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环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因在大肠杆菌中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1998年第4期30卷 40-44页

作者：王焰玲郑洪武刘旭玲张义正四川联合大学生物工程系

对已克隆的环状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）Ｃ－２的几丁酶基因（Ｃｈｉ１）片段所作的亚克隆分析表明，该几丁酶基因位于１．７ｋｂＰｓｔⅠ－ＳｔｙⅠ片段上。Ｃｈｉ１基因在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏ... 详细信息

对已克隆的环状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）Ｃ－２的几丁酶基因（Ｃｈｉ１）片段所作的亚克隆分析表明，该几丁酶基因位于１．７ｋｂＰｓｔⅠ－ＳｔｙⅠ片段上。Ｃｈｉ１基因在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）ＪＭ１０７，ＤＨ５α，ＸＬ１－ｂｌｕｅ，ＴＧ－１等菌株中均能表达，但表达水平不同，其中ＪＭ１０７的表达活性最高，其胞外几丁酶活性与供体菌Ｃ－２菌株的胞外酶活性几乎相当。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，重组质粒ｐＣＨＩ１所产生的胞外几丁酶分子量为６６ｋＤ，与环状芽孢杆菌Ｃ－２的胞外蛋白质中相应的几丁酶蛋白分子量相同。Ｃｈｉ１基因在大肠杆菌ＪＭ１０７中表达后的细胞定位测定表明，几丁酶不仅存在于胞周间质和胞内，而且大量存在于培养物上清液中。在高产酶时期，胞外、胞周间质和胞内的酶活性分布分别为３５．８％，３２．１％，３２．９％

关键词：环状芽孢杆菌大肠杆菌几丁酶基因亚克隆分析基因表达

环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因在荧光假单胞菌中的表达

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西南民族学院学报（自然科学版） 2002年第1期28卷 55-60页

作者：田刚王焰玲四川大学分子生物学国家重点实验室成都610065

将已克隆到的环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)C-2的几丁酶基因chi1片段克隆到质粒载体pUXBF5中，得到重组质粒pUXCH1，该重组质粒在大肠杆菌中可以表达产生具有生物活性的几丁酶并分泌到胞外．将pUXCH1分别利用感受态法和三亲本杂交... 详细信息

将已克隆到的环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)C-2的几丁酶基因chi1片段克隆到质粒载体pUXBF5中，得到重组质粒pUXCH1，该重组质粒在大肠杆菌中可以表达产生具有生物活性的几丁酶并分泌到胞外．将pUXCH1分别利用感受态法和三亲本杂交法转化荧光假单胞菌(Psendomonas fluorescens)，在含有卡拉霉素的金氏B平板上筛得转化子．但将转化子点种于几丁质平板上却不能产生水解圈，提取细胞内容物后用比色法也没有检测到有效的酶活性．该研究表明环状芽孢杆菌的几丁酶基因chi1已经被成功的整合到荧光假单胞菌的染色体上，但却没有表达或表达效率极低，这可能是由于荧光假单胞菌的表达系统不能正确有效的识别存在于该chi1几丁酶基因片段中的环状芽孢杆菌基因启动子而造成的．

关键词：环状芽孢杆菌荧光假单胞菌几丁酶基因基因表达重组质粒表达效率

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将菜豆几丁酶基因导入苹果砧木的研究

激光生物学报 1998年第3期7卷 163-167页

作者：赵慧宋桂英张光中刘桂珍李港丽张丽华毛勇徐正平王兰岚陈正华中国科学院遗传研究所中国农业大学

以苹果砧木八楞海棠（Ｍａｌｕｓｍｉｃｒｏｍａｌｕｓ）为实验材料，用微束激光穿刺法将菜豆几丁酶基因导入苹果叶片，成功地获得了转基因植株。实验结果表明，以苗龄２６天的小苗上部刚展开的叶片再生频率可达１００％。经高渗缓冲液... 详细信息

以苹果砧木八楞海棠（Ｍａｌｕｓｍｉｃｒｏｍａｌｕｓ）为实验材料，用微束激光穿刺法将菜豆几丁酶基因导入苹果叶片，成功地获得了转基因植株。实验结果表明，以苗龄２６天的小苗上部刚展开的叶片再生频率可达１００％。经高渗缓冲液预处理后用激光微束穿刺导入外源ＤＮＡ可得到较高的转化频率。在１５０个再生叶片中经卡那霉素筛选得到２５株绿苗，经ＰＣＲ扩增检测，３株呈阳性结果，表明外源几丁酶基因已整合到苹果的基因组ＤＮＡ中。

关键词：苹果砧木几丁酶基因微束激光遗传转化

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小麦种子中几丁质酶基因的扩增及序列分析

生物信息学 2007年第1期5卷 1-4页

作者：易图永池田逹哉湖南农业大学生物安全科技学院湖南长沙410128 日本西部农业研究中心育种工学研究室

根据http://***中与小麦几丁质酶基因相关的序列TC187877,设计引物,分别从小麦品种Gamenya和苏麦3号中扩增到大小约为1 000bp的片段。经序列测定和软件分析比较,发现这些片段所编码的蛋白质氨基酸序列,都有CHITINASE-19.1和CHITINASE-1... 详细信息

根据http://***中与小麦几丁质酶基因相关的序列TC187877,设计引物,分别从小麦品种Gamenya和苏麦3号中扩增到大小约为1 000bp的片段。经序列测定和软件分析比较,发现这些片段所编码的蛋白质氨基酸序列,都有CHITINASE-19.1和CHITINASE-19.2的基序,为第II类几丁质酶基因。扩增的核酸序列在GenBank上发表,登录号分别为AY973229和AY973230。

关键词：小麦种子几丁酶基因扩增序列分析

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分子和细胞遗传

麦类文摘 1995年第5期 59-59页

W953692 操纵大麦几丁酶基因糊粉-特异性表达的强化子/沉默基因顺序的识别〔刊,英〕/Leah, R.…//Plant Journal. -1994. 6(4). -579～589〔WBTA.1995. 12(1). 683〕W953693 一种与Dnak类似的植物线粒体热激蛋白HSP68〔刊,英〕/Neumann,... 详细信息

关键词：大麦发育几丁酶基因热激蛋白植物线粒体特异性表达基因顺序细胞遗传标记基因识别糊粉