上选择标记基因(Neo),结果表明已获得稳定表达人IL-2R基因的转染细胞株。上述基因的转移和表达为有关抗原功能研究、鉴定及筛选相应单克隆抗体提供了有效的途径。

关键词：白细胞分化抗原受体基因表达

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识别髓系分化抗原单克隆抗体的制备

肿瘤 1990年第1期10卷 1-3页

作者：顾宗江张澜生苏州医学院微生物教研室

骨髓造血细胞在分化发育过程中,其细胞表面表达出分化抗原。如因发育阻滞成为白血病时,往往保留着分化抗原。因此研究分化抗原对于了解正常细胞的分化发育过程以及理解正常细胞和白血病细胞之间的关系都有很大帮助。目前研究白细胞分化... 详细信息

骨髓造血细胞在分化发育过程中,其细胞表面表达出分化抗原。如因发育阻滞成为白血病时,往往保留着分化抗原。因此研究分化抗原对于了解正常细胞的分化发育过程以及理解正常细胞和白血病细胞之间的关系都有很大帮助。目前研究白细胞分化抗原主要是采用单克隆抗体。应用单克隆抗体。

关键词：单克隆抗体骨髓造血细胞分化抗原

核干细胞因子特异性短发夹状RNA对HL-60细胞分化抗原和生物学性质的影响

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第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1191-1194页

作者：岳保红朱晓燕张功员孙玲赵小强王清霞刘帅张秋堂张钦宪郑州大学第一附属医院检验科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052 郑州大学第一附属医院血液科郑州450052

目的研究核干细胞因子(nuc leostem in,NS)特异性短发夹状RNA(shRNA)阻断NS基因表达对HL-60白血病细胞分化抗原及生物学性质的影响,探讨NS的生物学功能和与急性白血病的关系以及用于基因治疗的可能性。方法特异性转染试剂和合成的NS短... 详细信息

目的研究核干细胞因子(nuc leostem in,NS)特异性短发夹状RNA(shRNA)阻断NS基因表达对HL-60白血病细胞分化抗原及生物学性质的影响,探讨NS的生物学功能和与急性白血病的关系以及用于基因治疗的可能性。方法特异性转染试剂和合成的NS短发夹状RNA(NS-shRNA)体外直接转染HL-60细胞,采用RT-PCR判断基因阻断效果,MTT法测定转染后细胞增殖能力,流式细胞仪(FCM)测定细胞分化抗原,形态学观察细胞形状和生长状态,血细胞分析仪测定细胞大小、粒度。结果合成的2条NS-shRNA均能明显阻断NS基因表达,抑制率分别为37.82%和71.88%;NS-shRNA能显著抑制HL-60细胞的增殖并存在时间和浓度依赖性,以48 h和10 nmol/L浓度最佳。转染后:分化抗原CD11b、CD33、CD14、CD64、HLA-DR增高,CD38降低,显示有向粒系继续成熟和向单核系重新分化趋势;细胞聚团性减弱,碎片增多,一部分细胞形态变成梭形和长尾形,染色后细胞核紧密,凹陷,髓过氧化物酶(MPO)和α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)活性增强;大小和粒度分析小体积细胞和核碎裂细胞增多。结论NS-shRNA通过阻断NS基因表达,对HL-60细胞有抑制增殖和促分化作用,改变了细胞的生物学性质,使细胞恶性程度有所减弱,并有可能诱发凋亡,在白血病的基因中具有潜在的临床价值。

关键词：核干细胞因子短发夹状RNA 分化抗原生物学性质增殖分化 HL-60细胞