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出血性大肠杆菌o157主要毒力因子单克隆抗体的制备

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 122-126页

作者：黄海燕陈萍陈亮任常菲李月红吉林农业大学食品工程学院长春130118 吉林省产品质量技术监督检验院长春130022

目的利用两种抗原制备针对出血性大肠杆菌EHECo157主要毒力因子的特异性单克隆抗体。方法分别用纯化融合蛋白Eae-Stx1/2B和EHECo157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)全菌免疫BALB/C小鼠,通过细胞融合和EHECo157标准株EDL933间接ELISA筛... 详细信息

目的利用两种抗原制备针对出血性大肠杆菌EHECo157主要毒力因子的特异性单克隆抗体。方法分别用纯化融合蛋白Eae-Stx1/2B和EHECo157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)全菌免疫BALB/C小鼠,通过细胞融合和EHECo157标准株EDL933间接ELISA筛选稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,纯化抗体并鉴定。结果纯化融合蛋白免疫获得了2株单抗2H9和3B4,EHECo157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)免疫获得了1株单抗4H7。2H9、3B4和4H7亚类鉴定分别为lgG2b、lgM和lgM;纯化腹水ELISA效价分别为1∶1.28×105、1∶3.2×104、1∶6.4×104,亲和力常数分别为2.9×106、1.4×106、2.6×105。结论3株单克隆抗体均具有较高特异性,2H9效价和亲和力最高,可作为产志贺毒素EHECo157的检测抗体。

关键词：出血性大肠杆菌o157 主要毒力因子单克隆抗体

双抗体夹心ELISA法检测食品中出血性大肠杆菌o15

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食品工业科技 2016年第11期37卷 185-188,194页

作者：黄海燕陈亮陈萍吉林工程职业学院食品工程分院吉林四平136001 吉林农业大学食品安全研究室吉林长春130118

以灭活重组基因工程菌EHEC o157Δler/stx(p BR322::stx1/2B::eae)免疫新西兰大耳白兔获得的兔多抗作为捕获抗体,以针对出血性大肠杆菌o157主要毒力因子的特异性单抗2H9为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA方法并绘制标准曲线用于食品中出... 详细信息

以灭活重组基因工程菌EHEC o157Δler/stx(p BR322::stx1/2B::eae)免疫新西兰大耳白兔获得的兔多抗作为捕获抗体,以针对出血性大肠杆菌o157主要毒力因子的特异性单抗2H9为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA方法并绘制标准曲线用于食品中出血性大肠杆菌o157的定量分析。标准曲线线性方程为y=0.3479x-0.4121,R^2=0.9862。该ELISA的重复性变异系数小于5%,稳定性良好。应用该方法测得出血性大肠杆菌o157∶H7 EDL933的最小检出限为10~3cfu/m L。食品样品接种实验表明:牛肉或猪肉样品接种量为0.08 cfu/g,增菌8 h后可以检出阳性反应;蔬菜和牛奶样品接种量为0.12 cfu/g(m L),增菌10 h后可以检出阳性反应。

关键词：出血性大肠杆菌o157 主要毒力因子双抗体夹心ELISA

EHEC o157Δler/stx(pBR322∷stx 1/2B∷eae)的构建与生物学特性分析

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 631-635页

作者：陈萍冯书章刘军祝令伟周博孙洋军事医学科学院军事兽医研究所

为了获得安全性好，对出血性大肠杆菌具有良好免疫保护作用的疫苗株，本实验以构建的o157△ler／stx基因缺失突变株为载体，将决定特异性粘附的eae全基因插入到质粒pBR322∷stx 1／2B中，构建了基因工程菌o157△ler／six（pBR322∷stx 1... 详细信息

为了获得安全性好，对出血性大肠杆菌具有良好免疫保护作用的疫苗株，本实验以构建的o157△ler／stx基因缺失突变株为载体，将决定特异性粘附的eae全基因插入到质粒pBR322∷stx 1／2B中，构建了基因工程菌o157△ler／six（pBR322∷stx 1／2B∷eae），对该基因工程菌进行生物学特性分析，实验结果表明，该菌正常培养可表达eae；具有粘附HEp-2细胞的特性；该菌培养上清对Vero细胞没有毒性作用；给小鼠口服接种该工程菌后可在肠道中定居至少10d；14日龄小鼠口服活菌量为5×10^9CFU／只，小鼠生长正常，没有出现任何临床症状；该菌通过口服免疫小鼠可以诱导肠道粘膜免疫应答和体液免疫应答。这些结果表明，该工程菌安全性好，免疫原性强，是有价值的预防EHEC o157感染的基因工程疫苗候选株。

关键词：出血性大肠杆菌o157 疫苗 eae stx 1/2B

大肠杆菌o157:H7的免疫捕获PCR快速检测

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食品与发酵工业 2013年第7期39卷 188-192页

作者：陈艳朱小清方水琴郭慧琴刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093 上海慧耘生物科技有限公司上海200437

研究用特异性的出血性大肠杆菌o157:H7单克隆抗体包被处理的PCR管,对样品中的病原菌进行特异性免疫富集,以免疫捕获-PCR(Immunocaptured PCR,IC-PCR)管中捕获到的病原菌作为模板进行PCR扩增。结果显示免疫捕获-PCR对病原菌出血性大肠杆... 详细信息

研究用特异性的出血性大肠杆菌o157:H7单克隆抗体包被处理的PCR管,对样品中的病原菌进行特异性免疫富集,以免疫捕获-PCR(Immunocaptured PCR,IC-PCR)管中捕获到的病原菌作为模板进行PCR扩增。结果显示免疫捕获-PCR对病原菌出血性大肠杆菌o157:H7检测灵敏度达到102CFU/mL,比直接PCR和ELISA提高了103倍;特异性验证实验证实,对其他10株食源性致病菌进行检测均无目标条带。该方法将免疫学和分子生物学检测结合起来,灵敏度高,特异性强,检测周期短,检测迅速,是适合检测一线进行快速检测的新方法。

关键词：出血性大肠杆菌o157 H7 免疫反应 PCR 快速检测