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分化抑制因子1基因对BMP-2促进兔椎间盘软骨终板细胞软骨特性基因表达的影响

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中国修复重建外科杂志 2015年第12期29卷 1547-1552页

作者：周强权正学罗小辑唐可周栩张圆雷涛重庆医科大学附属第一医院骨科重庆400016

目的探讨通过慢病毒干扰细胞分化抑制因子1(inhibitor of differentiation 1,Id1)基因表达,对BMP-2促进兔椎间盘软骨终板细胞软骨特异性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达的影响。方法取新西兰大白兔椎间盘软骨终板组织分离培养软骨终板细胞,... 详细信息

目的探讨通过慢病毒干扰细胞分化抑制因子1(inhibitor of differentiation 1,Id1)基因表达,对BMP-2促进兔椎间盘软骨终板细胞软骨特异性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达的影响。方法取新西兰大白兔椎间盘软骨终板组织分离培养软骨终板细胞,取第2代细胞进行实验。使用绿色荧光蛋白慢病毒、高表达Id1基因慢病毒及RNA干扰(RNA interference,RNAi)Id1基因慢病毒转染椎间盘软骨终板细胞,采用荧光显微镜、实时荧光定量PCR及Western blot法观察慢病毒转染情况以及对细胞Id1基因和蛋白表达的影响。使用上述慢病毒与BMP-2慢病毒共同转染软骨终板细胞,并设置BMP-2慢病毒转染对照,通过实时荧光定量PCR、ELISA法观察Id1基因表达差异对BMP-2促进椎间盘终板软骨细胞合成Ⅱ型胶原和蛋白多糖的影响。结果慢病毒转染对细胞形态无明显影响,高表达Id1基因和RNAi Id1基因慢病毒能有效转染软骨终板细胞,并干扰内源性Id1基因的表达。BMP-2慢病毒和高表达Id1基因慢病毒共同转染软骨终板细胞后,Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因表达和蛋白合成均显著高于BMP-2慢病毒、高表达Id1基因慢病毒单独转染,差异有统计学意义(P1基因表达下降后,软骨终板细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖合成明显下调(P1基因表达上调能协同BMP-2促进软骨终板细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达。

关键词： BMP-2 分化抑制因子1 椎间盘软骨终板细胞基因转染兔

分化抑制因子1重组腺病毒的构建及其动物模型的建立

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重庆医科大学学报 2018年第1期43卷 6-12页

作者：魏杰张祥王石磊靳鑫阳媛师悦嫄牛司强汪德强重庆医科大学检验医学院重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:构建分化抑制因子-1(inhibitor 1 of differentiation,Id1)重组腺病毒(recombinant adenovirus,Rad),并建立Id1过表达的小鼠动物模型。方法:在HEK293细胞中将腺病毒重组质粒Ad Easy-Id1进行包装以获得Id1重组腺病毒(RAd-Id1);通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记法测定腺病毒滴度;通过q RT-PCR和Western blot验证RAd-Id1感染的Hep G2细胞中的Id1过表达效果,用MTS比色法检测RAd-Id1对Hep G2细胞增殖的影响;通过尾静脉注射RAd-Id1的感染方式建立肝组织中过表达Id1的小鼠动物模型,病毒载量梯度实验分PBS空白组、RAd-GFP对照组及RAd-Id1实验组(n=5/组)以测定RAd-Id1感染小鼠的适合载量;病毒感染时间梯度实验每5 d检测1次为1组,共7组(n=5/组)以测定感染小鼠的适合时间;通过Western blot检测小鼠肝组织中Id1的过表达效果及甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表达水平,再采用ELISA检测小鼠血清中Id1的免疫原性及AFP和CEA的表达情况。结果:成功包装获得RAdId1,测得其滴度为1.5×1011 GFU/m L;RAd-Id1感染Hep G2细胞48 h和72 h后,Id1的转录和蛋白水平均明显升高(P0.05)。结论:成功构建了RAdId1及其介导的小鼠动物模型;RAd-Id1可作为细胞水平上研究Id1对肝癌影响的载体工具;AFP和CEA的升高提示Id1可能参与诱导AFP和CEA的表达。

关键词：重组腺病毒分化抑制因子1 肝癌动物模型

分化抑制因子1和3通过Wnt/β联蛋白和Shh通路共同调节结直肠癌细胞的干性

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第4期35卷 265-274页

作者：黄传钟孙艳霞于悦陈韡陈淑萍林万松叶韵斌福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室福建福州350014 福建医科大学基础医学院福建福州350100 福建省肿瘤转化医学重点实验室福建福州350014

目的探讨分化抑制因子3(Id3)协同Id1对结直肠癌细胞干性的影响,并阐明其可能的机制。方法应用慢病毒感染系统Id1短发夹RNA(shRNA)质粒构建Id1单基因敲减(sh-Id1)、sh-Id3和双基因敲减(sh-Id1Id3)的肠癌HCT116细胞株,荧光显微镜下观察荧... 详细信息

目的探讨分化抑制因子3(Id3)协同Id1对结直肠癌细胞干性的影响,并阐明其可能的机制。方法应用慢病毒感染系统Id1短发夹RNA(shRNA)质粒构建Id1单基因敲减(sh-Id1)、sh-Id3和双基因敲减(sh-Id1Id3)的肠癌HCT116细胞株,荧光显微镜下观察荧光强度,实时荧光定量PCR和Western印迹法检测敲减效果。实验分为4组:HCT116空载质粒对照组(简称对照组)、sh-Id1组、sh-Id3组和Sh-Id1Id3组。实时无标记细胞检测技术(RTCA)检测细胞增殖信号,克隆形成实验检测细胞克隆形成数量和直径,流式细胞术AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡,体外无血清悬浮培养法检测细胞成球的数量和大小,流式细胞术检测基因敲减的HCT116细胞CD24和CD133表达;Western印迹法检测基因敲减的HCT116细胞及过表达c-myc后CD24、CD133、EpCAM、Oct4、EZH2、Lgr5和β联蛋白表达水平。结果荧光显微镜下可见对照组、sh-Id1组、sh-Id3组和Sh-Id1Id3组细胞绿荧光率均>90%;实时荧光定量PCR和Western印迹结果显示,与对照组相比,sh-Id1组Id1表达降低(均P抑制因子蛋白水平均明显下降(P抑制剂(SUFU)显著升高(P<0.05)。实验过表达c-myc后,sh-Id1,sh-Id3和sh-Id1Id3降低的干性标志物CD133,Oct4,EZH2,EpCAM和Lgr5蛋白表达均重新上调(P<0.05)。结论Id3和Id1通过Wnt/β联蛋白、Shh通路共同调控直肠癌细胞的干性相关蛋白的表达。

关键词：结直肠癌分化抑制因子1 分化抑制因子3 细胞干性

分化抑制因子1通过调控VEGF-A表达促进骨肉瘤血管生成

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第三军医大学学报 2021年第9期43卷 813-821页

作者：赵郭盛晏铮剑高自然曹亚郭乔楠秦晋陈富重庆医科大学附属第二医院脊柱外科重庆400010 陆军军医大学(第三军医大学)附属第二医院病理科重庆400037

目的观察分化抑制因子1(inhibitor of DNA binding 1,ID1)通过调控血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)表达对骨肉瘤143B细胞血管生成影响,并验证人骨肉瘤组织中ID1与血管生成和VEGF-A表达相关性。方法收... 详细信息

目的观察分化抑制因子1(inhibitor of DNA binding 1,ID1)通过调控血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)表达对骨肉瘤143B细胞血管生成影响,并验证人骨肉瘤组织中ID1与血管生成和VEGF-A表达相关性。方法收集33例人骨肉瘤石蜡组织,利用免疫组化分析ID1表达与微血管密度(microvessel density,MVD)相关性,并结合生物信息学分析,探讨骨肉瘤中ID1与血管生成相关通路及VEGF-A表达的相关性。利用慢病毒和小干扰RNA建立差异表达ID1的143B细胞株,制备相应细胞条件培养基(conditional medium,CM),通过Transwell迁移、小管形成实验,比较各组CM对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVCEs)迁移和成管能力的影响;利用PCR、Western blot、ELISA检测差异表达ID1后143B细胞中VEGF-A的表达。结果生信分析提示ID1参与多条骨肉瘤血管生成相关通路,且VEGF-A与ID1的mRNA表达呈正相关(r=0.2441,P=0.0057)。33例人体骨肉瘤组织中ID1阳性表达组中MVD较ID1阴性组明显增高(P抑制内皮细胞迁移和成管能力(P<0.05)。过表达ID1的143B细胞中VEGF-A表达和分泌显著升高,而敲低ID1表达后143B细胞中VEGF-A表达和分泌降低(P<0.05)。结论ID1可能通过上调骨肉瘤细胞中的VEGF-A表达来促进骨肉瘤血管生成。

关键词：分化抑制因子1 骨肉瘤 VEGF-A 血管生成

分化抑制因子1对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

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中国老年学杂志 2013年第12期33卷 2829-2832页

作者：于游张才全重庆医科大学附属第一医院普外科重庆400016

目的检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响,探讨其在结肠癌增殖中的作用。方法 HT-29转染Id1表达质粒,RT-PCR方法和Western印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况;合成Id-1干... 详细信息

目的检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响,探讨其在结肠癌增殖中的作用。方法 HT-29转染Id1表达质粒,RT-PCR方法和Western印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况;合成Id-1干扰序列转染HT-29细胞后,RT-PCR及Western印迹检测HT-29细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况,采用MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1表达质粒空白组、对照组(空载体组)、过表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.002 99±0.000 687、0.003 49±0.001 34、0.031 3±0.006 05(P抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达,减缓细胞的生长。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1通过Id1↑→VEGF↑途径来影响结肠癌细胞增殖,在肿瘤血管生成中发挥重要作用。Id1有望成为结肠癌治疗的一个新靶点。

关键词：分化抑制因子1 结肠癌 HT-29细胞增殖血管内皮生长因子

分化抑制因子1对鼻咽癌细胞增殖的影响及其途径

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解放军医学杂志 2012年第6期37卷 569-572页

作者：李春燕江山岳渝娟陈晓品重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科重庆400016 重庆医科大学附属第一医院肿瘤科重庆400016

目的探讨分化抑制因子1(Id1)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法体外培养人鼻咽癌细胞NP69、CNE1。合成Id1小分子干扰RNA(siRNA),构建Id1表达载体并分别转染鼻咽癌细胞NP69、CNE1。收集Id1siRNA及对照质粒Scramble转染72h的NP6... 详细信息

目的探讨分化抑制因子1(Id1)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法体外培养人鼻咽癌细胞NP69、CNE1。合成Id1小分子干扰RNA(siRNA),构建Id1表达载体并分别转染鼻咽癌细胞NP69、CNE1。收集Id1siRNA及对照质粒Scramble转染72h的NP69细胞(分别命名为NP69si-Id1、NP69-NC),pcDNA3.1-Id1及对照pcDNA3.1转染48h的CNE1细胞(分别命名为CNE1-Id1、CNE1-Vector),采用RT-PCR及Western blotting检测Id1的表达情况。采用MTT法比较顺铂(DDP)对NP69si-Id1、NP69-NC和CNE1-Id1、CNE1-Vector增殖的影响。采用CalcuSyn软件计算各组细胞对DDP的IC50值。将1μg/ml DDP与鼻咽癌细胞共同孵育24h后,采用Western blo ing检测凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bad的表达及蛋白激酶B(Akt)Thr308和Ser473的磷酸化情况。结果与NP69-NC比较,NP69si-Id1的Id1 mRNA和蛋白水平明显降低;与CNE1-Vector比较,CNE1-Id1的Id1 mRNA及蛋白水平明显升高。NP69si-Id1细胞对DDP的IC50值(0.207±0.008μg/ml)明显低于NP69-NC(0.405±0.009μg/ml,P1-Id1细胞对DDP的IC50值(0.671±0.012μg/ml)明显高于CNE1-Vector(0.445±0.008/ml,P1的Caspase-3断裂带增多,Akt Thr308和Ser473磷酸化减少;与CNE1-Vector比较,CNE1-Id1的Caspase-3断裂带减少,Akt Thr308和Ser473磷酸化增加。结论 Id1可促进鼻咽癌细胞的生长,抵抗DDP诱导的细胞凋亡,其机制可能与增加Akt磷酸化有关。

关键词：分化抑制因子1 鼻咽肿瘤 RNA干扰 AKT途径

分化抑制因子1、3及基质金属蛋白酶9在脑转移瘤组织中的表达及意义

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中华实验外科杂志 2013年第2期30卷 300-302页

作者：李建峰扈玉华董雅兰河北医科大学第四医院神经外科石家庄050000 河北医科大学第二医院神经外科石家庄050000

目的观察分化抑制因子1（Id-1）、Id-3和基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA、蛋白在脑转移瘤组织中的表达，探讨它们在脑转移瘤形成和发展过程中的作用及机制。方法对39例脑转移瘤标本采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学法... 详细信息

目的观察分化抑制因子1（Id-1）、Id-3和基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA、蛋白在脑转移瘤组织中的表达，探讨它们在脑转移瘤形成和发展过程中的作用及机制。方法对39例脑转移瘤标本采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学法，观察Id-1、Id-3、MMP-9mRNA及蛋白表达，并探讨它们表达之间的相关性。结果Id-1、Id-3、MMP-9mRNA在脑转移瘤中的相对表达量分别为0．75±0．07、0．83±0．06、0．72±0．09，明显高于正常脑组织（P〈0．05）；三者蛋白在脑转移瘤中的阳性表达率分别为92．3％、94．9％、79．5％，与正常脑组织比较表达明显增高（P〈0．05）。Id-1、Id-3与MMP-9mRNA及蛋白表达均呈显著正相关（r=0．569，P〈0．01；r=0．386，P〈0．05）。结论Id-1、Id一3、MMP-9在脑转移瘤的形成与发展中发挥重要作用，且三者存在一定的协同作用。

关键词：分化抑制因子1 3 基质金属蛋白酶9 脑转移瘤

分化抑制因子1在乙型肝炎病毒复制、肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及机制研究

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中国比较医学杂志 2020年第2期30卷 90-96页

作者：陆小琴杜锐赵玉强牛司强雅安职业技术学院药学与检验学院四川雅安625000 重庆医科大学附属第一医院医学检验科重庆400016

目的探讨分化抑制因子1(inhibitor of differentiation 1,Id1)在乙型肝炎病毒复制、肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及机制。方法使用RNA干扰技术将HepG2.2.15肝癌细胞株的Id1基因沉默,作为siRNA-Id1组;设计无关序列作为siRNA-Control组;使... 详细信息

目的探讨分化抑制因子1(inhibitor of differentiation 1,Id1)在乙型肝炎病毒复制、肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及机制。方法使用RNA干扰技术将HepG2.2.15肝癌细胞株的Id1基因沉默,作为siRNA-Id1组;设计无关序列作为siRNA-Control组;使用Pifithrin-α抑制siRNA-Id1细胞中p53的表达,作为siRNA-Id1+Pifithrin-α组;将HepG2.2.15肝癌细胞作为Control组。依次使用qRT-PCR、Western blot、ELISA、MTT、流式细胞术检测乙型肝炎病毒的复制、细胞的增殖和凋亡。结果siRNA-Id1组细胞中Id1 mRNA和蛋白的表达量低于siRNA-Control组(P抑制Id1基因沉默后的上述生物学效应(P抑制肝癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与p53的过表达有关。

关键词：分化抑制因子1 乙型肝炎病毒肝细胞癌小分子干扰RNA p53

分化抑制因子1通过诱导上皮间质转化促进肝癌HepG2细胞的侵袭性

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医学研究生学报 2013年第12期26卷 1254-1257页

作者：高璐吕刚孙凯蒋国成张长松李蓉卫立辛第二军医大学附属东方肝胆外科医院肿瘤免疫与基因治疗研究中心上海医学硕士研究生200438 第二军医大学附属东方肝胆外科医院肝外科上海200438 交通大学医学院仁济医院中心实验室上海200127 苏州大学附属肿瘤医院临床肿瘤实验室常州213001

目的分化抑制因子1(inhibitor of differentiation-1,Id-1)作为一种新的癌基因,其过表达可以影响肿瘤的发生发展。文中探讨肝癌HepG2细胞中高表达Id1对E-钙黏蛋白(E-cadherin)与波形蛋白(Vimentin)及在HepG2细胞中对迁移、侵袭能力的影... 详细信息

目的分化抑制因子1(inhibitor of differentiation-1,Id-1)作为一种新的癌基因,其过表达可以影响肿瘤的发生发展。文中探讨肝癌HepG2细胞中高表达Id1对E-钙黏蛋白(E-cadherin)与波形蛋白(Vimentin)及在HepG2细胞中对迁移、侵袭能力的影响。方法将已构建好的PIRES-EGFP-Id1质粒转染于肝癌HepG2细胞,采用Western blot方法检测转染48h后细胞中Id1蛋白的表达;实时定量PCR和免疫荧光方法检测E-cadherin和Vimentin的表达;利用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果转染组Id1蛋白表达明显上调,与空白对照组相比差异有统计学意义(P1的HepG2组48h细胞生长迁移能力明显增强(P1质粒组细胞穿膜数为(32.00±4.04)个,明显多于转染的空质粒组(10.67±3.84)个和空白对照组(9.67±2.72)个,差异有统计学意义(P1高表达可以诱导HepG2细胞上皮向间质转化,提高肝癌HepG2细胞的迁移和侵袭能力,可通过调节E-cadherin和Vimentin发挥作用。

关键词：分化抑制因子1 上皮间质转化肝癌侵袭