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红掌愈伤组织分化培养相关影响因素的研究

中国农学通报 2009年第24期25卷 341-343页

作者：段鹏慧李兴泽王云山山西林业职业技术学院太原030009 山西省农业科学院园艺研究所太原030031

研究了品种、基本培养基、激素处理、愈伤组织切块大小对红掌愈伤组织分化培养的影响。结果表明:相同条件下,不同品种红掌愈伤组织的芽诱导率、生长速度、生长状况相差较大;1/2MS基本培养基中芽诱导效果最好,分化苗粗壮、较高、叶绿;激... 详细信息

研究了品种、基本培养基、激素处理、愈伤组织切块大小对红掌愈伤组织分化培养的影响。结果表明:相同条件下,不同品种红掌愈伤组织的芽诱导率、生长速度、生长状况相差较大;1/2MS基本培养基中芽诱导效果最好,分化苗粗壮、较高、叶绿;激素配比以BA2.0mg/L、NAA0.1mg/L最佳,不定芽分化数量最多,平均每块愈伤组织产生7.44个不定芽;愈伤组织切块为10mm×10mm×8mm时,愈伤块膨大倍数高、不定芽分化数多,且分化苗长势较好。

关键词：红掌愈伤组织分化培养影响因素

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小鼠精原细胞分离及体外分化培养的研究

小鼠精原细胞分离及体外分化培养的研究

作者：王翠玲西北农林科技大学

学位级别：硕士

哺乳动物生殖细胞的分化是保持物种延续不可缺少的方式。精原细胞,特别是其中的精原干细胞是产生精子的源泉,通过体外培养精原细胞获得成熟的精子,对于保护濒临灭绝的物种遗传资源具有重要理论和现实意义。另外,精原干细胞还可以进行体... 详细信息

哺乳动物生殖细胞的分化是保持物种延续不可缺少的方式。精原细胞,特别是其中的精原干细胞是产生精子的源泉,通过体外培养精原细胞获得成熟的精子,对于保护濒临灭绝的物种遗传资源具有重要理论和现实意义。另外,精原干细胞还可以进行体外冷冻保存、遗传操作和移植,因而它对于医学研究、生物学实验和生物技术的研究具有重要的价值。试验采用物理和化学方法相结合,对小鼠的睾丸支持细胞、睾丸间质细胞和精原细胞进行分离、纯化,并进行传代培养和染色鉴定,观察其形态结构和生物学特性。通过添加不同的营养因子或与睾丸支持细胞、睾丸间质细胞和精原细胞共培养,对影响精原干细胞分化的一些因素进行了初步探讨,为进一步建立精原干细胞的体外分化培养体系奠定了基础。本研究主要获得了以下结果。 1.选择16～22d的雄性昆明小白鼠,经过胶原酶和胰蛋白酶分步消化, 0.05M Tris-HCL低渗处理后,平均每个睾丸可获得2×106个睾丸支持细胞,细胞的纯度可达89.87%,活细胞数占总细胞数的95.15%。睾丸支持细胞的贴壁性状良好,在培养至第2d时进入对数生长期,细胞增殖旺盛,至第6d时进入平台期,增殖速度开始减慢,但培养到第7d仍未见有调亡的细胞出现。 2.选择6周龄左右的雄性昆明小白鼠,经过胶原酶和胰蛋白酶限时消化, Percoll密度梯度离心后,获得的睾丸间质细胞能够维持正常的生长特性,活细胞率较睾丸支持细胞有所降低,平均达85.02%。 3.选择7～8d的雄性昆明小白鼠,经过胶原酶和胰蛋白酶限时消化, Percoll密度梯度离心后,精原细胞主要分布于27%-35%的Percoll梯度间。再利用选择性贴壁法,结果获得的精原细胞的纯度达62.50%,但是,单独培养小鼠的睾丸精原细胞至第3d时,细胞即开始出现凋亡现象。 4.在单独培养的精原细胞的培养液中分别添加促卵泡激素（FSH）和睾酮,FSH对睾丸精原细胞的分化无显著的促进作用,睾酮对精原细胞的体外分化培养有一定的促进作用。在培养液中添加成年鼠的睾丸提取液,结果发现,睾丸液对精原的细胞的体外分化有显著的促进作用。睾丸支持细胞、睾丸间质细胞与精原细胞共培养,也能促进睾丸精原细胞的分化,但效果不如睾丸液显著。另外,不同的消化传代方法,对精原细胞的增殖分化和传代数影响也不同。

关键词：精原细胞睾丸支持细胞睾丸间质细胞分离分化培养

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病理学硕士研究生分化培养实践与探索

基础医学教育 2013年第5期15卷 545-546页

作者：叶秀峰李昱重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

不同专业的研究生因学科性质和从事工作种类不同,培养方式相差迥异。文章主要分析病理学专业硕士研究生的分化培养的实践过程,对初步成效和存在的问题进行剖析。

关键词：病理学研究生教育分化培养

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黄芪愈伤组织的诱导及分化培养

甘肃农业科技 2011年第6期42卷 30-32页

作者：马伟明刘效瑞王春明尚虎山甘肃省定西市旱作农业科研推广中心甘肃定西743000

通过对黄芪叶片和茎段愈伤组织进行诱导及分化培养,确定黄芪愈伤组织诱导和分化培养最佳培养基分别为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA和MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA,选择叶片作为外植体优于茎段,愈伤诱... 详细信息

通过对黄芪叶片和茎段愈伤组织进行诱导及分化培养,确定黄芪愈伤组织诱导和分化培养最佳培养基分别为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA和MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA,选择叶片作为外植体优于茎段,愈伤诱导率和直接分化出芽的能力较高。

关键词：黄芪愈伤组织诱导分化培养

霍霍巴组培快繁技术体系研究 Ⅱ.分化和生根培养中的激素配比

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河南农业科学 2004年第11期33卷 22-24,69页

作者：徐进王玉珍罗景兰刘小京刘香玲中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心

研究了霍霍巴茎段初代培养、继代培养和生根培养 3个技术环节的激素配比。结果表明 :以改良MS为基本培养基 ,初代培养的激素配比以 6-BA 2mg/L +GA30 .5mg/L +IBA0 .0 5mg/L为宜 ,诱芽率 1 0 0 %,增殖系数 4.9;在继代培养中 ,若用单激素... 详细信息

研究了霍霍巴茎段初代培养、继代培养和生根培养 3个技术环节的激素配比。结果表明 :以改良MS为基本培养基 ,初代培养的激素配比以 6-BA 2mg/L +GA30 .5mg/L +IBA0 .0 5mg/L为宜 ,诱芽率 1 0 0 %,增殖系数 4.9;在继代培养中 ,若用单激素 6-BA ,1mg/L时即可维持较高的增殖系数 ( 7.8) ;如用 2mg/L 6-BA和 0 .5mg/LGA3,增殖系数达 8.3,可见低浓度GA3和 6-BA组合可以促进霍霍巴多芽的分化 ;使用 6-BA的浓度不宜超过 3mg/L ,因为较高的细胞分裂素明显增加了组培苗超度含水态的比率 ;以改良 1 / 2MS为基本培养基 ,生根培养的激素配比为 3mg/LNAA + 1 .5mg/LIBA + 0 .5mg/LIAA ,培养 2 0d时的生根率达 83%。

关键词：霍霍巴组织培养繁殖性状技术体系分化培养生根培养激素配比

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分化可控的人类鼻粘膜类器官模型的建立

南方医科大学学报 2022年第6期42卷 868-877页

作者：汪珂于言韩日王显文赵云腾唐浩程李刚南方医科大学南方医院耳鼻喉科广东广州510515

目的建立分化程度可控、能够重现来源组织结构和功能的人类鼻粘膜类器官模型。方法采集手术切除的新鲜中鼻甲和鼻息肉组织,将消化过滤的鼻粘膜上皮细胞分为连续“扩增”培养组(EO组)及“扩增-分化”分段培养组(DO组)。分别在基于气液界... 详细信息

目的建立分化程度可控、能够重现来源组织结构和功能的人类鼻粘膜类器官模型。方法采集手术切除的新鲜中鼻甲和鼻息肉组织,将消化过滤的鼻粘膜上皮细胞分为连续“扩增”培养组(EO组)及“扩增-分化”分段培养组(DO组)。分别在基于气液界面进行体外3D类器官培养,通过STR鉴定、电镜及免疫组化染色分别对两组鼻粘膜类器官的结构、细胞组成及纤毛功能进行鉴定。再通过PAS染色对DO组中分化后的鼻粘膜类器官分泌功能进行鉴定。结果整个培养期间,均能生长出直径逐渐增大的空泡状或实心球状3D类器官。培养第16天,DO组多为空泡状类器官,EO组多为实心球状类器官,DO组空泡数比例大于EO组[(21.67±8.57)%vs(54.67±13.26)%,P培养第21天,DO组鼻粘膜类器官扫描及透射电镜显示纤毛超微结构,而EO组多显示出短绒毛结构。免疫组化染色结果显示,呼吸区粘膜主要包含P63(基底细胞)、β-tubulin(纤毛柱状细胞)、MUC5AC(杯状细胞)。相比EO组,DO组类器官纤毛细胞数[(7.95±1.81)%vs(27.04±5.91)%,P0.05)。DO组中分化后的鼻粘膜类器官糖原染色呈阳性表达。结论本研究首次采用“扩增-分化”分段式培养法,培养出能够在体外长期稳定生长、高度拟似来源组织形态结构和功能(纤毛功能及分泌功能),且分化程度可控的鼻粘膜类器官。

关键词：类器官鼻粘膜气液界面分化培养 3D细胞模型

3T3-L1细胞及小鼠子宫颈成纤维细胞的培养和分化为脂肪细胞的研究

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3T3-L1细胞及小鼠子宫颈成纤维细胞的培养和分化为脂肪细胞的研究

作者：李鑫雨山东农业大学

学位级别：硕士

来源于胚胎时期中胚层的成纤维细胞是结缔组织内主要细胞之一。其具有一定的分化能力，参与创伤修复、诱导成骨和成脂肪过程，并在一定条件下与纤维细胞和间充质干细胞可以相互转化。脂肪组织作为内分泌器官参与机体的的许多生理和病理... 详细信息

来源于胚胎时期中胚层的成纤维细胞是结缔组织内主要细胞之一。其具有一定的分化能力，参与创伤修复、诱导成骨和成脂肪过程，并在一定条件下与纤维细胞和间充质干细胞可以相互转化。脂肪组织作为内分泌器官参与机体的的许多生理和病理过程。本课题的另一项研究已证明，分娩期山羊宫颈中含有脂肪细胞，能够分泌影响分娩期子宫颈成熟和分娩的前列腺素E2（PGE2）,但目前关于子宫颈中细胞的分化能力方面国内外尚未报道。因此本实验的目的就是验证分娩期小鼠宫颈中是否也含有脂肪细胞;体外分离和鉴定小鼠宫颈中的成纤维细胞，并对此细胞进行分化脂肪细胞的培养，以3T3-L1小鼠成纤维细胞的分化进行形态对比观察，以揭示宫颈中脂肪细胞的来源。本实验以昆明小白鼠及3T3-L1小鼠成纤维细胞为研究对象。采集分娩时和分娩后小鼠宫颈样本，制作冰冻切片并进行油红O染色;在无菌条件下取空怀小鼠子宫颈，采用组织外植块培养的方法在含胎牛血清的DMEM培养基中进行子宫颈细胞培养，利用不同细胞对胰蛋白酶消化的敏感度不同以对子宫颈成纤维细胞进行分离，通过细胞形态和波形蛋白抗体及角蛋白抗体的细胞免疫化学鉴定成纤维细胞;对3T3-L1小鼠成纤维细胞进行培养、冻存及复苏，并采用含有胰岛素、地塞米松、IBMX以及罗格列酮的低血清浓度DMEM培养基对已分离的成纤维细胞以及已知的3T3-L1小鼠成纤维细胞进行前脂肪细胞或脂肪细胞的分化，通过细胞形态和油红O染色进行定性检测。研究结果表明，分娩时小鼠子宫颈组织冰冻切片油红O染色呈阳性，组织中含有前脂肪细胞或脂肪细胞。培养的原代成纤维细胞沿着组织块向外发散成长，形成细胞晕，细胞成梭形或多角形。分离的细胞用波形蛋白抗体及角蛋白抗体进行荧光鉴定，波形蛋白鉴定呈阳性，角蛋白鉴定呈阴性，说明已成功分离出了成纤维细胞。在分化过程的第4天，即可观察到少量细胞中含有油红O阳性的脂肪滴，在第10天，细胞中开始出现的大脂肪滴聚集，这表明部分细胞已分化成为成熟脂肪细胞。对照组中3T3-L1小鼠成纤维细胞复苏后的存活率为76％。在3T3-L1小鼠成纤维细胞分化为脂肪细胞的过程中，在第4天也可见少量细胞中出现脂肪滴，第8天的细胞中开始出现大脂肪滴聚集，这表明部分细胞已分化为成熟脂肪细胞,但其分化细胞的数量要少于实验组的。本研究成功从小鼠子宫颈组织的原代细胞培养中分离出了成纤维细胞，并使其在体外培养的条件下分化成了成脂肪细胞。

关键词：小鼠子宫颈成纤维细胞脂肪细胞分化培养

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人乳头瘤病毒重组细胞模型应用的研究进展

病毒学报 2023年第1期39卷 245-251页

作者：王馨艺路一平孙峥嵘中国医科大学、附属盛京医院、生物样本库沈阳110000

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)为双链环状小DNA病毒,它不仅能引起黏膜上皮的良性增生,也可以导致癌症如宫颈癌、阴茎癌、口咽癌的发生。HPV重组细胞模型的建立及其分化培养,可以应用于HPV早期感染、HPV感染对宿主细胞生命周... 详细信息

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)为双链环状小DNA病毒,它不仅能引起黏膜上皮的良性增生,也可以导致癌症如宫颈癌、阴茎癌、口咽癌的发生。HPV重组细胞模型的建立及其分化培养,可以应用于HPV早期感染、HPV感染对宿主细胞生命周期影响的研究,也可进一步诱导,用于深入研究DNA损伤修复途径对病毒复制的影响、以及HPV整合机制。本文将主要围绕HPV重组细胞模型的建立、分化培养的方法以及重组细胞模型的应用进行综述。

关键词：人乳头瘤病毒 HPV重组细胞模型分化培养

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玉米胚性愈伤组织诱导与分化的影响因素

华北农学报 2005年第1期20卷 27-30页

作者：高武军孙富丛魏开发卢龙斗王景雪河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 山西农业生物技术研究中心山西太原030021

以玉米自交系黄早4、综31、金黄96B、GY237、478及海921为材料,通过改良培养基上附加成分的组成及浓度,对影响玉米胚性愈伤组织的诱导及分化等几个关键因素进行了研究。结果表明,基因型对玉米胚性愈伤诱导的影响是显著的,而且基因型... 详细信息

以玉米自交系黄早4、综31、金黄96B、GY237、478及海921为材料,通过改良培养基上附加成分的组成及浓度,对影响玉米胚性愈伤组织的诱导及分化等几个关键因素进行了研究。结果表明,基因型对玉米胚性愈伤诱导的影响是显著的,而且基因型和基本培养基之间存在互作;在培养基上附加水解酪蛋白(casein hydrolysate,CH)、L-脯氨酸(L- proline)对于玉米胚性愈伤组织的诱导分化是必要的,而附加L-谷氨酰氨、甘露醇、AgNO3对提高胚性愈伤组织的诱导作用不显著;结果还发现胚性愈伤组织诱导培养基和胚性愈伤组织分化培养基的组合对成苗率有明显的影响作用。

关键词：胚性愈伤组织基本培养基分化培养诱导培养基成苗率互作玉米自交系玉米胚组成材料